乳腺癌組織中耐藥基因蛋白表達的相關(guān)研究

1、乳腺癌組織中耐藥基因蛋白表達的相關(guān)研究         【摘要】  目的 探討多藥耐藥基因P-gp、LRP、TOPO在化療前乳腺癌組織的表達及其與ER、PR、CerbB-2及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性。方法 采用免疫組化SP法檢測76例乳腺癌組織中ER、PR、CerbB-2、P-gp、LRP、TOPO的表達水平。 結(jié)果 P-gp、LRP、TOPO在化療前乳腺癌中的表達率分別為28.9%(22/76)、84.2%(64/76)和80.3%(61/76)。LRP、TOPO與CerbB-2之間存在正相關(guān)關(guān)系，LRP

2、、TOPO與ER、PR之間無相關(guān)，P-gp與ER、PR及CerbB-2之間均無相關(guān)性。有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對耐藥相關(guān)基因LRP、P-gp、TOPO的表達無顯著性影響。 結(jié)論 P-gp、LRP、TOPO與乳腺癌原發(fā)MDR的發(fā)生有相當關(guān)系，CerbB-2基因可能也參與了MDR基因的調(diào)節(jié)機制。 【關(guān)鍵詞】  乳腺癌 多藥耐藥 免疫組織化學【Abstract】  Objective  To investigate the expression of  multidrug  resistance genes P-gp, LRP,TOPOin breast ca

3、ncer before chemotherapy, and evaluate their relations with ER, PR, CerbB-2 and lymphatic metastasis. Methods  Immunohistochemical staining (S-P method ) was used to detect  the  expression of  ER, PR, CerbB-2, P-gp, LRP,TOPO in 76 cases of  breast cancer. Results  The

4、expression rate of P-gp, LRP,TOPOin breast cancer before chemotherapy was 28.9%(22/76), 84.2%(64/76), 80.3%(61/76) respectively, The expression of  LRP, TOPO and CerbB-2  show  positive  correlation, The expression of LRP,TOPO show no correlation with the expression of ER  a

5、nd PR, and the expression of P-gp also show no correlation with the expression of ER , PR and CerbB-2.Lymphatic metastasis or not show no significant effect on  the expression  of LRP, TOPOand P-gp. Conclusion  Genes P-gp, LRP,TOPO may be involved in the  primary MDR of breast ca

6、ncer and gene CerbB-2 may correlate with the regulatory machanism of MDR genes.【Key Words】  breast cancer  multidrug resistance  immunohistochemistry  乳腺癌是女性易患的惡性腫瘤之一，并且其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴重危害廣大婦女的健康?；熀蛢?nèi)分泌治療是臨床上常用的治療手段，但多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是導致乳腺癌化療及內(nèi)分泌治療失敗的重要原因。目前發(fā)現(xiàn)了一些與化

7、療及內(nèi)分泌治療耐藥相關(guān)的基因。作者應用免疫組織化學方法檢測P糖蛋白(P-gp)、DNA拓撲異構(gòu)酶II ( topoisomerase II ,Topo II )、肺耐藥蛋白(lung resistance protein,LRP )在化療前乳腺癌組織中的表達，并探討其相互之間及其與雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、癌基因CerbB-2以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性，為判斷預后及臨床治療提供依據(jù)。1  材料與方法1.1  一般資料 收集本院2003 至2005年的乳腺癌手術(shù)標本共83例，術(shù)前均未經(jīng)過化療及放療。均為女性；年齡2869歲。其中浸潤性導管癌74例，

8、浸潤性小葉癌2例，導管內(nèi)癌4例，粘液腺癌2例，小管癌1例?？紤]到其中導管內(nèi)癌、小管癌和粘液腺癌惡性度較低，相對預后較好，為更好地觀察研究結(jié)果，故將其從研究組中剔除，實際例數(shù)是76例，其中伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例。1.2  檢測方法 選用P-gp、LRP、TOPO、ER、PR、CerbB-2共6項指標，采用免疫組化SP 法檢測癌組織中的表達。所有單抗及SP試劑盒均購自福州邁新公司，操作步驟按試劑盒說明書進行，DAB顯色，蘇木素復染。1.3  結(jié)果判斷 陽性結(jié)果為癌細胞中出現(xiàn)棕黃色顆粒。LRP陽性顆粒位于胞漿中，P-gp陽性顆粒位于胞膜及胞漿

9、中，TOPO陽性顆粒定位于細胞核中。陽性細胞10%為陰性，10%25%為+，25%75%為，75%為。+為低表達，為高表達。1.4  統(tǒng)計學處理 運用SPSS統(tǒng)計軟件，對有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移兩組進行卡方檢驗，并對上述指標進行等級相關(guān)分析。2  結(jié)果2.1  乳腺癌組織中各項指標的表達情況見表1。對3種耐藥相關(guān)基因的表達與ER、PR、C-erbB-2之間進行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：LRP、TOPO與CerbB-2之間存在正相關(guān)關(guān)系(P0.01)； LRP、TOPO與ER、PR之間無相關(guān)關(guān)系，P-gp與ER、PR及CerbB-2之間均無相關(guān)性。表1  乳腺

10、癌組織中P-gp、LRP、TOPO、ER、PR、CerbB-2的表達情況 (略)2.2  乳腺癌組織中各項指標的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系見表2。結(jié)果顯示：有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對耐藥相關(guān)基因LRP、P-gp、TOPO的表達無顯著性影響，兩組比較無統(tǒng)計學意義。表2  兩組乳腺癌組織中P-gp、LRP、TOPO的表達情況(略)         3  討論   P-gp是多藥耐藥基因產(chǎn)物，為多藥耐藥細胞膜上一種分子量為170 ku的跨膜糖蛋白，作為“藥泵”功能引起癌細胞產(chǎn)生耐藥而參

11、與多種腫瘤的多藥耐藥機制，。Burger等認為P-gp的高表達是乳腺癌的不良預后指標。目前傾向認為P-gp表達是不依賴于腫瘤細胞增殖的獨立指標。P-gp表達與化療敏感性有密切關(guān)系。Verrelle等檢測原發(fā)性乳腺癌化療前P-gp水平，并隨訪其化療療效，發(fā)現(xiàn)兩者明顯負相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，P-gp在化療前乳腺癌組織中有一定的表達，說明其在乳腺癌的原發(fā)耐藥中亦有重要作用。   LRP肺耐藥蛋白(lung resistance protein,LRP)基因是1995年由Scheffer等克隆得到，它定位于染色體16p11.2 ，編碼的蛋白質(zhì)LRP由896個氨基酸組成，相對分子質(zhì)量約為

12、1.1×105。LRP主要介導順鉑和烷化劑等藥物耐藥，可表達于許多腫瘤組織中，其表達程度的強弱反映不同癌組織的化療敏感性。本研究發(fā)現(xiàn)LRP在乳腺癌組織中有較高的表達率(84.2%)，是3種耐藥相關(guān)基因中表達率最高的，其升高可能是乳腺癌原發(fā)多藥耐藥的主要機制。有文獻報道單一LRP基因的導入并不產(chǎn)生多藥耐藥基因表型，LRP完成耐藥機制可能與其他成分有關(guān)。   Topo在DNA復制、轉(zhuǎn)錄和染色體分離中起著重要作用。與Topo II有關(guān)的化療藥物有表鬼臼毒素、蔥環(huán)類、蔥醌類。目前研究主要集中于Topo與MDR的關(guān)系。Jarvinen等觀察到Topo的表達與處于S期的腫瘤細胞數(shù)、DNA非整倍體及CerbB-2的水平呈顯著正相關(guān)，提示Topo可能與腫瘤的增殖能力及遠處轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系。Sandri等發(fā)現(xiàn)Topo在乳腺癌中的表達具有預后意義，但與腫塊大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、雌孕激素受體等無明顯相關(guān)，與腫瘤細胞增殖狀況呈正相關(guān)，即SPF值(S-phase fraction，代表DNA合成活躍的腫瘤細胞百分比)越大，Topo總體表達水平越高。本