微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上 2012級(jí)制藥專(zhuān)業(yè)工業(yè)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告 姓名: 劉甜甜 學(xué)號(hào): 班級(jí): 制藥12-2班 指導(dǎo)老師：王健 日期：2014.6.11 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、抑制或殺死微生物的一些物理、化學(xué)及生物的因素抑菌、殺菌的原理。2、掌握物理、化學(xué)及生物的因素抑菌、殺菌的試驗(yàn)方法。3、了解細(xì)菌的形態(tài)特征、染色特點(diǎn)。4、了解細(xì)菌在普通培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、血平板上的菌落特征。5、掌握細(xì)菌分離劃線培養(yǎng)的方法。6、掌握細(xì)菌的初步生化反應(yīng)。7、掌握細(xì)菌密集劃線法，掌握細(xì)菌K-B藥敏紙片法。 二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1 細(xì)菌Grams stain染色，鏡檢，觀察記錄細(xì)菌形態(tài)和特色特征1.1 實(shí)驗(yàn)原理：染色原理：

2、G+菌與G菌細(xì)胞壁不同，G+菌比G菌細(xì)胞內(nèi)核糖核酸鎂鹽含量高，G+菌比G等電點(diǎn)低。1.2 實(shí)驗(yàn)步驟：1.2.1.制片：涂片：取半滴生理鹽水置一潔凈玻片上，以無(wú)菌操作技術(shù)自平板上去菌落少許，與生理鹽水混勻，均勻涂布約1cm2大小，自然干燥； 固定：取含菌膜的玻片與酒精燈火焰上來(lái)回三次，使菌膜牢固附于玻片表面；1.2.2染色：初染：取結(jié)晶紫一到兩滴覆蓋于菌膜表面，輕微搖動(dòng)，維持3040,細(xì)流水沖洗，切勿直接沖洗涂片區(qū)域； 媒染：取盧氏碘液12滴覆蓋菌膜表面，輕微搖動(dòng)，維持3040,用上法細(xì)流水沖洗； 脫色：取95%酒精23滴于菌膜表面，輕微搖動(dòng)，局部接近無(wú)色即可, 用上法細(xì)流水沖洗； 復(fù)染：取1：

3、10稀釋石炭酸復(fù)紅覆蓋涂片區(qū)域，輕微搖動(dòng)，用上法細(xì)流水沖洗； 吸水紙初步吸干玻片水分，然后自然干燥；1.2.3 鏡檢：于涂片區(qū)域加半滴香波油，油鏡（100倍目鏡）下。1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖1：Grams stain（1000×）圖2：染色試驗(yàn)三、分離培養(yǎng)1實(shí)驗(yàn)原理：四區(qū)劃線法是把混雜著在一起的微生物或同一微生物群體的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過(guò)分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)繁殖后生成個(gè)菌落。有時(shí)這些單菌落并非由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)，故必須反復(fù)分離多次才能得到純種。其原理是微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點(diǎn)到線”稀釋而達(dá)到分離的目的。2實(shí)驗(yàn)步驟2.1示教：觀察普通

4、平板、麥康凱平板、血平板、四區(qū)分離劃線平板，手機(jī)攝像。2.2 分離劃線培養(yǎng)： 預(yù)實(shí)驗(yàn)：以滅菌接種環(huán)與普通平板背面做四區(qū)分離劃線； 正式試驗(yàn)：以滅菌接種環(huán)取細(xì)菌少許，在普通平板上劃線，劃線區(qū)域約占整個(gè)平板的1/101/5,劃線間不能有交叉現(xiàn)象； 以滅菌接種環(huán)自第一區(qū)23個(gè)交叉，然后依次分離劃線，約占整個(gè)區(qū)域的1/31/4； 依上法進(jìn)行3、4區(qū)分離劃線； 倒置平皿置37溫箱培養(yǎng)24h，觀察記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，手機(jī)攝像。3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖1：培養(yǎng)前圖2：培養(yǎng)后四、細(xì)菌初步生化反應(yīng)：1實(shí)驗(yàn)原理：具有的細(xì)菌，能催化過(guò)氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。2實(shí)驗(yàn)步驟2.1色素試驗(yàn)：取濾紙條，兩次對(duì)折，以折

5、角小心取菌落少許，小心展開(kāi)，觀察記錄，手機(jī)拍照；2.2 氧化酶試驗(yàn)：取上述含菌濾紙條，滴加氧化酶試劑一滴，觀察記錄，手機(jī)拍照；2.3 觸酶試驗(yàn)：以滅菌接種環(huán)取細(xì)菌少許，置一潔凈玻片表面，另設(shè)NS對(duì)照，各加一滴新制的3%H2O2, 觀察記錄，手機(jī)拍照；3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖3：色素試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)（前）圖4：色素試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)（后）圖5：觸酶試驗(yàn)（前）圖6：觸酶試驗(yàn)（后）五、細(xì)菌藥敏試驗(yàn)：1實(shí)驗(yàn)原理：將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取平板中的水分溶解后并不斷先向紙片周?chē)鷶U(kuò)散，形成遞減的梯度濃度，在紙片周?chē)志鷿舛确秶鷥?nèi)的細(xì)菌的生長(zhǎng)被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的

6、大小反應(yīng)測(cè)試細(xì)菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，并與該藥物對(duì)測(cè)試菌的MIC呈負(fù)相關(guān)（抑菌圈越大，MIC越?。?。 2實(shí)驗(yàn)步驟：2. 1以滅菌接種環(huán)取細(xì)菌少許，與普通平板做密集劃線；2.2 以無(wú)齒鑷小心夾取定量藥效紙片，按六邊形貼于培養(yǎng)及表面，倒置平皿置37溫箱培養(yǎng)24h，觀察記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，手機(jī)拍照。3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：圖7：藥敏培養(yǎng)前圖8：藥敏培養(yǎng)后六實(shí)驗(yàn)分析與討論1無(wú)菌操作：所有取菌種前都要將接種環(huán)滅菌，取菌時(shí)培養(yǎng)基也不能開(kāi)太大的口，取完以后應(yīng)及時(shí)蓋好并放好，以防止菌種被污染。操作應(yīng)當(dāng)在火焰旁做。2冷卻操作：加熱滅菌接種環(huán)后，應(yīng)室溫下冷卻，否則會(huì)因高溫殺死細(xì)菌。3接種操作時(shí)應(yīng)當(dāng)執(zhí)筆式握接種環(huán)，輕輕觸碰菌種，再

7、接種到有生理鹽水的玻片上，太少或者太多對(duì)實(shí)驗(yàn)都有所影響。 4染色操作：邊染色邊輕輕晃動(dòng)以讓染色劑充分覆蓋菌種，沖洗時(shí)不要傾斜太大角度，不可直接對(duì)著菌落沖洗,以防把細(xì)菌沖洗下去。5分離培養(yǎng)瓊脂很軟，劃線時(shí)注意手腕用力，只在其表面劃線。6生化實(shí)驗(yàn)過(guò)程中細(xì)菌出現(xiàn)氣泡說(shuō)明細(xì)菌中有過(guò)氧化氫酶。用試紙取菌種注意是否取到，否則做出來(lái)是無(wú)色的。對(duì)照實(shí)驗(yàn)時(shí)注意菌種沒(méi)有加生理鹽水，而空白對(duì)照式生理鹽水，觸酶實(shí)驗(yàn)時(shí)注意及時(shí)拍照。7藥敏實(shí)驗(yàn)：紙片旁邊出現(xiàn)抑菌環(huán)。貼紙片時(shí)應(yīng)注意力度不要把瓊脂劃破。七實(shí)驗(yàn)小結(jié) 1.革蘭氏染色法除了可以觀察細(xì)菌形態(tài)外還可以鑒別細(xì)菌：不被酒精洗脫色保留藍(lán)紫色的為革蘭氏陽(yáng)（G+），被酒精脫色復(fù)

8、染成紅色的為革蘭氏陰性菌（G）可知細(xì)菌為陰性菌。本次革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈現(xiàn)為紅色的棒狀桿菌，細(xì)菌單個(gè)存在，染色效果非常好，實(shí)驗(yàn)很成功。2.分離培養(yǎng)是培養(yǎng)單一菌種的有效方法，本次試驗(yàn)以小組形式呈現(xiàn)，每組2個(gè)平板，由于操作不熟練，細(xì)菌分布不夠均勻，有部分區(qū)域細(xì)菌并未呈單個(gè)分布，培養(yǎng)后的·細(xì)菌形態(tài)不夠漂亮，與老師相差甚遠(yuǎn)。 3.藥敏試驗(yàn)是探究細(xì)菌在體外培養(yǎng)時(shí)對(duì)不同抗生素敏感性的有效試驗(yàn)。透明圈越大說(shuō)明該藥物對(duì)此細(xì)菌的抑制作用越強(qiáng)。4.生化實(shí)驗(yàn)常用來(lái)鑒定一些形態(tài)和其他方面不易區(qū)別的微生物，是微生物分類(lèi)鑒定的依據(jù)之一。觸酶實(shí)驗(yàn)有氣泡則為陽(yáng)性，無(wú)氣泡·則為陰性。氧化酶實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性變色，陰性

9、不變色。實(shí)驗(yàn)感悟通過(guò)微生物實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)與操作，我認(rèn)識(shí)到了微觀世界的神奇與精彩，神秘而又充滿危險(xiǎn)的微生物世界讓我充滿了好奇感，我曾想我會(huì)為親手將這種繁殖速度快，種類(lèi)繁多，生命力頑強(qiáng)，無(wú)處不在的細(xì)菌，真菌培養(yǎng)出來(lái)而瘋狂！而后我終于親眼見(jiàn)證在工業(yè)微生物的課堂上培養(yǎng)出來(lái)的大腸桿菌！棒狀的大腸桿菌充滿了頑強(qiáng)的生命力，我為見(jiàn)到它而高興！在微生物實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們還學(xué)習(xí)到了顯微鏡的用法，雖然在高中時(shí)我們便已學(xué)過(guò)顯微鏡的用法，但早已忘卻，我用顯微鏡觀察到了呈現(xiàn)紅色的棒狀大腸桿菌。革蘭氏染色實(shí)驗(yàn)中我意識(shí)到了實(shí)驗(yàn)嚴(yán)謹(jǐn)性的重要性，取菌時(shí)需要無(wú)菌操作，只能用大拇指頂開(kāi)皿蓋一個(gè)小口，接種環(huán)需要用酒精燈不斷高溫滅菌，冷卻，取菌時(shí)動(dòng)作需小心，否則取到的只會(huì)是瓊脂，實(shí)驗(yàn)宣告失敗。染色也應(yīng)小心謹(jǐn)慎，時(shí)間必須控制在3040，否則染色效果可能不明顯。這個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)于我們制藥工程的學(xué)生來(lái)說(shuō)是一次難得的體驗(yàn)，這對(duì)于我們以后藥學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究奠定了一個(gè)良好的基礎(chǔ)，同時(shí)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)使我們的眼界開(kāi)闊，讓我意識(shí)到微生物制藥這個(gè)前景很好的研究方向，微生物與生化藥學(xué)一直廣受推崇，這也是一個(gè)新新的研究方向，想從事學(xué)術(shù)研究的同學(xué)可以考慮。微生物學(xué)老師很認(rèn)真負(fù)責(zé)，這也讓我們受益匪淺，王老師教會(huì)我們很多微生物學(xué)知識(shí)，同時(shí)也教會(huì)我們實(shí)驗(yàn)室安全知識(shí)，并且努力讓我們有機(jī)會(huì)去醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室學(xué)習(xí)體驗(yàn)這個(gè)實(shí)驗(yàn)。我喜歡