假單胞菌屬PseudomonasMigula的檢驗(yàn)

1、假單胞菌屬Pseudomonas Migula的檢驗(yàn)G"，直或微彎的桿菌，0.5-1.0 X 卩m。多單在。不產(chǎn)芽孢。以單極或數(shù)根極毛運(yùn)動，有的種還具短波長的側(cè)毛。嚴(yán)格需氧。不能在酸性下(pH4.5 )生長，多數(shù)種不需要有機(jī)生長因子。化能異養(yǎng)，有的種利用H2或CO為能源兼性化能自養(yǎng)。接觸酶陽性，產(chǎn)生各種水溶性色素。自然界分布極廣，土壤、淡海水、污水、動植物體表等均存在。引起疾病(Pseudomonas Disease)的有綠膿桿菌、熒光假單胞菌、鰻敗血假單胞菌和惡臭假單胞菌等。(一)銅綠假單胞菌(P. Aerugi nosa )原稱綠膿桿菌。在自然界分布廣泛，為土壤中存在的最常見的細(xì)

2、菌之一。各種水、空氣、正常人的皮膚、呼吸道和腸道等都有本菌存在。易從外傷、燒傷及尿道感染的標(biāo)本分離。本菌存在的重要條件是潮濕的環(huán)境。1形態(tài)及染色特征銅綠假單胞菌為非發(fā)酵革蘭氏陰性菌，菌體細(xì)長，長短不一，呈球桿狀或線狀，成對或短鏈狀排列。菌體一端單鞭毛，暗視野或相差顯微鏡下可見細(xì)菌運(yùn)動 活潑。2生長特性專性需氧，生長溫度 2542 C，最適2530 C, 4C不生 長，42 C可生長，可用以鑒別該菌。普通培養(yǎng)基上生長1824h可見扁平、濕潤的菌落，能產(chǎn)生水溶性的色素，如綠膿素(pyocynin )與帶熒光的水溶性熒光素(pyoverdin )等，使得培養(yǎng)基呈亮綠色。血瓊脂平板生長可見菌落周圍有溶

3、血環(huán)，菌落呈金屬光澤；液體培養(yǎng)基呈渾濁狀生長，液體表面形成菌膜， 培養(yǎng)基底部生長不良。3生化特點(diǎn)該菌氧化酶陽性，能氧化分解葡萄糖、木糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，但不分解乳糖和蔗糖。液化明膠、可分解尿素，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽并產(chǎn)生氮?dú)狻＿胚彡幮?，利用枸櫞酸鹽，精氨酸雙水解酶陽性。4抗原性與分型該菌含0抗原（菌體抗原）及 H抗原（鞭毛抗原）。0 抗原包含兩種成分：一種是其外膜蛋白，為保護(hù)性抗原； 另一種是脂多糖，有特異性。0抗原可用以分型。（1） 噬菌體分型：所應(yīng)用的噬菌體現(xiàn)有24株，分型率達(dá)90%（2）血清學(xué)分型：利用 O抗原進(jìn)行分型，目前可分 20個 血清型。（3）質(zhì)粒指紋圖分析：此項(xiàng)技術(shù)是對同種細(xì)菌的不

4、同株進(jìn)行同源性分析的一種方法。根據(jù)細(xì)菌攜帶質(zhì)粒的情況進(jìn)行分析。5微生物學(xué)檢查標(biāo)本采集：采自不同感染部位的各種標(biāo)本，包括血液、尿液、痰標(biāo)本、膿汁、穿刺液等。還包括來自環(huán)境中的各種標(biāo)本如水、空氣、物體表面等。涂片鏡檢：革蘭陰性，菌體大小 1.5-5.0 X 0.5-1卩m。菌體的一端有單鞭毛，無芽胞。分離培養(yǎng)：對有正常菌群存在的臨床標(biāo)本或采自環(huán)境中的標(biāo)本應(yīng)接種選擇性培養(yǎng)基：麥康凱瓊脂（MAC）;對無正常菌群存在的臨床標(biāo)本如血液、腦脊液、穿刺液等可接種普通或血瓊脂培養(yǎng)基。（二）椰毒假單胞菌酵米面亞種椰毒假單胞菌酵米面亞種（ Psedomonas cocovenenanssupsp. farino f

5、ermentans ）是我國發(fā)現(xiàn)的一種新的食物中毒菌，它存在于發(fā)酵的玉米、糯玉米、黃米、高梁米、變質(zhì)銀耳以及周圍環(huán)境中，它是酵米面及變質(zhì)銀耳中毒的病原菌。該菌產(chǎn)生的毒素米酵菌酸是其致病原因。1形態(tài)及染色特征革蘭氏陰性短桿菌，大小為1.5-4卩卩m,直或微彎的需氧桿菌。細(xì)胞呈卵圓、短桿狀以至長桿狀形態(tài)。兩端鈍圓，無芽胞，有鞭毛。兼性厭氧，但易在 表面生長。胞漿中含濃染顆粒及空泡。在透射電鏡下觀察，可見異染顆粒、脂質(zhì)顆粒、板層狀內(nèi)膜結(jié)構(gòu)等特殊結(jié)構(gòu)。假單胞菌屬為有機(jī)化能異養(yǎng)菌，代謝為呼吸而非發(fā)酵, 有些是兼性化能自養(yǎng)菌，能利用H2或CO2為能源。分子 氧是普遍的電子受體，有些能脫氮而利用硝酸鹽為替代

6、 的受體。除能利用脫氮作用以厭氧呼吸的一些外 ，均為嚴(yán)格或?qū)?性需氧菌。菌苔雖不明顯呈色，但部分菌可產(chǎn)生水溶性色 素和熒光色素。2生長培養(yǎng)特性椰毒假單胞菌的某些菌株在有硝酸鹽環(huán)境中可呈厭氧生長營養(yǎng)要求不嚴(yán)格，幾乎所有菌群在銨鹽和單一碳源環(huán)境中均可生長。生長溫度為 2537C ,最適生長溫度為 37 C ,最適產(chǎn)毒溫度為26 C。PDA平板上生長，菌落大小為12mm呈乳白色或灰白色 光滑、濕潤、邊緣整齊；培養(yǎng)48h后，中心有突起，呈草帽 狀或放射狀花紋；菌落周圍有黃綠色素產(chǎn)生，并擴(kuò)散到基 質(zhì)中。在365nm紫外燈下有黃綠色熒光。卵黃瓊脂平板上 生長,菌落表面光滑、濕潤,48h后,菌 落周圍形成乳

7、白色渾濁環(huán)，斜射日光下可見環(huán)的表面呈 虹彩現(xiàn)象。S.S瓊脂平板不生長。以脫脂椰肉為基質(zhì)，接種椰毒假單胞菌,30 C下培養(yǎng)4d 產(chǎn)生的米酵菌酸，可溶于石油醚中，用PHS的水萃取后調(diào) pH至23,可再用石油醚或乙醚萃取，如此反復(fù)可得到較 純凈的米酵菌酸。3生化特性假單胞菌氧化糖類只產(chǎn)生少量的酸。蛋白胨糖水不適用于測定酸的產(chǎn)生。因?yàn)楫a(chǎn)生的酸常被蛋白胨分解產(chǎn)生的堿所中和。用銨鹽培養(yǎng)基易測定酸的產(chǎn)生。因在該培養(yǎng)基中糖是唯一碳源。過氧化氫酶陽性。假單胞菌能產(chǎn)生和分泌許多胞外酶 ，包括蛋白酶、脂酶、卵磷脂酶等。明膠酶的產(chǎn)生對其分類很重要。4抵抗力在PDA上生長的椰酵假單胞菌，對金霉素、土霉素、四 環(huán)素、慶大

8、霉素較為敏感，對青霉素、紅霉素、合霉素、 氯霉素、新霉素具有很強(qiáng)的抗性。椰酵假單胞菌對一般常用的消毒劑都很敏感，但鑒于許多消毒劑本身的毒性和殘留問題，僅可用于實(shí)驗(yàn)室消毒。 亞硫酸氫鈉對椰酵假單胞菌具有較強(qiáng)的抑菌和殺菌作用,可用于某些食品加工過程的消毒。5抗原構(gòu)造椰酵假單胞菌具有 O K、H3種抗原。很少發(fā)生交叉反應(yīng)。O抗原為菌體抗原，耐熱,凝集反應(yīng)出現(xiàn)較慢，聚集物呈顆粒狀。H抗原為鞭毛抗原，不耐熱，凝集反應(yīng)發(fā)生迅速，凝塊呈疏松絮狀。K抗原為表面抗原。在3種抗原中，研究得最多的是 O抗原。迄今已證實(shí)該菌具有7種O抗原因子，劃分為6種O抗原型。椰毒假單胞菌的血清型目前有 0-川、0-W、0-V 、0-W 、 O-W 、 0-忸等。產(chǎn)毒與血清型有關(guān)，已知o-v、o-w、o-m 產(chǎn)毒。6致病因素此菌產(chǎn)生毒黃素和米酵菌酸兩種外毒