麝香銀杏葉滴丸對(duì)家兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響

1、麝香銀杏葉滴丸對(duì)家兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響                          作者：王志剛 沈明勤 胡政力 沈建平 程婷婷 【摘要】  目的復(fù)制實(shí)驗(yàn)性家兔動(dòng)脈粥樣硬化（AS）斑塊模型，觀察麝香銀杏葉滴丸對(duì)模型家兔AS斑塊的影響。方法40只家兔隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、辛伐他汀組和麝香銀杏葉滴丸高、低劑

2、量組，正常對(duì)照組給予普通飼料，其它實(shí)驗(yàn)組供給致動(dòng)脈粥樣硬化飼料，喂養(yǎng)45 d。觀察麝香銀杏葉滴丸對(duì)家兔AS斑塊的形態(tài)學(xué)影響，測(cè)定MMP9，纖維帽厚度、中心脂質(zhì)面積、斑塊面積和主動(dòng)脈血管切面中總的斑塊數(shù)、血栓數(shù)。結(jié)果麝香銀杏葉滴丸能明顯降低家兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊纖維帽厚度與中心脂質(zhì)面積比值、中心脂質(zhì)面積與斑塊面積比值，能夠減少斑塊數(shù)和血栓數(shù)的發(fā)生，主動(dòng)脈組織中的MMP9與蛋白含量比值亦有降低趨勢(shì)。結(jié)論麝香銀杏葉滴丸具有一定的穩(wěn)定家兔主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的作用。 【關(guān)鍵詞】  麝香銀杏葉滴丸 動(dòng)脈粥樣硬化斑塊 穩(wěn)定性動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性與多種參與動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosi

3、s,As）形成的因素有關(guān)。本文采用實(shí)驗(yàn)性家兔AS斑塊模型，觀察了麝香銀杏葉滴丸灌胃給藥后，對(duì)模型家兔AS斑塊穩(wěn)定性的影響，探討麝香銀杏葉滴丸對(duì)AS斑塊的穩(wěn)定性作用的研究?，F(xiàn)報(bào)道如下。1  材料1.1  動(dòng)物普通級(jí)家兔，雄性，體重2.02.5 kg，購(gòu)于金陵種兔場(chǎng)，合格證號(hào)：SCXK（蘇）2002-0025；動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境：本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，清潔級(jí)，合格證號(hào)：SYXK（蘇）2002-007。1.2  試藥麝香銀杏葉滴丸（棕褐色干粉），含生藥材2.89 g/g粉，批號(hào)：20060622，由江蘇省中醫(yī)藥研究院制劑室提供。辛伐他汀 20 mg×14片，批號(hào)：060

4、301，宜昌長(zhǎng)江藥業(yè)有限公司。膽固醇,含量93.2%，批號(hào)：20060729，淮北市創(chuàng)凱生化原料廠產(chǎn)品。膽酸鈉,含量66.5%，批號(hào)：20060620，淮北市創(chuàng)凱生化原料廠產(chǎn)品。丙硫氧嘧啶片 50 mg×100片，批號(hào)： 0600201，廣東華南藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。2  方法152.1  兔動(dòng)脈粥樣硬化模型的制備取雄性健康家兔40只，體重2.02.5 kg，隨機(jī)分為5組，每組8只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、辛伐他汀組和麝香銀杏葉滴丸高、低劑量組。正常對(duì)照組給予普通飼料，其它實(shí)驗(yàn)組供給致動(dòng)脈粥樣硬化飼料（5%豬油，1%膽固醇，10%蛋黃，0.5%膽酸鈉，0.2%丙

5、基硫氧嘧啶），每日每只100 g，自由飲水，連續(xù)喂養(yǎng)45 d。2.2  給藥途徑和劑量從造模第1天起，按組分別給藥。麝香銀杏葉滴丸高劑量為1.82 g 生藥/kg（此劑量約相當(dāng)于擬臨床人用等效劑量的4倍），低劑量為0.46 g生藥/kg，辛伐他汀的劑量為2.5 mg/kg，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積的消毒飲用水，將供試藥品配成相應(yīng)濃度后，灌胃給藥，各組動(dòng)物給藥量均為5 ml/kg，1次/d，連續(xù)給藥45 d。2.3  組織的采集實(shí)驗(yàn)結(jié)束前24 h，禁食不禁水，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日空氣栓塞處死動(dòng)物，開(kāi)胸分離從升主動(dòng)脈直至橫膈部的主動(dòng)脈段，去除外膜的脂肪組織，用生理鹽水沖洗干凈，截取

6、主動(dòng)脈弓所在一段約1.0 cm血管環(huán)，置于10%福爾馬林液中固定，供病理組織學(xué)檢查切片使用，以觀察主動(dòng)脈斑塊的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。余下血管速凍后于-70保存，供測(cè)定MMP9使用。2.4  主動(dòng)脈斑塊染色將10%福爾馬林液固定的約1.0 cm主動(dòng)脈血管環(huán)脫水，常規(guī)石臘包埋切片，把主動(dòng)脈血管4等分，每個(gè)等分主動(dòng)脈血管切面取連續(xù)的兩張切片分別進(jìn)行HE染色和MASSON染色。通過(guò)機(jī)圖像分析儀進(jìn)行分析，選取4個(gè)等分主動(dòng)脈血管切面中最大的一個(gè)斑塊，測(cè)量纖維帽厚度、中心脂質(zhì)面積、斑塊面積，計(jì)算纖維帽厚度/中心脂質(zhì)面積的比值、中心脂質(zhì)面積/斑塊面積(%)的比值；測(cè)定四個(gè)等分主動(dòng)脈血管切面中總的斑塊數(shù)、血栓數(shù)

7、。2.5  結(jié)果統(tǒng)計(jì)以±s表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均采用等方差假設(shè)t-檢驗(yàn)，各組結(jié)果均與模型對(duì)照組進(jìn)行比較。3  結(jié)果3.1  麝香銀杏葉滴丸對(duì)家兔主動(dòng)脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊的形態(tài)學(xué)的影響表1  麝香銀杏葉滴丸對(duì)纖維帽厚度/中心脂質(zhì)面積比值的影響（略）與模型對(duì)照組比較，*P<0.05；n=8    麝香銀杏葉滴丸高劑量組和辛伐他汀組，與模型組比較，維帽厚度/中心脂質(zhì)面積比值明顯升高，有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；麝香銀杏葉滴丸低劑量組僅有一定的升高趨勢(shì)。表2  麝香銀杏葉滴丸對(duì)斑塊數(shù)、血栓數(shù)的影響

8、（略）與模型對(duì)照組比較，*P<0.05；n=8    麝香銀杏葉滴丸高、低劑量組和辛伐他汀組4個(gè)等分主動(dòng)脈血管切面中總的斑塊數(shù)，與模型組比較明顯減少，有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。    麝香銀杏葉滴丸高劑量組和辛伐他汀組4個(gè)等分主動(dòng)脈血管切面中總的血栓數(shù)，與模型組比較也有明顯減少（P<0.05）。麝香銀杏葉滴丸低劑量組血栓數(shù)，與模型組比較，發(fā)生率較低，但無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。1           

9、  結(jié)果表明，麝香銀杏葉滴丸能夠減少動(dòng)脈粥樣硬化模型家兔的主動(dòng)脈中斑塊數(shù)和血栓數(shù)的形成。 3.2  麝香銀杏葉滴丸對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化模型家兔主動(dòng)脈組織勻漿MMP9濃度/組織勻漿蛋白濃度的比值影響結(jié)果見(jiàn)表4。表3  麝香銀杏葉滴丸對(duì)中心脂質(zhì)面積/斑塊面積的影響（略）與模型對(duì)照組比較，*P<0.05；n=8表4  麝香銀杏葉滴丸對(duì)模型家兔MMP9與蛋白含量比值的影響（略）與模型對(duì)照組比較， *P<0.01；n=8    由表4可見(jiàn)，模型對(duì)照組MMP9與蛋白含量的比值，與正常對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01)，而

10、麝香銀杏葉滴丸高、低劑量組、辛伐他汀組，與模型對(duì)照組比較僅有降低的趨勢(shì)，無(wú)顯著性差異（P>0.05）。結(jié)果表明，麝香銀杏葉滴丸有一定的降低主動(dòng)脈組織勻漿MMP9/蛋白含量比值的作用趨勢(shì)，其作用強(qiáng)度可能與給藥時(shí)間的長(zhǎng)短、給藥劑量的大小有關(guān)，這有待進(jìn)一步探討。4  討論    急性心肌梗塞是由狹窄的冠脈病變引起，急性冠脈綜合征的發(fā)生與冠狀動(dòng)脈狹窄程度無(wú)關(guān)，而與斑塊的穩(wěn)定性的繼發(fā)血栓形成密切相關(guān)。炎癥在不穩(wěn)定斑塊的發(fā)生、演變及破裂過(guò)程中起重要的作用，斑塊的炎性細(xì)胞及炎性產(chǎn)物對(duì)粥樣斑塊脂質(zhì)中心的擴(kuò)大，纖維組織完整性的破壞及細(xì)胞外基質(zhì)的降解均有明顯的影響，可

11、造成斑塊的不穩(wěn)定破裂。    目前研究認(rèn)為絕大多數(shù)急性冠脈綜合征的發(fā)生是不穩(wěn)定斑塊出現(xiàn)裂縫、糜爛或破裂的基礎(chǔ)上，血管內(nèi)血栓閉塞、致心肌急性缺血。破裂斑塊及附壁血栓在其后的血管重塑過(guò)程中，可自行修復(fù)或加重血管狹窄。斑塊的生物特性是決定其穩(wěn)定性的主要因素6。檢出和穩(wěn)定冠狀動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊將有助于降低冠心病的死亡率和致殘率。    麝香銀杏葉滴丸是以麝香、水蛭、銀杏葉組成的復(fù)方制劑。方中麝香性味辛溫、功效開(kāi)竅、通絡(luò)、散淤；水蛭性味咸苦、平、有毒，功效破血逐淤。麝香和水蛭共為君藥，通絡(luò)祛淤，佐以銀杏葉性味甘苦、澀平、益心斂肺，調(diào)理氣機(jī)，得以活血

12、通絡(luò)止痛7。家兔對(duì)外源性膽固醇攝取率高，對(duì)高血脂的清除能力低，能形成明顯的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型。本文以高膽固醇混合飼料復(fù)制了該模型，觀察了其對(duì)家兔動(dòng)脈粥硬化斑塊穩(wěn)定性的影響。    家兔主動(dòng)脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊的形態(tài)學(xué)顯示，模型組家兔主動(dòng)脈內(nèi)膜形成典型的主動(dòng)脈硬化斑塊沉積。MASSON染色可見(jiàn)斑塊內(nèi)大量膽固醇結(jié)晶和泡沫細(xì)胞，纖維帽厚度較薄，纖維組織少，呈藍(lán)色，有大量結(jié)締組織增生，部分標(biāo)本可見(jiàn)斑塊內(nèi)有鈣鹽沉積，顯示斑塊呈不穩(wěn)定狀態(tài)。麝香銀杏葉滴丸高、低劑量組家兔的上述組織學(xué)改變均輕于模型組。高劑量能明顯降低家兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊纖維帽厚度與中心脂質(zhì)面積比值、中心脂質(zhì)面

13、積與斑塊面積比值，能夠減少斑塊數(shù)和血栓數(shù)的發(fā)生，另主動(dòng)脈組織中的MMP9與蛋白含量比值有降低趨勢(shì)，以上結(jié)果提示本品具有一定的穩(wěn)定家兔主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的作用。    血脂異常是動(dòng)脈粥樣硬化的重要危險(xiǎn)因素，已有研究證實(shí)，血清低密度脂蛋白升高，尤其是氧化型低密度脂蛋白，可以使斑塊局部的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP9）分泌增加，導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定，而降低低密度脂蛋白本身就可以改善病變血管重構(gòu)，降低斑塊內(nèi)部的MMP93。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，麝香銀杏葉滴丸可以通過(guò)降低血清總膽固醇、低密度脂蛋白以及超敏C反應(yīng)蛋白（另外發(fā)表），降低主動(dòng)脈斑塊內(nèi)部的MMP9，從而改善病變血管重構(gòu)，抑制動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展，以達(dá)到穩(wěn)定斑塊的目的?！尽?#160; 1 楊曉云，王 琳，曾和松，等.辛伐他汀對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中核因子kB-DNA結(jié)合活性和基質(zhì)金屬蛋白酶1及3表達(dá)的影響J.動(dòng)脈硬化雜志，2006，14(4)：277.2 謝江嬌，程 翔，廖玉華，等.兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)IL-8表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化J.中國(guó)分子心臟病學(xué)雜志，2005，5(6):773.3 李天奇，李 勇，范維琥.麝香保心丸和辛伐他汀對(duì)兔股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的影響J.中華老年心腦血管病雜志，2006，8(5)：296.4 秦 玲，張家穎，王曄玲，等.阿托伐他汀對(duì)兔動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的抑制作用J.中國(guó)微循環(huán)，2006，10(1