螃蟹腳黃酮類化合物提取工藝優(yōu)化研究

1、螃蟹腳黃酮類化合物提取工藝優(yōu)化研究                  作者：楊鳳賢，向軼波，馮小飛，劉祥義【摘要】  目的用乙醇提取螃蟹腳中總黃酮的最佳工藝。方法比較超聲提取和回流提取實驗，用比色法測定有效成分；采用回流提取正交實驗，并對實驗數(shù)據(jù)經(jīng)不同的計算和分析比較優(yōu)選螃蟹腳的提取工藝條件。結果總黃酮提取率是超聲提取低于回流提取；實驗數(shù)據(jù)經(jīng)不同的數(shù)據(jù)處理方式得到不同的優(yōu)化工藝條件。通過驗證實驗可得到重復的實驗結果。結論實驗結

2、果用多元線性回歸計算，可彌補正交極差、方差計算的不足，更有利于結果解釋和工藝條件的優(yōu)化。 【關鍵詞】  正交設計 螃蟹腳 黃酮 提取工藝Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction process of total flavonoids with alcohol from Viscum articulatum Burm. MethodsCompared with the ultrasonic extraction and the refluent extraction experiment，colorimetric analysis was

3、 used to measure the content of active ingredients. Besides，orthogonal design of the refluent extraction was applied to optimize the technologies of Viscum articulatum Burm in comparison with two ways to deal with the experimental results.ResultsThe extraction rate of the total flavonoids of the ult

4、rasonic was lower than that of the refluent extraction. Besides，the different optimum extraction processes could be obtained by different ways to deal with the experiment results but the same experiment results were found. ConclusionThe multivariate regression analysis can make up shortage of sense.

5、 The equation of regression is more helpful for explanation of result and optimum of preparation technology.Key words：Orthogonal design；  Viscum articulatum Burm；  Flavonoid；  Extraction process   螃蟹腳（扁枝槲寄生）Viscum articulatum Burm系桑寄生科槲寄生屬植物，是一種寄生在樹齡較高的古喬木茶樹上的寄生物。螃蟹腳為多年生草本，形

6、狀像小珊瑚，因寄生枝桿節(jié)狀帶毫，故此被稱為“螃蟹腳”。在緬甸，由于其特殊的地理位置和生態(tài)環(huán)境，千年古茶園里的古茶樹上就寄生著“螃蟹腳”。主治風濕痹痛、腰膝酸軟、胎動不安，與中國藥典收載的“槲寄生”Viscum coloratum （Kom.）Nakai具有同等功效1，同時還具有降壓、抗心律失常、增加冠脈流量、改善冠脈循環(huán)、增強心臟收縮力、抗腫瘤、治療肝炎等作用2。對于槲寄生屬的研究，國內已對寄生在柿、栗、榆、樺、柳、楓、楊等樹上的有報道和專利34，但迄今未見對寄生在緬甸茶樹上的螃蟹腳提取工藝優(yōu)化研究的報道。   經(jīng)研究,槲寄生屬的主要有效成分為黃酮類化合物和一些高分子化合物

7、34，黃酮類化合物廣泛存在于植物中，具有抗腫瘤、增強心血管功能、抑菌、抗病毒等作用，同時它還是一種天然的抗氧化劑5。本文以乙醇為溶劑，采用超聲提取和回流提取兩種方法，以總黃酮得率為指標進行比較。然后對回流提取的正交實驗設計優(yōu)選出螃蟹腳的最佳提取工藝，并對實驗數(shù)據(jù)進行了極差、方差計算，經(jīng)直觀分析以及多元線性回歸分析，計算機程序計算處理兩種方法所優(yōu)選工藝條件的比較，為合理篩選螃蟹腳的提取工藝提供科學依據(jù)。1  儀器與試劑   UV-22201型紫外分光光度計（日本島津公司），KESP-100KH超聲波萃取器（深圳市科工達超聲公司）。   螃蟹腳采自

8、緬甸，并經(jīng)西南林學院資源學院植物學教研室鑒定。   蘆?。ü┖繙y定用），由中國醫(yī)藥（集團）上?；瘜W試劑公司提供，所用試劑均為分析純。2  方法與結果2.1  超聲提取和回流提取的比較取3 g樣品，在50條件下以乙醇為提取溶劑，固液比15。超聲提取3次，30 min/次；回流提取3次，2 h/次。3次提取液分別合并至50 ml容量瓶中，并用相應濃度的乙醇定容至刻度，使其作為供試品溶液。2.2  正交實驗（回流提?。┕┰嚻啡芤褐苽?#160; 按文獻4的方法進行研究。2.3  總黃酮的測定2.4  超聲提取和回流提取總黃酮結果

9、見表1。表1  超聲提取和回流提取總黃酮的結果（略）由表1可知，回流提取螃蟹腳總黃酮得率高于超聲提取。2.5  回流提取正交實驗及結果  根據(jù)初步預實驗的結果，擬用3因素3水平（表2），按L9（33）正交實驗表對螃蟹腳進行回流提取實驗，結果見表3。表2  正交設計因素水平（略）表3  正交實驗結果（略）多元線性回歸計算78由于正交設計因素間彼此正交，即因素間的相關系數(shù)rij=0本試驗設計的相關系數(shù)矩陣見表4，符合多元線性回歸對因素的要求。因此，試驗結果數(shù)據(jù)可采用多元線性回歸計算處理，結果見表5。表4  相關系數(shù)矩陣結果（略）以總黃酮含

10、量為指標y，回歸方程   y=1.665 0-0.533 3A+0.001 1B-0.028 3C；   N =9  R =0.643 8  F=1.179 6  S=0.083 5   F0.1（3，5）=3.62   該回歸方程線性不顯著。計算結果顯示：溫度在4080的變化對結果影響不大，可視為常量，為此刪去因素B。         表5  正交實驗結果用多元線性回歸處理（略）誤差*：指相對百

11、分誤差=(y- y/y)×100%。y：指標實測值， y：回歸計算值   此外y指標中有1、5等試驗誤差較大，影響了回歸方程的線性顯著性，為此刪去這兩點，結果見表6。   以總黃酮含量為指標y，回歸方程   y=1.908 7-0.862 8A-0.010 9C；   N =7  R =0.913 1  F=10.032 7  S=0.043 8  F0.05（2，4）=6.94   回歸方程線性很顯著。主要影響因素是A，其次是C。表6 

12、; 正交實驗結果用多元線性回歸處理（略）“*”同前述，“*”表示被刪去的樣品號表7  正交實驗結果用多元線性回歸處理（略）由表7可見優(yōu)化提取條件3次實驗均能達到正交實驗表中結果的較高值。表8  驗證實驗（略）實驗結果顯示，螃蟹腳總黃酮含量3次實驗值均高于正交設計預測值，表明回歸方程能描述本提取工藝系統(tǒng)，優(yōu)化是成功的。3  結論   通過超聲提取和回流提取兩種方法比較：回流提取螃蟹腳總黃酮得率高于超聲提取。   對回流提取實驗采用兩種不同的數(shù)據(jù)處理方式得到的優(yōu)化工藝條件不同，分別是：極差、方差優(yōu)化工藝條件為45%乙醇在60條件

13、下回流提取3次，2 h/次；而多元線性回歸優(yōu)化工藝條件為45%乙醇在60條件下回流提取3次，1 h/次。   由實驗數(shù)據(jù)處理結果顯示出采用極差、方差有如下不足：極差計算只依賴于指標值，無法判斷實驗點的誤差大小，此外在進行工藝優(yōu)化時只能從正交設計表中找出最好點的實驗條件作為優(yōu)化條件，未必是真正的優(yōu)化條件。但若采用多元線性回歸計算，可彌補正交極差、方差計算的不足。而回歸方程既能明確每個因素對指標的影響，又可判斷實驗點的實驗誤差。因而，更有利于結果解釋和工藝條件的優(yōu)化，較之單純的極差、方差分析更為明顯、可靠?！緟⒖嘉墨I】  1 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會中國藥典（部）S廣州：廣東科技出版社，19952 趙 晶，賀江萍槲寄生化學成分及藥理作用研究J天津中醫(yī)學院學報，2005，24(3)：1853 趙啟友，王曉林，張 浩，等扁枝槲寄生的生藥學鑒定研究J天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1998，11(5)：46 4 陶明