TBIGRA酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書

1、tbigra酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書Last updated on the afternoon of January 3, 2021人結(jié)核分枝桿菌Y干擾素(TB-IGRA)酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T10pg/ml-240pg/ml使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中結(jié)核分枝桿菌Y-干擾素(TB- IGRA)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人結(jié)核分枝桿菌Y-干擾素(TB-IGRA) 水平。用純化的人結(jié)核分枝桿菌Y-干擾素(TB-IGRA)抗體包被微孔板，制成固相 抗體，往包被單抗的微孔中依次加入結(jié)核分枝桿菌Y-干擾素(T

2、B-IGRA).再與 HRP標(biāo)記的結(jié)核分枝桿菌Y-干擾素(TB-IGRA)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體 復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色， 并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的結(jié)核分枝桿菌Y-干擾素 (TB-IGRA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn) 曲線計算樣品中人結(jié)核分枝桿菌Y-干擾素(TB-IGRA)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml X 1 瓶7終止液6ml X 1 瓶2酶標(biāo)試劑6ml X 1 瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(400pg/ml)XI瓶3酶標(biāo)包被板12孔X8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液XI瓶4樣品稀

3、釋液6ml X 1 瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml X 1 瓶11封板膜2張6顯色劑B液6mlXl/ 瓶12密封袋1個標(biāo)本要求1. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20C。保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。200pg/ml5號標(biāo)準(zhǔn)品1501的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150pl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100pg/ml4號標(biāo)準(zhǔn)品150|xl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150j.il標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液60pg/m

4、l3號標(biāo)準(zhǔn)品150|xl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150j.il標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30pg/ml2號標(biāo)準(zhǔn)品150j.il的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150pl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液15pg/ml1號標(biāo)準(zhǔn)品150卩1的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150pl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2. 加樣:分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50卩1,待測樣品孔中先加 樣品稀釋液40卩1,然后再加待測樣品10卩1 （樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣 品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37C。溫育30分鐘。4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸鐳水30倍稀釋后備

5、用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去， 如此重復(fù)5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50卩1,空白孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50M再加入顯色劑B50pl,輕輕震蕩混勻，37C。避光 顯色15分鐘.10. 終止：每孔加終止液50卩1,終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在 加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品 的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度

6、；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值 計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度， 再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項1 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫肋溶，洗滌時不影響結(jié)果。3 -各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4 .請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍） 后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（xnx5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 .底物請避光保存。7 .嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8 -