微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制

1、微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制質(zhì)量控制概念n細(xì)菌的生長繁殖需要一定的營養(yǎng)條件，為細(xì)菌的生長繁殖需要一定的營養(yǎng)條件，為獲取能力并維持其生長繁殖，細(xì)菌必須從獲取能力并維持其生長繁殖，細(xì)菌必須從外界吸取某些物質(zhì)，包括水分、碳源、氮外界吸取某些物質(zhì)，包括水分、碳源、氮源、無機(jī)鹽和生長因子。不同種類的細(xì)菌源、無機(jī)鹽和生長因子。不同種類的細(xì)菌對營養(yǎng)的要求也不同。對營養(yǎng)的要求也不同。概念n培養(yǎng)基具有適合細(xì)菌生長需要的各種營養(yǎng)培養(yǎng)基具有適合細(xì)菌生長需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，包括微生物生長所需要的水分、碳物質(zhì)，包括微生物生長所需要的水分、碳源、氮源、無機(jī)鹽及某些生長因子（維生源、氮源、無機(jī)鹽及某些生長因子（

2、維生素、輔酶）等。素、輔酶）等。n除此以外，還具備待培養(yǎng)菌適宜生長的酸除此以外，還具備待培養(yǎng)菌適宜生長的酸堿度。堿度。n培養(yǎng)基是人工配制的微生物生活環(huán)境培養(yǎng)基是人工配制的微生物生活環(huán)境分類主要用于增菌用于檢測動(dòng)力及保存菌種用于分離鑒定細(xì)菌分類雙糖鐵培養(yǎng)基SS培養(yǎng)基普通瓊脂培養(yǎng)基血液瓊脂培養(yǎng)基 庖肉培養(yǎng)基概 念n由于不同批次的蛋白胨、浸膏（粉）、瓊由于不同批次的蛋白胨、浸膏（粉）、瓊脂、膽鹽等成分的質(zhì)量及酸堿度不同等，脂、膽鹽等成分的質(zhì)量及酸堿度不同等，影響了培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定性影響了培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定性 。n適宜的培養(yǎng)基制備方法、儲(chǔ)存條件和質(zhì)量適宜的培養(yǎng)基制備方法、儲(chǔ)存條件和質(zhì)量控制是提高優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)

3、基的保證控制是提高優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證主要內(nèi)容n培養(yǎng)基購置、貯存、制備、使用注意事項(xiàng)n培養(yǎng)基質(zhì)量控制n常用菌株保存方法一、培養(yǎng)基購置、貯存、制備、使用注意事項(xiàng) 購置 n依據(jù)依據(jù)ISO/IEC17025ISO/IEC17025檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求求，對培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進(jìn)行評價(jià)后選擇合格的供應(yīng)，對培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進(jìn)行評價(jià)后選擇合格的供應(yīng)商；商；n應(yīng)選擇產(chǎn)品市場信譽(yù)度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證應(yīng)選擇產(chǎn)品市場信譽(yù)度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè)；能力的企業(yè)；n要求生產(chǎn)企業(yè)提供：培養(yǎng)基成分名稱及產(chǎn)品編號、批號、要求生產(chǎn)企業(yè)提供：培養(yǎng)基成分名稱及產(chǎn)品編號、批號、

4、使用前的使用前的pHpH、儲(chǔ)藏信息和有效期、性能評價(jià)和所用測試、儲(chǔ)藏信息和有效期、性能評價(jià)和所用測試菌株、技術(shù)數(shù)據(jù)清單、質(zhì)控證書以及必要的安全菌株、技術(shù)數(shù)據(jù)清單、質(zhì)控證書以及必要的安全/ /危害危害數(shù)據(jù)等材料。數(shù)據(jù)等材料。 驗(yàn)收n購買的培養(yǎng)基到貨后，應(yīng)有專人做好接受和驗(yàn)收購買的培養(yǎng)基到貨后，應(yīng)有專人做好接受和驗(yàn)收工作，應(yīng)仔細(xì)核對生產(chǎn)企業(yè)提供的資料、培養(yǎng)基工作，應(yīng)仔細(xì)核對生產(chǎn)企業(yè)提供的資料、培養(yǎng)基名稱、規(guī)格數(shù)量、外觀特征、批號、保質(zhì)期是否名稱、規(guī)格數(shù)量、外觀特征、批號、保質(zhì)期是否符合要求。符合要求。n每批培養(yǎng)基到貨物后都應(yīng)對培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行檢每批培養(yǎng)基到貨物后都應(yīng)對培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行檢測，滿足檢測

5、方法規(guī)定的要求后方可投入使用。測，滿足檢測方法規(guī)定的要求后方可投入使用。 培養(yǎng)基的儲(chǔ)存培養(yǎng)基的儲(chǔ)存 n干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處，要避免陽光直干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處，要避免陽光直射；未開瓶的培養(yǎng)基在室溫下的最長保存射；未開瓶的培養(yǎng)基在室溫下的最長保存2年，年，開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并在開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并在6個(gè)月內(nèi)用完。應(yīng)定期對儲(chǔ)存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)個(gè)月內(nèi)用完。應(yīng)定期對儲(chǔ)存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查，如容器密閉性復(fù)查、首次開封日期、內(nèi)容檢查，如容器密閉性復(fù)查、首次開封日期、內(nèi)容物的感官檢查，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常物的感官檢查，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異

6、常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。 培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備 n制備培養(yǎng)基用容器不得為銅鍋或鐵鍋，以防有離制備培養(yǎng)基用容器不得為銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長。子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長。n所有容器在使用前都要根據(jù)不同的情況，經(jīng)過一所有容器在使用前都要根據(jù)不同的情況，經(jīng)過一定的處理，洗刷干凈。有的還要進(jìn)行包裝，經(jīng)過定的處理，洗刷干凈。有的還要進(jìn)行包裝，經(jīng)過滅菌等準(zhǔn)備就緒后，才能使用。滅菌等準(zhǔn)備就緒后，才能使用。n容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養(yǎng)基溢出。上，避免在加

7、熱溶解過程中，培養(yǎng)基溢出。 培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備 n培養(yǎng)基制備用水中不能含有任何抑制或影培養(yǎng)基制備用水中不能含有任何抑制或影響微生物生長的物質(zhì)。響微生物生長的物質(zhì)。n使用蒸餾水或與其同質(zhì)的水。使用蒸餾水或與其同質(zhì)的水。n最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。 培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備 n每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)基每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)基名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號，名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號，最終最終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等，記錄復(fù)制復(fù)制一份，原記錄和制備者等，記錄復(fù)

8、制復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳椋瑥?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同保存?zhèn)洳?，?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。存放、以防發(fā)生混亂。培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備 n培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂，最好一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴣y，最好一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?cè)，每稱完一種成分即在配方面軍做出記號，并側(cè)，每稱完一種成分即在配方面軍做出記號，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后，還取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。應(yīng)進(jìn)行

9、一次檢查。n培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的 培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備 n在培養(yǎng)基分裝滅菌前，各成分應(yīng)溶解均勻。在培養(yǎng)基分裝滅菌前，各成分應(yīng)溶解均勻。n在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)、以防焦化、在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它溶化，迄至煮沸。如為瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶

10、液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補(bǔ)足。發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補(bǔ)足。培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備n因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會(huì)有所變化，培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行PH的初步調(diào)正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會(huì)有顯著的升高。因此，對這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的最終PH，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。n一般滅菌前比最終pH高0.2-0.3 。n 用1mol/L Na0H或 lmol/LHCL調(diào)整。 培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的滅菌 n已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而已

11、配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。n高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，還會(huì)使瓊脂的凝膠強(qiáng)度下高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，還會(huì)使瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降，因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間，并且不可重復(fù)滅降，因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間，并且不可重復(fù)滅菌。菌。n高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定，并定期采用高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定，并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。 培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基的滅菌 n滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度，避免滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)

12、該迅速冷卻至所需溫度，避免長時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過度滅菌，影響培長時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過度滅菌，影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。n每批培養(yǎng)基制備好以后，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)每批培養(yǎng)基制備好以后，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測定其最終染等、均應(yīng)挑出棄去。并測定其最終pHpH。n將全部培養(yǎng)基放入將全部培養(yǎng)基放入36361 1C C恒溫箱培養(yǎng)過夜，如恒溫箱培養(yǎng)過夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長，即棄去。發(fā)現(xiàn)有菌生長，即棄去。培養(yǎng)基的儲(chǔ)存培養(yǎng)基的儲(chǔ)存n培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，最好能放

13、于普通冰箱培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，最好能放于普通冰箱n放置時(shí)間一般不宜超過一周。放置時(shí)間一般不宜超過一周。n傾注的平板培養(yǎng)基不宜超過傾注的平板培養(yǎng)基不宜超過3 3天。如果保存時(shí)間超天。如果保存時(shí)間超過過2 2天，應(yīng)將其放入密封的塑料袋中保存。天，應(yīng)將其放入密封的塑料袋中保存。n配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時(shí)間超過配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時(shí)間超過2 2周，應(yīng)將周，應(yīng)將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)器中防止蒸發(fā)培養(yǎng)基的使用培養(yǎng)基的使用n平板在接種使用時(shí)，表面必須無明顯潮濕水珠。n對于冰箱保存的平板，應(yīng)待溫度回復(fù)至室溫后再使用n用于沉降

14、菌檢測的所有平板必須經(jīng)無菌試驗(yàn)后才可使用n固體培養(yǎng)基滅菌后再融化只允許一次。培養(yǎng)基質(zhì)量控制n由于不同批次的蛋白胨、浸膏（粉）、瓊由于不同批次的蛋白胨、浸膏（粉）、瓊脂、膽鹽等成分的質(zhì)量及酸堿度不同等，脂、膽鹽等成分的質(zhì)量及酸堿度不同等，影響了培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定性影響了培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定性 。因此對購入。因此對購入的干培養(yǎng)基開展質(zhì)量檢驗(yàn)驗(yàn)收是實(shí)驗(yàn)室室的干培養(yǎng)基開展質(zhì)量檢驗(yàn)驗(yàn)收是實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制的重要內(nèi)容之一內(nèi)質(zhì)量控制的重要內(nèi)容之一?，F(xiàn)有培養(yǎng)基質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)nWS/T 232 2003 商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢定規(guī)程n衛(wèi)生部衛(wèi)監(jiān)發(fā)（1993）7號文件 食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)用干燥培養(yǎng)基生產(chǎn)質(zhì)控和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控參

15、數(shù)n1.1.外觀：干粉色澤、研細(xì)度。外觀：干粉色澤、研細(xì)度。2.2.溶解后培溶解后培養(yǎng)基色澤、透明度、雜質(zhì)、沉淀物、硬度養(yǎng)基色澤、透明度、雜質(zhì)、沉淀物、硬度（凝膠強(qiáng)度）；（凝膠強(qiáng)度）；n3.3.滅菌后滅菌后pHpH值；值；n4.4.菌落形態(tài)、菌落大小（菌落形態(tài)、菌落大?。ㄖ睆街睆剑唬?；5.5.生長生長率率計(jì)數(shù)培養(yǎng)基判斷結(jié)果計(jì)數(shù)培養(yǎng)基判斷結(jié)果n干粉色澤均勻、研細(xì)度好，色澤符合要求干粉色澤均勻、研細(xì)度好，色澤符合要求n制備好的培養(yǎng)基有相應(yīng)的顏色，一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄制備好的培養(yǎng)基有相應(yīng)的顏色，一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無渾濁、無沉淀。清、無渾濁、無沉淀。npHpH值符合、硬度適宜，劃線不破、透明無沉淀物。

16、值符合、硬度適宜，劃線不破、透明無沉淀物。菌落大小、形態(tài)與對照培養(yǎng)基一致。菌落大小、形態(tài)與對照培養(yǎng)基一致。%70%100%對照培養(yǎng)基上菌落總數(shù)試驗(yàn)培養(yǎng)基上菌落總數(shù)）生長率（選擇性培養(yǎng)基判斷結(jié)果選擇性培養(yǎng)基判斷結(jié)果n檢查項(xiàng)目：檢查項(xiàng)目：n 促生長能力促生長能力n 抑制能力抑制能力n 指示能力指示能力事例1n3批4號培養(yǎng)基質(zhì)量控制編號編號生生 產(chǎn)產(chǎn) 廠廠 家家批號批號1 市微生物培養(yǎng)基廠市微生物培養(yǎng)基廠0801242 試劑有限公司試劑有限公司0803153市疾病預(yù)防控制中心市疾病預(yù)防控制中心20070821培養(yǎng)基質(zhì)控參數(shù)培養(yǎng)基質(zhì)控參數(shù)PHPH值值霍亂弧菌生長率霍亂弧菌生長率雜菌抑制能力雜菌抑制能力

17、菌落典型性菌落典型性 結(jié)果（一）nPH值：受試培養(yǎng)基均在要求范圍內(nèi)n雜菌抑制能力：采用的4株測試菌株肉湯混和物在四號平板上均無生長。培養(yǎng)基編號O139 小川稻葉 1+/- - + 2 + - + 3+ + +/-編號O139生長率（%） 小川生長率（%）稻葉生長率（%）195.286.693.62 92.884.195.3394.690.892.5結(jié)論n3批培養(yǎng)基均為合格產(chǎn)品。事例2n6批SS培養(yǎng)基質(zhì)量控制培養(yǎng)基理化指標(biāo)pH值色澤硬度透明度17.10正常（橙紅）適宜、劃線不破透明、無不溶物26.70偏紅適宜、劃線不破透明、無不溶物36.90偏紅適宜、劃線不破透明、無不溶物47.20正常（橙紅）

18、適宜、劃線不破透明、無不溶物56.80偏紅適宜、劃線不破透明、無不溶物66.60紫紅適宜、劃線不破透明、無不溶物對照7.20正常適宜、劃線不破透明、無不溶物pH值、色澤、硬度、透明度、沉淀物結(jié)果值、色澤、硬度、透明度、沉淀物結(jié)果pH值、色澤、硬度、透明度、沉淀物檢測結(jié)值、色澤、硬度、透明度、沉淀物檢測結(jié)果果1、硬度、透明度、沉淀物6批培養(yǎng)基均符合要求2、 pH值除1號、4號符合要求外，其他培養(yǎng)基均偏低，尤其是6號更是低至6.603、凝固后的瓊脂色澤符合性與pH值相同。24h菌落形態(tài)菌落形態(tài) 培養(yǎng)基鴨沙門菌鴨沙門菌ATCC50083鼠傷寒沙門菌鼠傷寒沙門菌ATCC50013傷寒沙門菌傷寒沙門菌A

19、TCC50097腸炎沙門菌腸炎沙門菌分離株分離株大腸埃希菌大腸埃希菌ATCC25922ATCC25922形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小1無適中H 2S適中無適中H 2S適中挑紅適中2H 2S適中無較小無適中無較小挑紅適中3H 2S適中無較小無適中H 2S較小挑紅適中4H 2S較大H 2S適中無適中H 2S適中挑紅適中5無較大無 適中無適中無適中挑紅適中6無適中無 適中無較小無適中挑紅適中對照對照正常適中正常適中正常適中正常適中正常適中36h菌落形態(tài)菌落形態(tài) 培養(yǎng)基鴨沙門菌鴨沙門菌ATCC50083鼠傷寒沙門菌鼠傷寒沙門菌ATCC50013傷寒沙門菌傷寒沙門菌ATCC50097腸炎沙門

20、菌腸炎沙門菌分離株分離株大腸埃希菌大腸埃希菌ATCC25922形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小1H 2S適中H 2S適中H 2S適中H 2S適中挑紅適中2H 2S適中無較小無適中H 2S較小挑紅適中3H 2S適中H 2S適中H 2S適中H 2S較小挑紅適中4H 2S較大H 2S適中無適中H 2S適中挑紅適中5H 2S較大無 適中無適中H 2S適中挑紅適中6無適中無 適中無較小H 2S較小挑紅適中對對照照正常適中正常適中正常適中正常適中正常適中48h菌落形態(tài)菌落形態(tài) 培養(yǎng)基鴨沙門菌鴨沙門菌ATCC50083鼠傷寒沙菌鼠傷寒沙菌ATCC50013傷寒沙門菌傷寒沙門菌ATCC50097腸炎沙

21、門腸炎沙門菌菌分離株分離株大腸埃希菌大腸埃希菌ATCC25922形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài)大小形態(tài) 大小形態(tài)大小1H 2S適中H 2S適中H 2S適中H 2S適中挑紅適中2H 2S適中無較小無較小H 2S適中挑紅適中3H 2S適中H 2S適中H 2S較小H 2S適中挑紅適中4H 2S較大H 2S適中無適中H 2S適中挑紅適中5H 2S較大無 適中無適中H 2S適中挑紅適中6H 2S適中無 適中H 2S較小H 2S較小挑紅適中對對照照正常適中正常適中正常適中正常 適中正常適中菌落形態(tài)結(jié)果菌落形態(tài)結(jié)果n1號、4號培養(yǎng)基菌落形成H2S速度較快,大小也適中。n5號、6號、3號培養(yǎng)基菌落大小適中,但形成H2S

22、速度較慢。n2號、3號培養(yǎng)基部分菌落偏小，形成H2S速度較慢。nH 2S形成時(shí)間：24h與36h差異明顯。36 h與42h 差異不明顯。菌落直徑和生長率檢測結(jié)果菌落直徑和生長率檢測結(jié)果培養(yǎng)基大腸埃希菌大腸埃希菌ATCC25922鼠傷寒沙門菌鼠傷寒沙門菌ATCC50013志賀菌志賀菌ATCC51573傷寒沙門菌傷寒沙門菌ATCC50097直徑 (mm)生長率(%)直徑(mm)生長率(%)直徑(mm)生長率(%)直徑(mm)生長率(%)12.5048.402.69103.952.4258.331.8871.8622.7011.762.2063.842.2341.671.8098.2032.7013

23、.072.6070.062.3039.581.7073.6542.6031.702.78110.172.4862.501.82104.7052.6213.732.6080.792.4052.081.80111.3862.701.312.6097.742.3233.3331.80100.00對照對照2.90100.002.80100.002.60100.002.20100.00 項(xiàng)目1號 2號 3號 4號 5號 6號 外觀符合符合符合符合符合符合pH值符合7.10偏低6.70偏低6.90符合7.20偏低6.80過低6.60色澤符合偏紅偏紅符合偏紅過紅硬度、沉淀物符合符合符合符合符合符合菌落形態(tài)典

24、型H 2S遲、菌落小H 2S遲、菌落小典型H 2S偏遲H 2S偏遲大腸菌菌落直徑2.50mm2.70mm2.70mm2.60mm2.62mm2.70mm生長率48.40%11.76 %13.07 %31.70 %13.73 %1.31% 沙門菌菌落直徑2.69mm2.20mm2.60mm2.78mm2.60mm2.60mm生長率103.95%63.84%70.06110.1780.7997.74志賀菌菌落直徑2.42mm2.23mm2.23mm2.48mm2.40mm2.40mm生長率58.3341.6739.5862.50%52.0833.33%結(jié)論合格不合格不合格合格基本合格基本合格n常見

25、培養(yǎng)基干粉外觀要求常見培養(yǎng)基干粉外觀要求.doc.docn常見培養(yǎng)基典型菌落形態(tài)常見培養(yǎng)基典型菌落形態(tài).doc.docn增菌類培養(yǎng)基的質(zhì)量要求增菌類培養(yǎng)基的質(zhì)量要求.doc.doc常用菌株保存方法質(zhì)控菌株要求n標(biāo)準(zhǔn)菌株：來自國際/國家菌種保藏中心(本標(biāo)準(zhǔn)要求為ATCC菌株)或經(jīng)ISO9002認(rèn)證的經(jīng)銷商提供的菌株(有資質(zhì))n制備儲(chǔ)備菌株和工作菌株時(shí)一次制備多份，每株菌原則上不能重復(fù)使用n通常工作菌株不能再傳代，但處理得當(dāng)可再次使用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株(Reference stock)n標(biāo)準(zhǔn)菌株在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過一次傳代獲得的一組完全相同的菌株傳代菌株應(yīng)當(dāng)完全具備標(biāo)準(zhǔn)菌株的所有性狀傳代時(shí)要保證一定的量(減少傳

26、代次數(shù))每株菌株盡量避免多次使用采用不同的保存方法保存期限不同n如凍干法,液氮法,穿刺法,液體石蠟法,斜面保存法等(見后)菌種保藏方法n斜面冰箱保藏法斜面冰箱保藏法n液體石蠟封藏法液體石蠟封藏法n半固體保存法n液氮保存法n低溫保存法n冷凍真空干燥保藏法冷凍真空干燥保藏法斜面冰箱保藏法斜面冰箱保藏法n：將菌種接在新鮮斜面培養(yǎng)基上，定溫培養(yǎng)長：將菌種接在新鮮斜面培養(yǎng)基上，定溫培養(yǎng)長出豐滿菌苔后，一般形成芽孢的細(xì)菌要形成芽出豐滿菌苔后，一般形成芽孢的細(xì)菌要形成芽孢，形成孢子的微生物要長出孢子，貼上標(biāo)簽，孢，形成孢子的微生物要長出孢子，貼上標(biāo)簽，放在試管架上，在棉塞部位用尼龍紙或防水紙放在試管架上，在

27、棉塞部位用尼龍紙或防水紙包好，放入包好，放入40C冰箱中保藏。一般每隔冰箱中保藏。一般每隔3個(gè)月至個(gè)月至半年用新鮮培養(yǎng)基移植半年用新鮮培養(yǎng)基移植1次。方法簡便，實(shí)驗(yàn)次。方法簡便，實(shí)驗(yàn)室均采用。室均采用。 缺點(diǎn)：移接代數(shù)太多，易產(chǎn)生變異、退化缺點(diǎn)：移接代數(shù)太多，易產(chǎn)生變異、退化。液體石蠟封藏法液體石蠟封藏法 n在已長好的斜面菌種上加入無菌液體石蠟在已長好的斜面菌種上加入無菌液體石蠟油，高出斜面油，高出斜面1cm直立試管放入冰箱保藏，直立試管放入冰箱保藏，適用保存細(xì)菌和放線菌。適用保存細(xì)菌和放線菌。 石蠟的處理：石蠟的處理：250mL三角瓶裝三角瓶裝100mL液體液體石蠟，石蠟，1.05kg/cm

28、3高壓滅菌高壓滅菌30min，然后，然后放在放在1050C左右的烘箱中左右的烘箱中1h，使水分蒸發(fā)，使水分蒸發(fā)掉。掉。半固體保存法n將菌種穿刺接種于半固體高層培養(yǎng)基中，在適宜條件下培養(yǎng)培養(yǎng)結(jié)束后，無菌操作在層流臺(tái)下用無菌吸管吸取無菌液體石蠟至培養(yǎng)好的菌種管內(nèi)，并使石蠟高出菌種表面約1cm，將試管直立，置于2-8冰箱中或室溫下保存。n此法制備簡單，不需要其他特殊設(shè)備 n一般無芽胞細(xì)菌也可保藏1年左右 n缺點(diǎn)是保存時(shí)必須直立放置，不便攜帶；取培養(yǎng)物接種時(shí)，當(dāng)接種環(huán)在火焰上灼烷時(shí)容易飛濺液氮保存法液氮保存法保存制備細(xì)胞懸液，甘油或二甲亞砜作保護(hù)劑分裝無菌安瓿瓶，每管0.2ml預(yù)凍至-40（控制溫度下降速率為1min）放入液氮生物貯存罐中氣相保存恢復(fù)直接浸入38水浴中解凍510min轉(zhuǎn)接于適宜培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)注意：大多數(shù)屬種適于慢速凍結(jié)和快速解凍適用菌種適用菌種病毒支原體各類細(xì)菌、放線菌、酵母菌、絲狀真菌藍(lán)藻動(dòng)物細(xì)胞 液體石蠟覆蓋保