水解度指標測定

1、水解度的測定方法一：(茚三酮比色法)（1）標準曲線制定：1、20gml甘氨酸：2mg甘氨酸定容到100ml容量瓶中。2、茚三酮顯示劑：水合茚三酮0.5g，果糖0.3g，磷酸氫二鈉11.2g， 磷酸二氫鉀 6g,定容到100ml.稍熱溶解，避過低溫保存1周。3、40%乙醇標準曲線制作試管012345678待測樣品標液ml0.000.10.20.30.40.50.60.71.00.5蒸餾水ml2.001.901.801.701.601.501.401.301.001.5茚三酮顯示劑ml1111111111搖勻，沸水浴15min，用冷水迅速冷卻至室溫40%乙醇ml5555555555甘氨酸g0246

2、810121420?OD(570nm)N-水解液蛋白含量（凱氏定氮）F-米糠蛋白換算系數(shù)5.95方法二：采用甲醛滴定法。水解度（%）=（水解后生成的氨基氮的量/樣品中總氮含量）100%（1）粗蛋白含量的測定：采用凱氏定氮法。（2）氨基氮的測定氨基酸含有氨基和羧基，具有兩性，加入甲醛與氨基酸中的氨基作用，可消除其堿性，使羧基顯示出酸性，用氫氧化鈉標準溶液滴定，即可對氨基酸進行定量。1、酚酞指示劑：0.5g酚酞溶于100ml 50%的乙醇中2、中性甲醛溶液：甲醛溶液（3637%，分析純）50ml，加入0.5%的酚酞指示劑約3ml，滴加0.1molL NaOH，使溶液顯微粉色，儲存于棕色瓶中，臨用前

3、配制。具體方法如下：分別吸取2mL不同水解度的水解液于燒杯中加蒸餾水5mL，向燒杯中加入5滴酚酞指示劑，混合后加中性甲醛溶液2.0ml再混合，用0.1molL NaOH滴定顯微粉色。同時取同濃度但未水解的蛋白液2mL做空白實驗。式中：V樣品耗用氫氧化鈉標準溶液毫升數(shù)；V0空白耗用氫氧化鈉標準溶液毫升數(shù)；N氫氧化鈉標準溶液摩爾濃度；14.0081 mL濃度為1.000 mol/L氫氧化鈉標準溶液相當于氮的質(zhì)量（mg）。方法三：氮溶指數(shù)測定（TCA-NSI)可以通過檢測其氮溶解指數(shù)來初步判定小肽或寡肽含量。NSI（）（N1/N0）*100N0總氮N1可溶性氮（用三氯乙酸可溶性氮測定法）三氯乙酸（TCA）是一種蛋白質(zhì)沉淀劑，它可以沉淀蛋白質(zhì)和較長的肽段?？梢员蝗纫宜岢恋淼碾亩嗡淖钌侔被釟埢鶖?shù)與底物的種類有關(guān)，就特定的底物而言，三氯乙酸氮溶解指數(shù)可以定性反映蛋白質(zhì)的分解情況，溶解指數(shù)越高，表明較短肽段含量越高。三氯乙酸氮溶指數(shù)（TCANSI）測定方法：將20ml 10 三氯乙酸（TCA）溶液添加到20ml待測混合液（混合液濃度為10），混合液震蕩，靜置10分鐘，在4