內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因多態(tài)性與老年高血壓關(guān)系的研究

1、內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因多態(tài)性與老年高血壓關(guān)系的研究         09-08-27 16:49:00     作者：劉海珍    編輯：studa20【摘要】  目的：探討內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因894G/T多態(tài)性與老年人原發(fā)性高血壓?。‥H）之間的關(guān)系。方法： 應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)對(duì)湖北地區(qū)漢族129例高血壓病患者（EH組）和117例健康者（NT組）的eNOS外顯子894位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，生化

2、技術(shù)測定其血脂水平。結(jié)果：EH組T等位基因頻率以及GTTT基因型分布頻率均顯著高于NT組（P<0.05）；在年齡不同組中這種顯著相關(guān)性僅存在年齡小于61歲的中青年患者中。結(jié)論：eNOS基因可能與老年人群原發(fā)性高血壓發(fā)生無關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  內(nèi)皮型一氧化氮合酶； 高血壓； 基因原發(fā)性高血壓（essential hypertension，EH）是多種易感基因與環(huán)境相互作用所致的疾病，許多基因被選為高血壓的候選基因。內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）屬NOS家族，是血管內(nèi)皮細(xì)胞合成NO的限速因子。近年來，一些研究顯示，eNOS基因894G/T多態(tài)性與高加索人和日本人的原發(fā)性高血壓、動(dòng)脈粥

3、樣硬化性相關(guān)疾病有關(guān)1，2，我們現(xiàn)在湖北地區(qū)老年群體中對(duì)eNOS基因894G/T多態(tài)性進(jìn)行基因分型，旨在探討該多態(tài)性與老年人群高血壓的關(guān)系。    1  對(duì)象與方法    1.1  對(duì)象    選取2006年12月2007年10月我院住院部原發(fā)性高血壓老年患者為高血壓組（EH組），共129例，均符合1999 WHO/ISH診斷標(biāo)準(zhǔn)，并排除繼發(fā)性高血壓、心肌病、先天性心臟病、風(fēng)濕性心瓣膜病、糖尿病及高血壓合并冠心病。正常對(duì)照組(NT組)為隨機(jī)挑選我院門診健康體檢者，共117例，血壓正常，

4、排除心腦血管病、糖尿病、肝腎功能不全者。以上各組受檢者均為無血緣關(guān)系的漢族人。    1.2  方法    采用改良碘化鈉（NaI）法從外周血提取白細(xì)胞基因組DNA。    eNOS 894GT突變基因型檢測：PCR反應(yīng)引物序列參照J(rèn)achymova等3實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)正向5'-GAG ATG AAG GCA GGA GAC AGT-3'，反向5'-TCC ATC CCA CCC AGT CAA T-3'，按常規(guī)PCR方法對(duì)目的DNA進(jìn)行擴(kuò)增。取8ul擴(kuò)增產(chǎn)物, 37用M

5、bo限制性內(nèi)切酶3U消化6h，然后在非變性8的聚丙烯凝膠電泳分離，硝酸銀染色后鑒定基因型。酶法測定血清總膽固醇（TC）和甘油三脂（TG）；選擇遮掩法直接測定高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）；直接法測定低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。所有指標(biāo)的測定均在全自動(dòng)化生化分析儀（島津CL-7200）上進(jìn)行。    1.3  統(tǒng)計(jì)分析    使用SPSS13.0軟件包，研究對(duì)象與Hardy-Weinberg平衡符合程度、基因型與等位基因頻率和組間計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)。組間的計(jì)量資料用t檢驗(yàn)。以P< 0.05 為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性。

6、    2  結(jié)果    2.1  原發(fā)性高血壓組與對(duì)照組臨床特征比較    除EH組收縮壓和舒張壓水平均顯著高于NT組（P<0.05）外，兩組間年齡、性別構(gòu)成、體重指數(shù)及血脂水平的差異無顯著性。    2.2  eNOS基因894G/T多態(tài)性分析    受檢者DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物為263bp的片段。若在此片段中存在894GT位點(diǎn)突變，則產(chǎn)生限制性內(nèi)切酶Mbo的切點(diǎn)，導(dǎo)致了3種基因型：GG型（無酶切位點(diǎn)純合

7、子），酶切產(chǎn)物大小為263bp；TT型（存在酶切位點(diǎn)純合子），酶切產(chǎn)物大小164 bp和99bp；GT型為3種片段并存的雜合子。所有研究人群的各等位基因頻率經(jīng)2檢驗(yàn)，符合Hardy-Weinburg遺傳平衡定律，見圖1。    2.3  eNOS基因894G/T多態(tài)性基因頻率與等位基因頻率比較     09-08-27 16:49:00     作者：劉海珍    編輯：studa20    2.4

8、0; 年齡不同的EH組與NT組間eNOS基因型頻率分布比較    中青年人群中eNOS基因型GT+TT基因型頻率EH組顯著高于NT組（2=6.40，P<0.05）。老年人群中，EH組eNOS基因型GTTT基因型頻率高于NT組，但兩組比較無差異顯著性（P>0.05），見表2。表2  年齡不同的兩組間eNOS基因型頻率分布比較注：與NT組比較，* P<0.05。    3  討論    對(duì)高血壓病的發(fā)病的關(guān)鍵基因和相關(guān)基因透徹的了解，才有可能從基因水平診治高血壓病。人類e

9、NOS 基因人位于染色體7q35-36，全長21kb，有26個(gè)外顯子，25個(gè)內(nèi)含子，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)其基因存在近10個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，其中894位點(diǎn)堿基G被T所取代，導(dǎo)致編碼產(chǎn)物第298號(hào)氨基酸由Glu變?yōu)锳sp3。目前，有研究證實(shí)eNOS基因該位點(diǎn)多態(tài)性與高血壓發(fā)病4，5以及治療中的耐藥性有相關(guān)性6，因此被認(rèn)為是一種功能突變。此次本研究通過對(duì)246例中國湖北地區(qū)人群，進(jìn)行eNOS基因894GT多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn)，高血壓組GT/TT基因型和T等位基因高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示該位點(diǎn)多態(tài)性可能時(shí)中國人群高血壓發(fā)生的一個(gè)重要遺傳標(biāo)志。    進(jìn)一步按不同年齡分析eNOS基因該

10、位點(diǎn)與高血壓關(guān)系時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)此多態(tài)性差異僅存在于中青年人群，與國內(nèi)的一些研究不一致7。推測其原因可能是，隨著年齡的增大，心血管系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與功能、腎功能、腎素系統(tǒng)、交感神經(jīng)系統(tǒng)、血管感受器反射功能發(fā)生一系列變化，直接影響了老年高血壓的病理生理，可能掩蓋了基因多態(tài)性對(duì)老年高血壓發(fā)生的作用。此外已有研究表明，eNOS基因G894T多態(tài)性分布具有種族差異和地區(qū)差異8。遺傳、環(huán)境和生活習(xí)慣相互作用可能是結(jié)論不一致的原因之一。目前，尚未見該位點(diǎn)多態(tài)性與EH相關(guān)性存在年齡差別。另外，血壓是一個(gè)連續(xù)變量，又涉及多個(gè)基因的作用，如何建立一個(gè)更合理的分析方法值得探討。    高血壓病是

11、多基因異常疾病，這就給對(duì)給靶基因的界定和選擇帶來了一定困難。某個(gè)單一基因多態(tài)性對(duì)疾病的作用顯然不能說明全部問題，多個(gè)基因間相互關(guān)系以及與其他危險(xiǎn)因素間已越來越引起人們的重視。提示我們需進(jìn)一步深入探討該多態(tài)性與該基因其他多態(tài)性間、該基因同其他高血壓易感基因的間交互作用，以及同其他心血管疾病的關(guān)系，以期為高血壓治療帶來更多進(jìn)展?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 Sawada T, Kishimoto T, Osaki Y, et al. Relation of the Glu298Asp polymorphism of the nitric oxide synthase gene to hyperte

12、nsion and serum cholesterol in Japanese workers. Prev Med， 2008 ，47:167171.2 Antoniades C,tousoulis D,Vasiliadou C, et al .Genetic polymorphism on endothelial nitric oxide synthase affects endothelial activation and inflammatory response during the acute phase of myocardial infarction. J Am Coll Car

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