丹參酮對(duì)血管性癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用

1、丹參酮對(duì)血管性癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用         11-03-25 14:58:00     作者：李林，陳姿亦,茹立強(qiáng)    編輯：studa20【摘要】  目的： 研究丹參酮對(duì)擬人類(lèi)血管性癡呆(VD)模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙的改善作用。方法： 采用改良的大腦中動(dòng)脈栓塞(MCAO)致局灶性腦缺血(3 h)和再灌注(30min)法，建立VD樣學(xué)習(xí)記憶障礙的大鼠模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成VD模型組、丹參酮治療組、假造

2、模對(duì)照組和正常對(duì)照組等4組。采用定位航行和空間探索試驗(yàn)測(cè)定大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶功能。結(jié)果： (1) VD大鼠定位航行試驗(yàn)的逃避潛伏期明顯延長(zhǎng);空間探索試驗(yàn)的逃避潛伏期延長(zhǎng)更明顯,而逃避頻率降低，與兩對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01)。(2) 丹參酮治療后，VD大鼠定位航行試驗(yàn)的逃避潛伏期縮短;空間探索試驗(yàn)的逃避潛伏期縮短更明顯，而其安全逃避頻率有明顯提高。結(jié)論： (1) 本研究制成的VD樣學(xué)習(xí)記憶障礙的動(dòng)物模型具有較好仿真人類(lèi)VD的特點(diǎn);水迷宮試驗(yàn)?zāi)茌^真實(shí)地反映動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能。(2) 丹參酮對(duì)VD樣大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能障礙具有一定的改善作用。 【關(guān)鍵詞】  丹參酮; 血管性癡

3、呆; 動(dòng)物模型; 大腦中動(dòng)脈栓塞; 水迷宮試驗(yàn); 學(xué)習(xí)記憶; 大鼠血管性癡呆(vascular dementia, VD)是由各種腦血管疾病引起的腦功能障礙，是一種獲得性智能損害綜合征1，為老年期癡呆的主要類(lèi)型之一，其主要臨床表現(xiàn)以記憶、認(rèn)知功能缺損為主，可伴有言語(yǔ)、運(yùn)動(dòng)、視空間和人格障礙。VD是唯一的一種可以預(yù)防的癡呆類(lèi)型，早期積極防治具有可逆性。在導(dǎo)致VD的多種腦血管疾病中，以缺血性腦血管疾病為最多見(jiàn)。腦缺血再灌注后直接或間接損傷海馬等邊緣腦區(qū)神經(jīng)細(xì)胞，機(jī)體會(huì)啟動(dòng)多種機(jī)制調(diào)控學(xué)習(xí)、記憶的功能活動(dòng)。有報(bào)道，丹參酮A和B能縮小小鼠短暫的(急性)局灶性腦缺血的腦梗死灶體積，并可能有神經(jīng)保護(hù)作用2

4、，還能改善缺血再灌注損傷小鼠和東莨菪堿(抗膽堿藥)誘發(fā)的空間行為缺陷小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙3。因此，對(duì)VD的腦損傷機(jī)制及其防治已成為世界醫(yī)學(xué)領(lǐng)域聯(lián)合攻關(guān)、重點(diǎn)研究的項(xiàng)目。本研究采用改良的大腦中動(dòng)脈栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)45致局灶性腦缺血再灌注法誘發(fā)VD大鼠模型，同時(shí)觀(guān)察丹參酮對(duì)其的治療作用，為探索人類(lèi)VD的發(fā)病機(jī)制及其防治新措施提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1 材料和方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組選用健康清潔二級(jí)SD雄性大鼠60只，體重(220±20)g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供。動(dòng)物于專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)室內(nèi)分籠飼養(yǎng)，室溫(22±2

5、)，自由攝食和飲水。將大鼠隨機(jī)分為4組：VD模型組20只，丹參酮治療組20只，假造模對(duì)照組10只和正常對(duì)照組10只。1.2 主要試劑及儀器丹參酮，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院臨床藥理學(xué)教研室惠贈(zèng);仿Morris水迷宮裝置，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)生物學(xué)系研制。1.3 造模方法根據(jù)Zealonga等45的MCAO法，稍加改進(jìn)制作VD大鼠模型。大鼠造模前禁食(不禁水)12 h，以10%水合氯醛(0.35 g·kg-1)腹腔注射麻醉，常規(guī)皮膚消毒后解剖分離右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈及頸外動(dòng)脈，并掛上備用結(jié)扎線(xiàn)，電凝頸外動(dòng)脈入腦分支和結(jié)扎其主干，分離頸內(nèi)動(dòng)脈主干至翼腭動(dòng)脈，并在其起始部位放置一動(dòng)脈夾

6、。先將頸總動(dòng)脈用動(dòng)脈夾夾閉，再在頸外動(dòng)脈殘端開(kāi)0.2 mm切口，由切口處插入圓錐頭的尼龍線(xiàn)(直徑0.25 mm)，于入口處結(jié)扎尼龍線(xiàn)，然后松開(kāi)頸內(nèi)動(dòng)脈的動(dòng)脈夾，輕推尼龍線(xiàn)沿頸內(nèi)動(dòng)脈入顱(深度約為18 mm)，如此實(shí)現(xiàn)MCAO致腦局灶性缺血。隨后于腦缺血后3 h輕拉出外留尼龍線(xiàn)尾至結(jié)扎口處，如此實(shí)現(xiàn)大腦中動(dòng)脈缺血再灌注(供血30min)造模。大鼠放回鼠籠中，保溫飼養(yǎng)。假造模對(duì)照組大鼠僅解剖分離上述動(dòng)脈，不再作插線(xiàn)栓、結(jié)扎等處理。正常對(duì)照組大鼠不作任何處理。1.4 丹參酮治療造模后丹參酮治療組大鼠立即胃飼丹參酮，丹參酮按50 mg·kg-1·d-1溶于5 ml玉米油中灌胃6。兩對(duì)照組及VD模型組僅以等量玉米油灌胃。各連續(xù)14d，然后進(jìn)行有關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。1.5 造模動(dòng)物神經(jīng)功能評(píng)定按照Z(yǔ)ealonga等45級(jí)評(píng)分法，在造模大鼠清醒后立即進(jìn)行動(dòng)物神經(jīng)功能的評(píng)定。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：正常0分，對(duì)側(cè)肢體屈曲1分，拖鼠尾后拉時(shí)對(duì)側(cè)肢體無(wú)力2分，拖鼠尾后拉時(shí)向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈3分，自發(fā)向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈或傾倒4分。選取評(píng)分為2分及以上者入圍實(shí)驗(yàn)。1.6 動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能的測(cè)試對(duì)每組實(shí)驗(yàn)大鼠分別進(jìn)行水迷宮學(xué)習(xí)記憶行為學(xué)測(cè)試78，選擇學(xué)習(xí)記憶行為“正常”的大鼠入圍實(shí)驗(yàn);大鼠MCAO再灌注后立即做水迷宮試驗(yàn)鑒定動(dòng)物模型。1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有的數(shù)據(jù)以x±s