血液基礎(chǔ)知識

1、第一章 血 液 學(xué) 基 礎(chǔ)第一節(jié)血液的功能和組成1血液的功能² 機體各組織器官營養(yǎng)成分和代謝產(chǎn)物的載體。² 人體所需水分、氧及排出二氧化碳的載體。² 參與人體免疫功能，防止疾病侵襲。2血液的組成血漿血清血小板白細(xì)胞血餅紅細(xì)胞 加入抗凝劑，離心， 血液自然凝固 靜置30分鐘后的情況² 血液由有形成分(血細(xì)胞等)和血漿組成。² 血清：血液自然凝固，除去固體部分(血餅)后所獲得的液體部分。² 血漿：血液經(jīng)抗凝處理，在離心作用后獲得的清液部分。除血清所含成分外，還包括蛋白質(zhì)、凝固因子等成分。血清血漿蛋白質(zhì)血液凝固因子紅細(xì)胞血餅有形成分白細(xì)胞血

2、小板其他有形成分3血液細(xì)胞構(gòu)成紅細(xì)胞血液細(xì)胞白細(xì)胞血小板 淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞白細(xì)胞嗜中性粒細(xì)胞粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞(1). 紅細(xì)胞：² 形態(tài)和功能：78um 0.8um 2.2um紅細(xì)胞模型圖紅細(xì)胞為扁圓狀結(jié)構(gòu)，中央凹陷，細(xì)胞內(nèi)無核、柔軟，可進入比本身直徑更小的毛細(xì)血管，平均直徑78m。內(nèi)含血紅蛋白，富含鐵元素，容易氧化。負(fù)責(zé)將氧氣輸送致全身，并將二氧化碳收集至肺部排出。² 紅細(xì)胞的成熟： 紅系 原紅細(xì)胞 早幼中幼 晚幼 網(wǎng)織 成熟祖細(xì)胞 紅細(xì)胞 紅細(xì)胞 紅細(xì)胞 紅細(xì)胞 紅細(xì)胞正常情況下，紅細(xì)胞起源于骨髓中紅系祖細(xì)胞，后者在促紅細(xì)胞生成素的作用下，分化為原紅細(xì)胞，經(jīng)

3、數(shù)次有絲分裂而依次發(fā)育為早幼、中幼、晚幼紅細(xì)胞，后者已喪失分裂能力通過脫核成為網(wǎng)織紅細(xì)胞進入外周血。由網(wǎng)織紅細(xì)胞再發(fā)育成為完全成熟的紅細(xì)胞。從早幼紅細(xì)胞開始，已能利用鐵蛋白和原卟啉合成血紅素，后者再與珠蛋白肽鏈結(jié)合而成為血紅蛋白，幼紅細(xì)胞越趨向成熟，合成的血紅蛋白越多，直到網(wǎng)織紅細(xì)胞階段仍能合成少量血紅蛋白。一般外周血中網(wǎng)織紅細(xì)胞的含量不超過1%，網(wǎng)織紅細(xì)胞中仍殘留有RNA，由此可通過流式細(xì)胞檢測技術(shù)進行檢測。網(wǎng)織紅細(xì)胞越成熟，DNA含量越低，由此可計算出網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟程度。(2). 白細(xì)胞：² 白細(xì)胞的分類和分群：從嚴(yán)格的意義上講，只有將白細(xì)胞的種類分出淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒

4、細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞的分析才被認(rèn)可為白細(xì)胞分類。除此之外的只能算作白細(xì)胞分群。但在國內(nèi)，白細(xì)胞分類和分群的界定并不十分嚴(yán)格。以下是白細(xì)胞的分類或分群：小型白細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)二分類大型白細(xì)胞(其他白細(xì)胞)小型白細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)三分類中型白細(xì)胞(單核細(xì)胞、嗜酸性、嗜堿性粒細(xì)胞)大型白細(xì)胞(嗜中性粒細(xì)胞)淋巴細(xì)胞單核細(xì)胞五分類嗜中性粒細(xì)胞粒細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞² 形狀和功能：白細(xì)胞為球狀結(jié)構(gòu)，細(xì)胞內(nèi)有核，直徑715m。產(chǎn)生人體免疫機能，直接攻擊外來細(xì)菌或產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng)。單核細(xì)胞情報通信 偵察T型淋巴細(xì)胞(細(xì)胞性免疫)B型淋巴細(xì)胞(體液性免疫)直接攻擊產(chǎn)生病源體包圍抗體

5、* 嗜酸性粒細(xì)胞協(xié)助產(chǎn)生抗體。(3). 血小板：血液中的有形成分，體積較小，參與凝血和止血。4血液分析的意義和檢驗學(xué)科的分類² 在生理情況下，人體內(nèi)血液各種成分的質(zhì)和量，反映了機體正常新陳代謝和內(nèi)外環(huán)境的平衡。² 在病理情況下，血液成分質(zhì)和量的變化，除了反映造血系統(tǒng)的病變以外，還能直接或間接地提示全身或局部組織器官的病變。² 生物化學(xué)和免疫學(xué)分析：主要檢驗血清中的化學(xué)成分、傳染病抗原、特殊蛋白質(zhì)等。² 血栓與止血分析：主要檢驗與臨床止血和凝血相關(guān)的各種血小板因子、凝血因子、血管因子等項目。² 血液細(xì)胞分析：主要檢驗血液中有形成分的質(zhì)和量。5血液

6、細(xì)胞分析的方法² 傳統(tǒng)方法：以手工操作、普通光學(xué)顯微鏡、計數(shù)板等簡單器材為主要檢測手段。² 現(xiàn)代方法：以血液細(xì)胞自動分析儀為主要標(biāo)志。² 隨著細(xì)胞化學(xué)、組織化學(xué)、位相顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、同位素示蹤技術(shù)、單克隆抗體等現(xiàn)代技術(shù)的運用，血液學(xué)研究不斷得到新的發(fā)展。² 到20世紀(jì)90年代，綜合光學(xué)、電學(xué)、細(xì)胞化學(xué)原理的血液細(xì)胞分析儀代表了當(dāng)今血液一般檢驗技術(shù)的發(fā)展趨勢。第二節(jié) 血液細(xì)胞分析的目的和內(nèi)容1血液細(xì)胞分析的目的以現(xiàn)代血液學(xué)理論為基礎(chǔ)，以常用的實驗方法為手段，聯(lián)系臨床實際，為臨床疾病的初步診斷和療效觀察提供客觀依據(jù)。2血液細(xì)胞分析的內(nèi)容對血液

7、中的有形成分和血液細(xì)胞的數(shù)量、質(zhì)量和外觀形態(tài)進行檢測。3血液細(xì)胞分析的檢測項目(1). 白細(xì)胞檢測WBC(White Blood Cell count)：白細(xì)胞計數(shù)：單位體積全血白細(xì)胞數(shù)，(×103/L或×109/L)。LYM%(Lymphocyte concentration)：淋巴細(xì)胞占白細(xì)胞百分率(%)。LYM#(Lymphocyte count)：淋巴細(xì)胞計數(shù)：單位體積全血淋巴細(xì)胞數(shù)，(×103/L或×109/L)。MONO%(Monocyte concentration)：單核細(xì)胞(中間細(xì)胞MID)占白細(xì)胞百分率(%)。MONO#(Monocy

8、te count)：單核細(xì)胞(中間細(xì)胞MID)計數(shù)：單位體積全血單核細(xì)胞數(shù)，(×103/L或×109/L)。GRAN%(Granulocyte concentration)：粒細(xì)胞占白細(xì)胞的百分率(%)。GRAN#(Granulocyte count)：粒細(xì)胞計數(shù)：單位體積全血粒細(xì)胞數(shù)，(×103/L或×109/L)。NEU%(Neutrophil concentration)：嗜中性粒細(xì)胞占白細(xì)胞百分率(%)。NEU#(Neutrophil count)：嗜中性粒細(xì)胞計數(shù)：單位體積全血嗜中粒細(xì)胞數(shù)，(×103/L或×109/L)。E

9、OS%(Eosinophil concentration)：嗜酸性粒細(xì)胞占白細(xì)胞的百分率(%)。EOS#(Eosinophil count)：嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)：單位體積全血嗜酸粒細(xì)胞數(shù)，(×103/L或×109/L)。BASO%(Basophil concentration)：嗜堿性粒細(xì)胞占白細(xì)胞的百分率(%)。BASO#(Basophil count)：嗜堿性粒細(xì)胞計數(shù)：單位體積全血嗜堿粒細(xì)胞數(shù)，(×103/L或×109/L)。(2). 紅細(xì)胞檢測RBC(Red Blood Cell count)：紅細(xì)胞計數(shù)：單位體積全血紅細(xì)胞數(shù)(×106/

10、L或×1012/L)。HGB(Hemoglobin concentration)：血紅蛋白：單位體積全血血紅蛋白濃度(g/L)。HCT(Hematocrit)或PCV(Packed Cell Volume)：紅細(xì)胞比積：全血紅細(xì)胞相對容積比(%)。MCV(Mean Corpuscular Volume)：紅細(xì)胞平均容積：全血單個紅細(xì)胞的平均比積(fl：1×10-15升)。MCH(Mean Corpuscular Hemoglobin)：紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度：單個紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量，(pg：1×10-12克)。MCHC(Mean Corpuscular Hem

11、oglobin Concentration)：平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(g/L)。RDW(Red Blood Cell Volume Distribution Width)：紅細(xì)胞體積分布寬度。RDW-CV(RDW-Coefficient of Variation)：紅細(xì)胞體積分布寬度變異系數(shù)(%)。RDW-SD(RDW-Standard Deviation)：紅細(xì)胞體積分布寬度標(biāo)準(zhǔn)偏差(fl)。HDW(Hemoglobin Distribution Width)：紅細(xì)胞血紅蛋白分布寬度。(3). 血小板檢測PLT(Platelet count)：血小板計數(shù)：單位體積全血血小板數(shù)，(×

12、103/L或×109/L)。MPV(Mean Platelet Volume)：平均血小板體積：全血血小板平均體積，(fl：1×10-15升)。PCT(Plateletocrit)：血小板壓積：血小板相對容積(L/L)或(%)。PDW(Platelet Volume Distribution Width)：血小板體積分布寬度；PLCR(Platelet Large Cell Ratio)：大血小板比率：體積12fl的血小板比率。(4). 網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測RET#(Reticulocyte count)：網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)：單位體積血液中網(wǎng)織紅細(xì)胞的數(shù)量，(×104/L或

13、×1010/L)；RET%(Reticulocyte concentration)：網(wǎng)織紅細(xì)胞百分率：網(wǎng)織紅細(xì)胞占成熟紅細(xì)胞的百分率(%)；MRV或MCVR(Mean Reticulocyte Volume)：網(wǎng)織紅細(xì)胞平均體積；HFR%(High Fluorescent Reticulocyte concentration)：高熒光率網(wǎng)織紅細(xì)胞占網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分率(%)；MFR%(Middle Fluorescent Reticulocyte concentration)：中熒光率網(wǎng)織紅細(xì)胞占網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分率(%)；LFR%(Low Fluorescent Reticulocyt

14、e concentration)：低熒光率網(wǎng)織紅細(xì)胞占網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分率(%)；RMI(Reticulocyte Maturation Index)：網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟度指數(shù)：高熒光率網(wǎng)織紅細(xì)胞與中熒光率網(wǎng)織紅細(xì)胞之和與低熒光強度網(wǎng)織紅細(xì)胞的比值(%)；RMI = (HFR+MFR) / LFR×100%RPI(Reticulocyte Proofreading Index)：網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟校正指數(shù)：RPI=RET%×(HCT/0.45)×1/1+(0.45-HCT)RDWR(Reticulocyte Distribution Width)：網(wǎng)織紅細(xì)胞分布寬度；HCR

15、(Reticulocyte Hemoglobin Concentration)：網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白濃度；MCHCR(Reticulocyte Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration)：網(wǎng)織紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度；HDWR(Reticulocyte Hemoglobin Distribution Width)：網(wǎng)織紅細(xì)胞血紅蛋白分布寬度；MOXI(Mean Peroxidase Index)：平均過氧化物酶活性指數(shù)；LI(Iobularity Index)：分頁核指數(shù)。4血液細(xì)胞分析項目參考值及臨床意義(1). 白細(xì)胞檢測項目單位參考值臨床意義WBC1

16、09/L4.511.0增加：生理性：新生兒、妊娠末期、分娩期、 飯后等。病理性：大部分化膿性細(xì)菌所引起的炎癥、尿毒癥、嚴(yán)重?zé)齻魅拘詥魏思?xì)胞增多癥、白血病、急性出血、組織損傷等。LYM% % 2040增加：百日咳、傳染性單核細(xì)胞增多癥、腮腺炎、結(jié)LYM#109/L1.54.0核、傳染性肝炎等。減少：多見于傳染性疾病的急性期、放射病、細(xì)胞免疫缺陷等。MONO% % 410增加：結(jié)核、傷寒、亞急性心內(nèi)膜炎、瘧疾、單核細(xì)MONO#109/L0.20.8胞白血病、急性感染恢復(fù)期等。NEU% % 5462增加：急性化膿性感染、粒細(xì)胞性白血病、急性出血、NEU#109/L 27溶血、手術(shù)后、尿毒癥、酸中

17、毒、急性汞和鉛中毒等。減少：傷寒、副傷寒、瘧疾、流感、化學(xué)藥物、X射線和鐳照射、化療、再生障礙性貧血、粒細(xì)胞缺乏癥等。EOS% % 13增加：變態(tài)反應(yīng)、寄生蟲病、某些皮膚病、手術(shù)后、EOS#109/L00.45燒傷等。減少：傷寒、副傷寒、應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素后等。BASO% % 01增加：慢性粒細(xì)胞性白血病、嗜堿性粒細(xì)胞白血病、BASO#109/L00.2何杰金病、癌轉(zhuǎn)移、鉛中毒等。(2). 紅細(xì)胞檢測項目單位參考值臨床意義RBC 1012/L男性：4.35.8增加：生理性：新生兒、高原居住者。女性：3.85.3病理性：真性紅細(xì)胞增多癥等。減少：各種貧血、白血病、各種急慢性失血等。HGBg/L男

18、性：126174 臨床意義見紅細(xì)胞計數(shù)。一般情況下血紅蛋白女性：117161 濃度與紅細(xì)胞數(shù)有一定的比例關(guān)系，二者對貧血診斷有幫助。HCTL/L男性：0.370.51增加：大面積燒傷、體外循環(huán)脫水等。女性：0.350.47減少：各類貧血時隨紅細(xì)胞的減少而有不同程度的降低。MCV fl80100MCH pg 2735 臨床意義見貧血形態(tài)學(xué)分類MCHCg/L310370RDW-CV %11.614.0 是反映紅細(xì)胞大小的客觀指標(biāo)，增加RDW-SD fl39.046.0 見于缺鐵性貧血、營養(yǎng)不良性貧血。貧 血 的 形 態(tài) 學(xué) 分 類1Wintrobe分類法分類依據(jù)：MCV、MCH、MCHC這三個參數(shù)

19、是否正常為依據(jù)。類 型MCV (80100)MCH (2735)MCHC (310370)常 見 疾 病大細(xì)胞性貧血>100>35310370巨幼細(xì)胞貧血、非巨幼細(xì)胞性大細(xì)胞貧血正常細(xì)胞性貧血801002735310370急性失血性貧血、溶血性貧血、癥狀性貧血、再生障礙性貧血單純小細(xì)胞性貧血<80<27310370亞急性或慢性炎癥小細(xì)胞低色素貧血<80<27<310缺鐵性貧血、鐵粒幼細(xì)胞貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鉛中毒貧血2Bessman分類法分類依據(jù)：以MCV、RDW是否正常為分類依據(jù)。類 型MCV(80100)HDW(正常上限約為14.0%)常

20、見 疾 病小細(xì)胞均一性貧血降低正常雜合子珠蛋白生成障礙性貧血、慢性疾病小細(xì)胞不均一性貧血降低上升缺鐵性貧血、血紅蛋白S(HbS)、-珠蛋白生成障礙性貧血、紅細(xì)胞破碎綜合癥、血紅蛋白H(HbH)正細(xì)胞均一性貧血正常正常少部分再生障礙性貧血、慢性粒細(xì)胞性或淋巴細(xì)胞性白血病、出血、慢性疾病、輸血、化療正細(xì)胞不均一性貧血正常上升缺鐵性貧血、缺葉酸或維生素B12雙相性貧血、鐵粒幼細(xì)胞貧血、溶血性貧血、骨髓纖維化大細(xì)胞均一性貧血增加正常多數(shù)再生障礙性貧血、前白血病、白細(xì)胞明顯增高的淋巴細(xì)胞白血病大細(xì)胞不均一性貧血增加上升缺葉酸或維生素B12缺乏性貧血、免疫性貧血貧血病因?qū)W分類根據(jù)貧血發(fā)生的不同機制進行分類

21、。類 型發(fā) 病 機 制疾 病紅細(xì)胞生成減少 骨髓功能衰竭造血干細(xì)胞減少造血干細(xì)胞或祖細(xì)胞暫時受抑制紅系干細(xì)胞缺乏再生障礙性貧血急性造血功能停滯單純紅細(xì)胞再生障礙性貧血、先天性紅細(xì)胞生成障礙性貧血造血物質(zhì)缺乏或利用障礙造血調(diào)控因子缺乏腎性貧血、內(nèi)分泌紊亂所致貧血鐵缺乏缺鐵性貧血鐵利用障礙鐵粒幼細(xì)胞貧血單核巨噬系統(tǒng)鐵釋放障礙炎癥、感染所致慢性疾病貧血鐵運轉(zhuǎn)障礙先天性運鐵蛋白缺乏癥銅缺乏缺銅性貧血DNA合成障礙葉酸、維生素B12缺乏性巨幼細(xì)胞貧血及其他巨細(xì)胞貧血紅細(xì)胞破壞過多紅細(xì)胞酶缺陷遺傳性球性紅細(xì)胞增多癥遺傳性橢圓形紅細(xì)胞增多癥遺傳口形紅細(xì)胞增多癥遺傳性棘形細(xì)胞增多癥紅細(xì)胞酶缺陷遺傳性紅細(xì)胞G-

22、6-PD缺乏癥遺傳性紅細(xì)胞丙酮酸激酶缺乏癥糖無氧酵解、戊糖旁路及谷胱甘肽代謝中其他酶缺乏所致溶血性貧血血紅蛋白異常珠蛋白合成減少 珠蛋白結(jié)構(gòu)異常 紅細(xì)胞對外補體過敏珠蛋白生成障礙性貧血、鐮狀細(xì)胞貧血、血紅蛋白C,D,E(HbC,D,E)病不穩(wěn)定Hb所致溶血性貧血陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥紅細(xì)胞外在異常免疫反應(yīng) 自身免疫 同種免疫 藥物誘發(fā)免疫溫抗體型自身免疫性溶血性貧血冷凝血綜合癥新生兒ABO溶血病、新生兒Rh溶血病、血型不合輸血后溶血病藥物性免疫性溶血性貧血機械性損傷紅細(xì)胞破碎綜合癥、行軍性Hb尿高溫?zé)齻氯苎约膊』瘜W(xué)物質(zhì)藥物和化學(xué)毒物所致溶血性疾病微生物、寄生蟲瘧疾和多種細(xì)菌所致溶血性貧

23、血脾功能亢進脾功能亢進所致溶血性貧血紅細(xì)胞丟失(失血)急性失血急性失血所致貧血慢性失血慢性失血所致缺鐵性貧血(3). 血小板檢測項目單位參考值臨床意義PLT109/L100300增加：急性大出血、急性溶血、真性紅細(xì)胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥、慢性粒細(xì)胞白血病等。減少：急性白血病、再生障礙性貧血、原發(fā)性血小板減少性紫瘢、脾功能亢進、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、DIC、血栓性血小板減少性紫瘢等。MPV fl6.512增加：非免疫性血小板破壞、骨髓抑制恢復(fù)時期、體外循環(huán)手術(shù)后8天、先兆子癇、ITP初期、慢性白血病、心肌梗塞直到7周后、巨血小板綜合癥、脾切除后、原發(fā)性血小板增多癥等。減少：再生障礙性貧血、藥物抑

24、制骨髓、巨幼細(xì)胞性貧血(治療后上升)、惡性腫瘤化療期、腎移植等。PCTL/L 0.1450.209臨床意義見血小板計數(shù)(PLT)。PDW-CV % 16.319.3MPV與MPV呈負(fù)的線形相關(guān)，急淋、慢淋、糖尿病可正常。巨幼細(xì)胞性貧血、惡性貧血PDW升高，血小板體積大小不均是PDW可增加。P-LCR %1343對血小板檢測結(jié)果準(zhǔn)確性判定、血液學(xué)疾病診斷具有參考價值，如：大血小板、小紅細(xì)胞、細(xì)胞碎片的出現(xiàn)等第二章血液細(xì)胞分析儀檢測原理簡介第一節(jié)血液細(xì)胞分析儀分析模式及主要檢測項目1CBC分析模式：CBC分析是只進行細(xì)胞計數(shù)和初步分析的檢驗?zāi)Ｊ?，其檢測參數(shù)通常只有8項。包括：WBC、RBC、HCT

25、、HGB、PLT、MCV、MCH、MCHC等。2CBC+DIFF分析模式：CBC+DIFF分析是進行細(xì)胞計數(shù)和白細(xì)胞分類的檢驗?zāi)Ｊ剑瑢嶋H上白細(xì)胞二分類、三分類并不能算作CBC+DIFF分析。由于國內(nèi)對此未進行嚴(yán)格意義上的界定，因此仍將其列在CBC+DIFF模式之中。² 二分類血液細(xì)胞分析儀主要項目：WBC、W-SCR(%&#)、W-LCR(%&#)、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW-CV(或SD)、PLT、MPV、PDW等；WBC、RBC、PLT直方圖。² 三分類血液細(xì)胞分析儀主要項目：WBC、W-SCR(%&#)、W-MCR

26、(%&#)、W-LCR(%&#)、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW-CV(和/或SD)、PLT、MPV、PDW等；WBC、RBC、PLT直方圖。² 五分類血液細(xì)胞分析儀主要項目：WBC、LYM(%&#)、MONO(%&#)、NEU(%&#)、EOS(%&#)、BASO(%&#)、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW-CV(或SD)、PLT、MPV、PDW；P-LCR等；WBC、RBC、PLT散點圖、直方圖。3CBC+DIFF+RET分析模式：在高檔血液細(xì)胞分析儀中還有檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞(R

27、ET)的功能，CBC+DIFF+RET模式分析就是在進行細(xì)胞計數(shù)和白細(xì)胞分類的基礎(chǔ)上進行RET分析的檢驗?zāi)Ｊ?。主要檢測項目包括：WBC、LYM(%&#)、MONO(%&#)、NEU(%&#)、EOS(%&#)、BASO(%&#)、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW-CV(或SD)、PLT、MPV、PDW、P-LCR、RET(#&%)、HFR、MFR、LFR、IRF等；WBC、RBC、PLT、RET散點圖、直方圖。4CBC+DIFF+RET+NRBC分析模式：更新型的血液細(xì)胞分析儀還有檢測有核紅細(xì)胞(NRBC)功能，CBC+D

28、IFF+RET+NRBC分析就是在CBC +DIFF+RET基礎(chǔ)上進行NRBC分析的檢驗?zāi)Ｊ?。主要檢測項目包括：WBC、LYM(%&#)、MONO(%&#)、NEU(%&#)、EOS(%&#)、BASO(%&#)、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW-CV(或SD)、PLT、MPV、PDW、P-LCR、RET(#&%)HFR、MFR、LFR、IRF、NRBC(#&%)等；提供WBC、RBC、PLT、RET、NRBC散點圖、直方圖。第二節(jié)血液細(xì)胞分析儀基本檢測原理1電阻抗原理：電阻抗法是血液細(xì)胞分析儀中使用最為普遍的方法

29、。其原理如下：電阻 電源電負(fù)流極血細(xì)胞通過小孔小孔 傳感器 正極電解質(zhì)溶液 血液細(xì)胞脈沖信號圖1. 電阻抗法細(xì)胞計數(shù)原理圖如上圖所示，由全血稀釋的懸浮于電解質(zhì)溶液中的細(xì)胞流經(jīng)隔板上的一個小孔。正負(fù)電極置于小孔兩側(cè)的電解質(zhì)溶液中。電極之間的電源遵守Ohms定律：R=V/I=P(L/a)V：電極兩端的電壓I：電流R：小孔電阻P：電解質(zhì)阻抗L：小孔長度a：小孔橫截面積當(dāng)細(xì)胞快速通過小孔時，由于是不良導(dǎo)體，小孔電阻R增大，相當(dāng)于小孔的橫截面積a減小，當(dāng)電流恒定的情況下，出現(xiàn)瞬間的電壓變化而產(chǎn)生一個電脈沖，電脈沖的數(shù)量就是流經(jīng)小孔的細(xì)胞數(shù)。電脈沖的大小與細(xì)胞大小成正比。由此對細(xì)胞進行計數(shù)和測定細(xì)胞大小。

30、小孔的孔徑影響著測定細(xì)胞大小的線性?？讖?0m小孔適合測定RBC和PLT，孔徑100m的小孔適合測定WBC。信號/噪聲比影響著測定的分辨率。由于在實際操作中存在著兩個細(xì)胞同時通過小孔而產(chǎn)生重合誤差的現(xiàn)象，多數(shù)血液細(xì)胞分析儀通過對一系列不同濃度的標(biāo)本進行檢測后，繪制出儀器本身所固有的重合誤差曲線。但這種方法仍無法鑒別某一大的電脈沖到底是由一個大的細(xì)胞流經(jīng)小孔還是由兩個小細(xì)胞同時流經(jīng)小孔所引起。為解決這一問題，有些儀器采用了鞘流技術(shù)(見右圖)，由此從根本上減少了重合誤差的發(fā)生。圖2. 鞘流技術(shù)原理示意圖2光散射原理光散射測量方法見下圖。同電阻抗法一樣，全血標(biāo)本首先需要按照一定比例稀釋成細(xì)胞懸浮液，

31、在鞘流的作用下形成細(xì)胞流，細(xì)胞被排列成單列快速通過光學(xué)檢測區(qū)，當(dāng)液流中的細(xì)胞與測定光束相交時，由于血細(xì)胞透光度與鞘液不同，引起光散射變化，引發(fā)一脈沖信號，信號大小與細(xì)胞體積有關(guān)，由此來進行細(xì)胞計數(shù)和體積測定。這種方法還可以同時對細(xì)胞進行多項參數(shù)的分析，如電阻性、光散射、酶含量等。聚光透鏡流動細(xì)胞收集透鏡光阻斷器 光電增益管光源 光阻斷器 光阻斷器圖3. 光散射細(xì)胞計數(shù)原理示意圖3血紅蛋白測定被稀釋的血液加入溶血劑后，紅細(xì)胞溶解，釋放血紅蛋白，血紅蛋白同溶血劑形成血紅蛋白衍生物，在特定波長(530550nm)下比色，吸光度的變化與液體中的HGB含量成比例，儀器便可顯示HGB濃度。ICSH推薦使用

32、氰化高鐵血紅蛋白比色測定法，HiCN最大吸收在540nm，儀器的校正必須以HiCN為標(biāo)準(zhǔn)。但由于試劑反應(yīng)時間長達5分鐘，因此，在血液細(xì)胞分析儀中并未采用這個方法。目前在血液細(xì)胞分析儀中采用的方法有：氰化血紅蛋白、SLS血紅蛋白、季胺鹽血紅蛋白等。其中多數(shù)儀器的溶血劑內(nèi)含有氰化鉀，與血紅蛋白作用后形成氰化血紅蛋白(注意：絕對不是氰化高鐵血紅蛋白)，其特點是顯色穩(wěn)定，最大吸收接近540nm，但吸收光譜與HiCN有明顯不同。為減少試劑毒性，避免環(huán)境污染，Sysmex的K-1000、K-4500、SF-3000、SE-9000等儀器使用非氰化溶血劑，形成的SLS血紅蛋白與HiCN吸收光譜相似，實驗結(jié)果

33、的準(zhǔn)確性、精確性達到含氰化物溶血劑同樣的水平。第三節(jié)血液細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類檢測原理1電阻抗白細(xì)胞分類R1 R2 R3 R4 小型白細(xì)胞 中型白細(xì)胞大型白細(xì)胞圖4. 電阻抗白細(xì)胞分類計數(shù)示意圖電阻抗測定法進行白細(xì)胞分類數(shù)據(jù)是根據(jù)白細(xì)胞體積直方圖計算而得出。經(jīng)溶血劑處理后得到的細(xì)胞大小可初步確認(rèn)其相應(yīng)的種類：小型白細(xì)胞、中型白細(xì)胞和大型白細(xì)胞。一般認(rèn)為小型白細(xì)胞為淋巴細(xì)胞；中型白細(xì)胞為單核細(xì)胞；大型白細(xì)胞為粒細(xì)胞。由于溶血試劑的不同，在SYSMEX三分類儀器中：小型白細(xì)胞為淋巴細(xì)胞；而中型白細(xì)胞則包括單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞；大型白細(xì)胞為嗜中性粒細(xì)胞。當(dāng)單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性

34、粒細(xì)胞中的任何一種增加時，中型細(xì)胞結(jié)果數(shù)值和圖形都有明顯的變化，作為異常結(jié)果對用戶進行提示，以進行鏡檢確定。與單獨將單核細(xì)胞作為中間細(xì)胞的儀器相比，在很大程度上降低了假陽性率。電阻抗原理進行白細(xì)胞計數(shù)和分類的儀器可分為兩種：² 二分類血液細(xì)胞分析儀：報告淋巴細(xì)胞和其他白細(xì)胞的百分比和絕對值；² 三分類血液細(xì)胞分析儀：報告淋巴細(xì)胞、中型白細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的百分比和絕對值。2. 白細(xì)胞五分類的工作原理簡述白細(xì)胞五分類血液細(xì)胞分析儀是在三分類的基礎(chǔ)上，增加某些檢測手段，使得WBC的分類更為準(zhǔn)確、可靠。由于各儀器生產(chǎn)廠家采用不同的方法，其工作原理亦有所不同。具體檢測原理在本手冊第

35、七篇中進行詳細(xì)敘述。在此僅對各生產(chǎn)廠家的檢測原理進行簡單敘述如下：² Beckman Coulter：在三分類的基礎(chǔ)上，用電阻抗法測定WBC的大小，用高頻傳導(dǎo)法測定細(xì)胞內(nèi)的傳導(dǎo)性，用光散射法測定每個細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和形狀。以阻抗法測得的信號為Y軸，激光散射信號為X軸作散點圖，從而將白細(xì)胞分類。代表產(chǎn)品包括：STKS；HmX；GenS。² Sysmex：Sysmex在血液細(xì)胞分析中采用了“三位一體”的檢測技術(shù)，對細(xì)胞的生物特性、化學(xué)特性、物理特性進行全方位的檢測。具體的檢測原理在各型號的產(chǎn)品上不盡相同。代表產(chǎn)品包括：SF-3000；SE-9000；XE-2100± SE-

36、9000在三分類的基礎(chǔ)上，用甲醛和溶血劑溶解RBC和固定WBC，用阻抗法和高頻傳導(dǎo)測定WBC，區(qū)分LYM、MONO和GRAN。在另外兩個通道中，分別用酸性溶血劑和堿性溶血劑處理血細(xì)胞，用阻抗法測定嗜堿性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞。± SF-3000采用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞檢測原理，采用特異性染色技術(shù)對嗜酸性粒細(xì)胞進行染色，在另一個通道中采用特殊溶血素將其他白細(xì)胞破壞，保留嗜堿性粒細(xì)胞的基本形態(tài)。用流式細(xì)胞檢測技術(shù)進行測定。± XE-2100采用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞檢測原理，采用核酸熒光染色技術(shù)對白細(xì)胞進行熒光染色，在另一個通道中采用特殊溶血素將其他白細(xì)胞破壞，保留嗜堿性粒細(xì)胞的基本形

37、態(tài)。用流式細(xì)胞檢測技術(shù)進行測定。² Bayer： 配置4個獨立的測定通道：血紅蛋白測定通道、紅細(xì)胞/血小板測定通道、嗜堿性粒細(xì)胞測定通道和過氧化酶測定通道。在進行WBC測定時，用十二烷基硫酸鈉、甲醛和山梨醇破壞RBC、固定WBC和使白細(xì)胞脫水，用4氯-苯酚和H2O2作底物，在過氧化酶的催化下，4氯-苯酚在細(xì)胞內(nèi)沉淀、著色。由于LYM和BASO無過氧化酶、MONO過氧化酶活性較低、NEU活性較高、EOS活性最強，通過光散射可測定細(xì)胞大小和酶活性。以細(xì)胞大小為Y軸，酶活性為X軸，作散點圖。從而對WBC進行四分類。在另一個通道內(nèi)，用酸性表面活性劑進行處理，用光散射法測定嗜堿性粒細(xì)胞。代表產(chǎn)

38、品包括：Technicon H系列、ADVIA-120。² Abbott：在三分類的基礎(chǔ)上，用合適的試劑使WBC盡可能接近自然狀態(tài)，用激光照射通過四個特定的角度的光散射確定每個細(xì)胞的特征，將WBC分成五類。代表產(chǎn)品包括：Cell-Dyn 3200、Cell-Dyn 3700等² ABX：用一種特定的試劑破壞RBC和固定WBC，使嗜酸性粒細(xì)胞染色，然后用電阻抗法測定細(xì)胞大小，用光學(xué)法測定細(xì)胞的光吸收，作散點圖進行分類。嗜堿性粒細(xì)胞的測定則是用特定試劑破壞RBC和WBC中的LYM、MONO、NEU、EOS而進行單獨計數(shù)。代表產(chǎn)品包括：Pentra 60、Pentra 80、Pe

39、ntra 120等第四節(jié)液體定量方法1浮球定量技術(shù)：采用絕對容積定量技術(shù)并對檢測時間進行監(jiān)測。在檢測小孔發(fā)生輕微堵塞時不會對檢測結(jié)果發(fā)生影響。檢測器結(jié)束開始浮球定量原理如圖所示，當(dāng)儀器處于待用狀態(tài)時，浮球位于計量管的下方。當(dāng)啟動計數(shù)程序時，由于稀釋液被吸入，定量管內(nèi)的小球被推到上方。隨后細(xì)胞懸液即被吸入檢測小孔，浮球隨著液面向下移動，當(dāng)?shù)竭_開始點時，儀器開始計數(shù)，當(dāng)?shù)竭_結(jié)束點時，計數(shù)停止，被檢測樣本的容量即被確定。這種定量技術(shù)在計數(shù)小孔有輕微堵塞時，浮球移動的速度減慢，計數(shù)時間延長，保證了計數(shù)量的恒定。由于采用了時間監(jiān)控技術(shù)，當(dāng)計數(shù)時間延長到一定程 圖5. 浮球定量技術(shù)原理示意圖度時，儀器自動

40、開啟排堵程序，這樣就大大降低了檢測孔完全堵塞的現(xiàn)象的發(fā)生。2. SRV(Sample Rotor Valve)閥血液分配技術(shù)：自動吸取標(biāo)本最初采用機械臂探針式(注射器進樣)，但由于血液粘度比血清高，產(chǎn)生的凝塊不易清洗，所以精密度和準(zhǔn)確性都不理想。旋轉(zhuǎn)閥的應(yīng)用極大地提高了分血精度。在單旋轉(zhuǎn)閥(SRV)閥中，首先吸入血液標(biāo)本，然后旋轉(zhuǎn)閥轉(zhuǎn)動，將一定量的標(biāo)本連接紅細(xì)胞稀釋通道，另一部分標(biāo)本連接白細(xì)胞稀釋通道。啟動閥門后，標(biāo)本和稀釋液通向各自的計數(shù)池。剩余部分用回沖液沖洗出去。這樣，白細(xì)胞和紅細(xì)胞/血小板的分血、稀釋一次完成。有關(guān)原理參見示意圖。前片中片(旋轉(zhuǎn)片)后片進樣針恒定、精確的體積圖6. 旋轉(zhuǎn)

41、閥工作原理示意圖第五節(jié)血液分析各參數(shù)的結(jié)果來源必須指出：血液細(xì)胞分析儀的檢測并不是全部從血液標(biāo)本中直接測出的，其中一部分是對直接測出的結(jié)果進行計算和分析而得到的。因此，判定血液細(xì)胞分析儀的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，應(yīng)對這些直接檢測參數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性進行分析，進而得出結(jié)論。主要的判定參數(shù)包括：WBC、RBC、PLT、HCT、Hgb等。某些血液細(xì)胞分析儀具有更多的檢測參數(shù)，但某些參數(shù)并未在臨床上得到運用或者未被權(quán)威機構(gòu)認(rèn)可為“可以向臨床報告的參數(shù)”。這一點，請在銷售過程中加以注意。以下是血液細(xì)胞分析儀各檢測參數(shù)的結(jié)果來源，它說明了血液細(xì)胞分析儀是如何得到這些檢測參數(shù)的。1白細(xì)胞檢測WBC：由儀器直接檢測；

42、LYM%：由直方圖、散點圖導(dǎo)出；LYM#：LYM# = LYM%×WBC；MONO%：由直方圖、散點圖導(dǎo)出；MONO#：MONO# = MONO%×WBC；NEU%：由散點圖導(dǎo)出；NEU#：NEU# = NEU%×WBC；EOS%：由散點圖導(dǎo)出；EOS#：EOS# = EOS%×WBC；BASO%：由散點圖導(dǎo)出；BASO#：BASO# = BASO%×WBC；2紅細(xì)胞檢測RBC：由儀器直接測量；HGB：由儀器直接測量；HCT：HCT= RBC×MCVMCV：由RBC直方圖導(dǎo)出；MCH：MCH = HGB÷RBC；MCHC：M

43、CHC = HGB÷HCT；RDW-CV：由RBC直方圖導(dǎo)出；RDW-SD：由RBC直方圖導(dǎo)出；3血小板檢測PLT：由儀器直接檢測；MPV：由直方圖導(dǎo)出；PCT：PCT = PLT×MPV；PDW：由直方圖導(dǎo)出；P-LCR：由直方圖導(dǎo)出。第六節(jié)血液細(xì)胞分析儀的技術(shù)發(fā)展從血細(xì)胞分析儀誕生至今，新技術(shù)不斷被采用。從Coulter原理(電阻抗測定)發(fā)展到白細(xì)胞五分類技術(shù)，僅僅用了五十年不到的時間。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，血液細(xì)胞分析儀也將在性能、功能、外觀等方面不斷得到發(fā)展。1檢測項目不斷增加最初的Coulter A型只能測RBC。到目前，血液細(xì)胞分析儀可測量十幾個、二十幾個參數(shù)的儀

44、器已經(jīng)成為血液細(xì)胞分析儀的主流。市場上所見到的某些新型高檔儀器可報告的參數(shù)多達30項以上。2體積減小、功能增加隨著材料科學(xué)和微電子技術(shù)的發(fā)展，血液細(xì)胞分析儀日趨小型化，增加了許多輔助功能，如：病人數(shù)據(jù)的儲存和分析、試劑自動加液系統(tǒng)、試劑有效期記憶與保護、儀器自身校正、多功能質(zhì)量控制和預(yù)報、儀器定期自動維護和清洗、儀器故障的自身診斷等。3白細(xì)胞分類不斷完善除了傳統(tǒng)的電阻抗原理以外，各類儀器紛紛采用了新的技術(shù)和工作原理對WBC進行分類。如：激光技術(shù)、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、高頻傳導(dǎo)技術(shù)、電子技術(shù)等。這些技術(shù)的運用極大提高了儀器的分辨能力。4儀器性能不斷提高血液細(xì)胞分析儀性能提高包括：自動化程度更高，操作更簡

45、便；工作效率更高，計數(shù)更快捷；準(zhǔn)確性、重復(fù)性更好；管道、小孔堵塞機率更低；使用壽命更長。5新技術(shù)不斷被采用這些新的技術(shù)包括：三次計數(shù)、延長計數(shù)、浮球定量、重疊校正、脈沖編輯、高精度分析、血小板擬合及掃流技術(shù)、VCS技術(shù)、鞘流技術(shù)、燃燒電路與高壓反沖技術(shù)、熱敏電阻、防返流裝置Von Behrens感應(yīng)器、防攜帶污染與抗干擾技術(shù)等。并非所有的新技術(shù)對血液細(xì)胞分析儀的性能提高都會帶來益處。某些技術(shù)的運用是為了彌補血液細(xì)胞分析儀檢測原理或液體定量原理中存在的缺陷(如三次計數(shù)、血小板擬合及掃流技術(shù)等)。而有些技術(shù)由于尚未成熟或技術(shù)本身的缺陷，反而使得血液細(xì)胞分析儀的性能受到影響。6血液細(xì)胞分析儀日趨智能

46、化在出現(xiàn)異常結(jié)果時，有些儀器在顯示或打印結(jié)果時會出現(xiàn)直方圖含義性報告及其他警告符號，以幫助臨床醫(yī)生盡快作出正確的判斷。儀器可以提示實驗結(jié)果是否正常，并能報告以下結(jié)果異常情況。如：分布異常、紅細(xì)胞大小不均、異型淋巴細(xì)胞、原幼細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞異常、嗜酸性粒細(xì)胞異常、粒細(xì)胞增加、粒細(xì)胞減低、低色素性紅細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、大血小板、小體積區(qū)域干擾、大和小體積干擾、淋巴細(xì)胞增多、淋巴細(xì)胞減少、大紅細(xì)胞、小紅細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、血小板凝集、小血小板、大體積區(qū)域干擾等內(nèi)容。第七節(jié)選擇血液細(xì)胞分析儀的原則在用戶選購或業(yè)務(wù)人員向用戶推薦血液細(xì)胞分析儀時，應(yīng)對儀器和用戶情況進行考察，以使用戶能選擇符合醫(yī)院技術(shù)現(xiàn)狀

47、及發(fā)展方向的儀器。1儀器的性能情況² 儀器的選擇的一般標(biāo)準(zhǔn)：準(zhǔn)確性、精密度、攜帶(交叉)污染率、總重復(fù)性、線形范圍、可比性。² 儀器的選擇的特殊標(biāo)準(zhǔn)這些標(biāo)準(zhǔn)包括：電腦運用、相關(guān)特殊技術(shù)的運用、關(guān)鍵部件的性能、質(zhì)量等。² 儀器的實用性：對于一般醫(yī)院而言，儀器較理想的實用性標(biāo)準(zhǔn)可按如下表所示：項 目實 用 性 要 求進樣方式能同時進行預(yù)稀釋和全血自動進樣自動化程度全自動測試速度>50個/小時故障率因儀器自身因素發(fā)生堵孔(<2%)，電路部分，真空系統(tǒng)，管路系統(tǒng)，機械部分等故障率很低，耐用性強并有自身診斷功能數(shù)據(jù)庫病人樣本儲存100個以上，最好能進行簡單的統(tǒng)計

48、處理，報告打印方式可選擇質(zhì)控質(zhì)控文件應(yīng)大于5個，一般采用X-B質(zhì)控并顯示Levery-Jennings圖形檢測參數(shù)檢測參數(shù)在15個以上，白細(xì)胞三分類以上并至少能顯示、打印WBC、RBC、PLT等三種以上的直方圖抗干擾能力抗干擾能力強，環(huán)境適應(yīng)能力強售后服務(wù)銷售商有較強的營銷、技術(shù)服務(wù)、維修能力2用戶情況² 大型醫(yī)院：高檔次、白細(xì)胞五分類的儀器較符合這類醫(yī)院的情況，(三級以上)有的用戶甚至要求儀器具有網(wǎng)織紅細(xì)胞、巨幼細(xì)胞等檢測功能。² 中型醫(yī)院：高質(zhì)量的白細(xì)胞三分類儀器較符合這類醫(yī)院的要求。² 小型醫(yī)院：普及型儀器可以滿足這類醫(yī)院的需要。對醫(yī)院情況的了解還應(yīng)包括：醫(yī)

49、院的床位數(shù)、門診量、現(xiàn)有儀器的情況以及醫(yī)院的經(jīng)濟能力等。3血液細(xì)胞分析儀的種類和規(guī)格血液細(xì)胞分析儀種類繁多。根據(jù)細(xì)胞計數(shù)原理大致可分為：電阻抗法、光散射法、電阻抗+激光法、電阻抗+射頻法、電阻抗+激光+射頻+組織化學(xué)法。根據(jù)白細(xì)胞分類可分為：無白細(xì)胞分類、白細(xì)胞兩分類、白細(xì)胞三分類、白細(xì)胞五分類。在我國，有不少醫(yī)院已經(jīng)使用了相當(dāng)先進的儀器進行血液一般檢測。到目前為止，有各種型號、各種檔次共二十多個系列的血液細(xì)胞分析儀正在臨床使用之中。有關(guān)目前實際使用中的常見血液細(xì)胞分析儀的情況詳見附錄。附錄：常見血液細(xì)胞分析儀的型號及技術(shù)規(guī)格儀 器 型 號測 量 參 數(shù)WBC 分 類細(xì) 胞 分布圖檢測速度 樣本/小時標(biāo)本量(UL)自動化 程 度數(shù) 據(jù)存儲量質(zhì) 控 文 件Coulter：美國庫爾特公司T系列54082050100全自動無無66092060100全自動無無890102090100全自動無無Ac. T88005520(12)全自動1010205520(12)全自動JT163360100全自動304X-B L-J圖形JT-IR183360100全自動304X-B L-J圖形ONYX20334050100全自動5005000X-B L-J圖形MAXM285875125/185/50全自動1000X-B L-J圖形MD系列88003012全自動無磁盤10