級(jí)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)期末復(fù)習(xí)題考試

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（2）理論習(xí)題名詞解釋題1、聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE：在樣品介質(zhì)和聚 丙烯酰胺 凝膠中加入離子 去污劑和強(qiáng)還原劑后，蛋 白質(zhì)亞基的點(diǎn)泳遷移率主要取決于亞基分子量的大小，而電荷因素可以被忽略。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的分子量在15KD到200KD之間時(shí)，電泳遷移率與分子量的對(duì)數(shù)呈 線性關(guān)系，可以用來測(cè)定蛋白質(zhì)亞基的分子 量。2、電泳：帶電顆粒在 電場(chǎng)作用下，向著與其電性相反的電極移動(dòng)，稱為電泳3、層析分離技術(shù)：是一種物理的分離方法，利用多組分混合物中各組分物理化學(xué)性質(zhì)的差別，使各 組分以不同的程度分布在兩個(gè)相中。4、吸附色譜法：利用同一吸附劑對(duì)混合物中不同成分吸附能力的差異，從而使各成分達(dá)到分

2、離目的 的色譜法。5、離子交換層析： 以離子交換劑 為固定相，依據(jù)流動(dòng)相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進(jìn)行可 逆交換時(shí)的結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種層析方法。6、分配層析：根據(jù)一種或多種化合物，在兩種不相融合的溶劑間的分配來分離物質(zhì)的方法。7、親和層析：是利用生物活性物質(zhì)之間的專一親和吸附作用而進(jìn)行的層析方法。是近年來發(fā)展的純 化酶和其他高分子的一種特殊的層析技術(shù)。8、凝膠層析（凝膠色譜）：混合物隨流動(dòng)相經(jīng)過凝膠層析柱時(shí)，由于各組分流經(jīng)體積的差異，使不同 分子量的組分得以分離的層析方法。9、電滲作用：指在電場(chǎng)作用下液體（通常是水）相對(duì)于和它接觸的固定的 固體相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。10、擔(dān)體

3、：擔(dān)體是一種化學(xué)惰性的，多孔性的固體微粒，能提供較大的惰性表面，使 固定液以液膜狀 態(tài)均勻地分布在其表面。11、死時(shí)間：從進(jìn)樣到惰性氣體峰出現(xiàn)極大值的時(shí)間稱為死時(shí)間.。12、保留時(shí)間：被分離樣品組分從進(jìn)樣開始到柱后出現(xiàn)該組分濃度極大值時(shí)的時(shí)間，也即從進(jìn)樣開始 到出現(xiàn)某組分色譜峰的頂點(diǎn)時(shí)為止所經(jīng)歷的時(shí)間，稱為此組分的保留時(shí)間。13、高效液相色譜法：，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同 極性的單一溶劑或不同比 例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì) 試樣的分析。二、填空題1、蛋白質(zhì)分離常用的色譜法有（紙色譜法），（離子交換

4、色譜），（疏水色譜法）和（免疫親和色 譜法）。2、離子交換分離操作中，常用的洗脫方法有（提高離子強(qiáng)度）和（調(diào)節(jié)pH值）。3、根據(jù)分離機(jī)理的不同，色譜法可分為（吸附色譜），（離子交換色譜），（凝膠色譜），（分配色譜）和（親和色譜）。4、聚丙烯酰胺凝膠由（單體丙烯酰胺）和（甲叉雙丙烯酰胺）聚合而成，聚合時(shí)以（過硫酸?。ˋPS） 為催化劑，以（四甲基乙二胺（TEMED）為加速劑。5、離子交換樹脂主要分為（陽離子交換樹脂）和（陰離子交換樹脂）兩類6、氣相色譜儀的核心部件是（ 色譜柱（包括固定相）和檢定器）。7、SDS-PAGEt泳中，SDS的作用是（陰離子去污劑，作用有四：去蛋白質(zhì)電荷、解離蛋白質(zhì)之間

5、的氫鍵、取消蛋白分子內(nèi)的 疏水作用、去多肽折疊），3 前基乙醇的作用是（破壞蛋白質(zhì)的二硫鍵）。8、不連續(xù)體系的SDS-PAG由泳分離蛋白質(zhì)時(shí)，具有（分子篩效應(yīng)）、（）、（）三種效應(yīng)。9、食品中亞硝酸鹽含量測(cè)定中，硼酸主要起到（緩沖溶液的作用）和（）的作用。10、亞硝酸鹽提取過程中，加入的亞鐵氧化鉀及硫酸鋅的作用是（沉淀蛋白質(zhì)）。11、亞硝酸鹽作為食品添加劑允許在食品加工中限量使用，具有（）、（）、和產(chǎn)生風(fēng)味的作用。12、亞硝酸鹽提取過程中， 制作規(guī)范曲線時(shí)，先在弱酸條件下在亞硝酸鹽中加入（），然后再加入（），偶合形成（）染料后，用分光光度法進(jìn)行測(cè)定。13、凝膠層析中，先被洗脫下來的是相對(duì)分子質(zhì)

6、量（大）的分子，而SDS-PAG可跑的快的是相對(duì)分子質(zhì)量（小）的分子。 三、選擇題卜面關(guān)于SDS的說法正確的是:A、常用的變性劑 B、常用的提取試劑C、常用的鹽析劑D、常用的萃取劑2、瓊脂糖凝膠孔徑由（B ）決定的A、交聯(lián)度、瓊脂糖濃度、瓊脂糖密度、顆粒大小3、HPLC是哪種色譜的簡稱：（C ）:A、離子交換色譜B 、氣相色譜、高效液相色譜、凝膠色譜4、針對(duì)配基的生物學(xué)特異性的蛋白質(zhì)分離方法是:(C)A、凝膠過濾、離子交換層析 C、親和層析紙層析5、鹽析法沉淀蛋白質(zhì)的原理是:(B)A、降低蛋白質(zhì)溶液的介電常數(shù)B、中和電荷,破壞水膜與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶性蛋白D、調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液pH到等電點(diǎn)6、蛋白質(zhì)

7、分子量的測(cè)定可采用一下哪種方法:A、離子交換層析B.、親和層析 C、凝膠層析 D、聚酰胺層析D）7、電泳時(shí)pH 值、顆粒所帶的電荷和電泳速度的關(guān)系，下列描述中正確的是：A、 pH 值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn)，顆粒所帶的電荷越多，電泳速度也越慢B、 pH 值離等電點(diǎn)越近，顆粒所帶的電荷越多，電泳速度也越快C、 pH 值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn)，顆粒所帶的電荷越少，電泳速度也越快D、 pH 值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn)，顆粒所帶的電荷越多，電泳速度也越快8、醋酸纖維素薄膜電泳的特點(diǎn)是：（ A）A、分離速度慢、電泳時(shí)間短、樣品用量少B、分離速度快、電泳時(shí)間長、樣品用量少C、分離速度快、電泳時(shí)間短、樣品用量少D、分離速度快、電泳時(shí)間短、樣

8、品用量多9、聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成的凝膠，其優(yōu)點(diǎn)是：（）A、機(jī)械強(qiáng)度好、彈性小、無電滲作用、分辨率高B、機(jī)械強(qiáng)度好、彈性大、有電滲作用、分辨率高C、機(jī)械強(qiáng)度好、彈性大、有電滲作用、分辨率低D、機(jī)械強(qiáng)度好、彈性大、無電滲作用、分辨率高10、人血清清蛋白的等電點(diǎn)為4.64,在pH=7的溶液中向哪極移動(dòng)：（A ）A :正極移動(dòng)；B:負(fù)極移動(dòng)；C:不移動(dòng)；D:不確定。11、凝膠色譜分離的依據(jù)是：（ B ） 。A、固定相對(duì)各物質(zhì)的吸附力不同B、各物質(zhì)分子大小不同C、各物質(zhì)在流動(dòng)相和固定相中的分配系數(shù)不同D、各物質(zhì)與專一分子的親和力不同12、陰離子交換劑：（ C ） 。A、可交換的為陰、陽離子 B、

9、可交換的為蛋白質(zhì)C、可交換的為陰離子 D、可交換的為陽離子13、分配層析中的載體（C ） 。A、對(duì)分離有影響B(tài) 、是固定相 C 、能吸附溶劑構(gòu)成固定相D 、是流動(dòng)相14、吸附色譜分離的依據(jù)是：（ A ） 。A、固定相對(duì)各物質(zhì)的吸附力不同 以 各物質(zhì)分子大小不同C、各物質(zhì)在流動(dòng)相和固定相的分配系數(shù)不同D 、各物質(zhì)與專一分子的親和力不同15、下面哪一種是根據(jù)酶分子專一性結(jié)合的純化方法（A ） 。A、親和層析 B、凝膠層析 C、離子交換層析D、鹽析16、下列關(guān)于正相色譜與反相色譜說法正確的是：（ C）A、正相色譜是指固定相的極性低于流動(dòng)相的極性B、正相色譜層析過程中非極性分子或極性小的分子比極性大的

10、分子移動(dòng)的速度慢C、反相色譜是指固定相的極性低于流動(dòng)相的極性D、反相色譜層析過程中，極性大的分子比極性小的分子移動(dòng)的速度慢17、通過改變pH 值從而使與離子交換劑結(jié)合的各個(gè)組分被洗脫下來，可使用：（ A ）A、陽離子交換劑一般是 pH值從低到高洗脫 B、陽離子交換劑一般是 pH值從高到低洗脫C、陰離子交換劑一般是 pH值從低到高 D、以上都不對(duì)18、氣相色譜的載氣不能用：（ D ）A、 氫氣 B 、氦氣 C 、氮?dú)?D 、氧氣19、高效液相色譜儀的種類很多，但基本上都是由（D ）組成。A、高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、過濾系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)或色譜工作站等五大部分B、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)

11、、記錄系統(tǒng)或色譜工作站四大部分C、高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)四大部分D、高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、記錄系統(tǒng)或色譜工作站等五大部分20、影響電泳分離的主要因素：（ B）A、光照B 、待分離生物大分子的性質(zhì)C 、濕度 D、電泳時(shí)間21、在凝膠過濾（分離范圍是5000400000）中，下列哪種蛋白質(zhì)最先被洗脫下來：（ B ）A.細(xì)胞色素 C （13370） B.肌球蛋白（400000） C.過氧化氫酶（247500）D.血清清蛋白（68500） E.肌紅蛋白（16900）22、氣相色譜柱主要有：（ C ）A、填充柱B 、毛細(xì)管柱C 、A或B D 、A或B及其他23、

12、高效液相色譜是一種快速、靈敏、高效的分離技術(shù)，該技術(shù)可用于：（）A、分配柱層析B、離子交換柱層析C、吸附柱層析 D、上述各種柱層析四、簡答題1 試述凝膠層析分離蛋白質(zhì)的原理？答：將待分離蛋白溶液加在事先填充好的凝膠柱上，用流動(dòng)相連續(xù)不斷的洗脫。由于凝膠顆粒自身是一種具有三維網(wǎng)狀的結(jié)構(gòu)，因此對(duì)于分子量較大的蛋白質(zhì)分子無法進(jìn)入凝膠顆?？紫秲?nèi)部的大分子直接被洗脫下來，分子量小的蛋白質(zhì)分子因?yàn)榭梢赃M(jìn)入凝膠孔隙內(nèi)部而受到很大的阻滯，最晚被洗脫下來，而中等大小的分子，雖然可以進(jìn)入孔隙內(nèi)部但并不深入，受到的阻滯作用不強(qiáng)，因而在兩者之間被洗脫下來。2、不連續(xù)SDS-PAGE 中分離蛋白質(zhì)時(shí)，樣品為什么會(huì)出現(xiàn)濃

13、縮效應(yīng)？（ 1 ）凝膠孔徑的不連續(xù)性：濃縮膠為大孔膠，分離膠為小孔膠。在電場(chǎng)作用下，樣品顆粒在大孔膠中泳動(dòng)的阻力小，移動(dòng)速度快；當(dāng)進(jìn)入小孔膠時(shí)，受到的阻力大，移動(dòng)速度減慢。因而在兩層凝膠交界處，樣品遷移受阻而壓縮成很窄的區(qū)帶。（2）緩沖體系離子成分及 pH值的不連續(xù)性：HCl在任何pH溶液中均易解離出（Cl-）,在電場(chǎng)中遷移 率快，走在最前面稱為快離子。在電極緩沖液中，除有 Tris外，還有甘氨酸（glycine）,其pI=6.0 ,在 pH8.3 的電極緩沖液中，易解離出甘氨酸根（NH 2CH2COO-）， 而在 pH6.7 的凝膠緩沖體系中，甘氨酸解離度僅有0.1%-1%，因而在電場(chǎng)中遷移

14、很慢，稱為慢離子。當(dāng)進(jìn)入pH8.9 的分離膠時(shí)，甘氨酸解離度增加。（ 3）電位梯度的不連續(xù)性：電泳開始后，快離子的快速移動(dòng)會(huì)在其后形成一個(gè)離子強(qiáng)度很低的低電導(dǎo)區(qū)，使局部電位梯度增高，將蛋白質(zhì)濃縮成狹窄的區(qū)帶。4、氣固色譜和氣液色譜的分離原理是什么？氣固色譜的固定相是多孔性的固體吸附劑顆粒。固體吸附劑對(duì)試樣中各組分的吸附能力的不同。因此其分離原理即被分離組分在固體吸附劑中的吸附與脫附的不斷重復(fù)過程。氣液色譜的固定相由擔(dān)體（用來支持固定液的化學(xué)惰性的固體）和固定液（高沸點(diǎn)有機(jī)化合物）所組成。 固定液對(duì)試樣中各組分的溶解能力的不同。因此氣液色譜分離的原理就是被分離組分在氣液兩相間的反復(fù)多次分配過程。

15、5、液相色譜中選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意什么問題？（ 1 ）盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測(cè)器噪聲增加。（ 2）避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞 氧化鋁固定相等。（ 3）試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。（ 4）流動(dòng)相同時(shí)還應(yīng)滿足檢測(cè)器的要求。當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相不應(yīng)有紫外吸收。6、簡述聚丙烯酰胺凝膠電泳特點(diǎn)及應(yīng)用范圍。答：特點(diǎn)：具有機(jī)械強(qiáng)度好、彈性大、透明、化學(xué)穩(wěn)定性高、無電滲作用、設(shè)備簡單、樣品量?。?wg100wg）、分辨率高等。應(yīng)用范圍：可用于蛋白質(zhì)、核酸等分子大小不同的物質(zhì)的分離

16、、定性和定量分析。還可結(jié)合去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS） ，以測(cè)定蛋白質(zhì)亞基的相對(duì)分子質(zhì)量。7、在離子交換層析操作中，怎樣選擇離子交換樹脂？答：1 、對(duì)陰陽離子交換樹脂的選擇：正電荷選擇陽離子交換樹脂，負(fù)電荷選擇陰離子交換樹脂。2、對(duì)離子交換樹脂強(qiáng)弱的選擇：較強(qiáng)的酸性或堿性，選擇選用弱酸性或弱堿性樹脂。3、對(duì)離子交換樹脂離子型的選擇：根據(jù)分離的目的，弱酸或弱堿性樹脂不使用H或0郵。8、在樣品溶解液中 SDS、疏基乙醇、甘油及澳酚蘭的作用分別是什么？SDS 使蛋白質(zhì)變性，用于確定蛋白分子量的聚丙烯酰胺凝膠電泳。也可以用于核酸抽提操作中破壞細(xì)胞壁及裂解核酸-蛋白復(fù)合物。在乳液聚合反應(yīng)中，可充當(dāng)兩相

17、溶液的乳化劑。巰基乙醇用于打開二硫鍵的，使蛋白質(zhì)的四級(jí)或三級(jí)結(jié)構(gòu)被破壞。甘油 使樣品處于下面，不易飄起，并有保護(hù)作用。溴酚藍(lán) 用于顯色，起指示作用。9、 簡述醋酸纖維素薄膜電泳原理及優(yōu)點(diǎn)醋酸纖維薄膜電泳是以醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法。醋酸纖維薄膜由二乙酸纖維素制成，具有均一泡沫樣結(jié)構(gòu)，有強(qiáng)滲透性，對(duì)分子移動(dòng)無阻力。作為區(qū)帶電泳的支持物進(jìn)行蛋白電泳有簡便、快速，樣品用量少等優(yōu)點(diǎn)10、根據(jù)下面的信息確定蛋白質(zhì)的亞基組成。(1)用凝膠過濾測(cè)定，相對(duì)分子質(zhì)量是200 X 103(2)用SDS-PAGE測(cè)定，相對(duì)分子質(zhì)量是 100X103(3)在3 -疏基乙醇存在下用 SDS-PAGE測(cè)定，相對(duì)分

18、子質(zhì)量是 40X 103和60X103答案：凝膠過濾分離的蛋白質(zhì)是處在為變性的狀態(tài)下，如果所測(cè)定的蛋白質(zhì)形狀是相同的或相似的，所測(cè)定的相對(duì)分子質(zhì)量應(yīng)該是相對(duì)較準(zhǔn)確的。SDS-PAGE 測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量時(shí)，如果所測(cè)蛋白是有一條亞基組成的，那么蛋白相對(duì)分子質(zhì)量和凝膠過濾測(cè)定的是一樣的。如果蛋白質(zhì)是由不同亞基形成的，那么所測(cè)定的相對(duì)分子質(zhì)量只是其中一條亞基的相對(duì)分子質(zhì)量。因?yàn)榧尤氲腟DS 能破壞寡聚蛋白亞基間的非共價(jià)作用力，使亞基解聚，因此測(cè)定的是一個(gè)亞基的相對(duì)分子質(zhì)量。如果有3-巰基乙醇存在，則能破壞鏈內(nèi)或鏈間二硫鍵，這種情況下，對(duì)于沒有二硫鍵的亞基來說，測(cè)定的就是亞基的相對(duì)分子質(zhì)量，而如果亞基是由二硫鍵連接的幾條肽鏈組成的，那么測(cè)定的就是每一條肽鏈的相對(duì)分子質(zhì)量。根據(jù)題中所給的信息判斷，該蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量是 200X 103,由兩條相同的亞基組成，每個(gè)亞基的相對(duì)分子質(zhì)量是100 X 103,而每個(gè)亞基又是由兩條借二硫鍵連接的肽鏈組成，相對(duì)分子量是 40X 103 和 60X 103o11、鹽酸萘乙二胺法測(cè)定食品中亞硝酸鹽含量的原理是什么？樣品經(jīng)沉淀分離蛋