酪氨酸酶抑制劑對生育期雌性大鼠的抗生育效應研究

1、酪氨酸酶抑制劑對生育期雌性大鼠的抗生育效應研究    作者：鐘興明 鐘依平 齊詮 韋相才【關鍵詞】  酪氨酸激酶； 大豆異黃酮； 抗著床酪氨酸激酶（tyrosine protein kinase ,PTKs）是一組酶系，是在正常和異常增殖過程中起重要作用的癌蛋白和原癌蛋白家族中的成員。多種生長因子包括表皮生長因子（EGF）、血小板源生長因子（PDGF）和胰島素樣生長因子（IGF）的受體都有PTKs活性。PTK途徑的激活屬于與細胞的生長、增殖和分化有關的信號途徑。目前，PTK抑制劑在醫(yī)學上的應用主要是抗腫瘤。近來研究還發(fā)現(xiàn)PTKs的活性與非腫瘤細

2、胞的生理活動有關，許多PTKs抑制劑能影響正常細胞的功能和機能，在這一方面研究較多的是一些發(fā)現(xiàn)較早的天然化合物如染料木黃酮（genistein，GST）、herbimycin  A和lavendustin A。大量的研究已證實，GST在防治癌癥、降低血脂、婦產(chǎn)科的激素替代治療、激素依賴性腫瘤的防治方面有著廣闊的應用前景1，但對于抗生育方面的研究較少。本研究通過小鼠動物實驗觀察大豆異黃酮對青年雌性大鼠生育功能的影響。1  材料與方法1.1  材料1.2  試驗方法及內容1.3  數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計所有數(shù)據(jù)以SPSS10.0軟件包建庫并計算各組各指標的

3、平均值，進行均數(shù)和方差分析。2  結果2.1  大豆異黃酮對胚泡在體內發(fā)育的影響光鏡下，3組共獲取胚胎378個，其中正常對照組為125個，低劑量組為128個，高劑量組為125個。3組相比較，獲取胚胎總數(shù)無顯著差異（P0.05）。其中，正常對照組見106個胚胎發(fā)育成囊胚，囊胚發(fā)育率為84.8%（106/125）；低劑量組見84個胚胎發(fā)育成囊胚,囊胚發(fā)育率為65.63%(84/128)；高劑量組見73個胚胎發(fā)育成囊胚，囊胚發(fā)育率為62.4%（78/125）。3組相比較，正常對照組的囊胚發(fā)育率較低劑量組和高劑量組顯著增高（P0.05），而低劑量組的囊胚發(fā)育率和高劑量組相比較無顯著

4、差異（P0.05）。2.2  大豆異黃酮對胚胎著床的影響3組共獲得孕鼠18只。其中正常對照組8只，妊娠率為80%；低劑量組為7只，妊娠率為60%；高劑量組為3只，妊娠率為30%。3組相比較，高劑量組的妊娠率顯著低于正常對照組和低劑量組（P0.05）。正常對照組和低劑量組的妊娠率相比較無顯著差異（P0.05）。3組共獲得的著床胚胎總數(shù)為58個，其中正常對照組為42個，平均著床胚胎數(shù)為5.25個；低劑量組著床胚胎總數(shù)為12個，平均著床胚胎數(shù)為1.71個；高劑量組著床胚胎總數(shù)為4個，平均著床胚胎數(shù)為1.33個。3組相比較，正常對照組的著床胚胎總數(shù)和平均著床胚胎數(shù)顯著高于低劑量組和高劑量組（

5、P0.05）。2.3  大豆異黃酮對胎鼠的影響剖宮取胎后共獲得活胎62個，均未見死胎和畸胎。其中正常對照組為46個，平均活胎數(shù)為4.6個，低劑量組為9只，平均活胎數(shù)為0.9個，高劑量組為7只，平均活胎數(shù)為0.7只。3組相比較，正常對照組的活胎總數(shù)和平均活胎數(shù)顯著高于低劑量組和高劑量組（P0.01）。3  討論大豆異黃酮是一種黃酮類的PTKS抑制劑，其中包含大豆黃酮、大豆甙元、金雀異黃酮和金雀異黃素（genistein）等。國內研究表明，大豆異黃酮提取物對酪氨酸酶活性有比較強的抑制作用，并且隨著大豆異黃酮提取物濃度的提高，其對酪氨酸酶活性的抑制率也提高4。Genistein是

6、ATP與PTK結合的競爭性抑制劑，能有效地抑制EGF酪氨酸激酶?，F(xiàn)有學者發(fā)現(xiàn)，在黃體細胞的體外培養(yǎng)中，應用PTK抑制劑不僅可明顯拮抗EGF升高孕酮的作用，而且在小鼠的胚泡體外發(fā)育和胚胎移植的過程中可明顯抑制胚胎著床5。另外，從結構上講，genistein屬于一種植物雌激素6，既能代替雌激素和ER結合，發(fā)揮雌激素樣作用，又能干擾雌激素和ER結合，表現(xiàn)抗雌激素作用，具有雙向性。Dechaud H研究發(fā)現(xiàn)，genistein可以與3H標記的雌二醇競爭性地結合性激素型球蛋白，從而干擾雌激素與其受體結合，破壞體內的激素平衡。通過動物實驗發(fā)現(xiàn)，動物攝入過量的植物雌激素，能干擾促性腺激素釋放的反饋系統(tǒng)，導致

7、生育問題7。近年來對靈長類胚泡著床的研究表明，著床期子宮內膜也需要基礎水平的雌激素，而且孕激素受體的表達有賴于雌激素的誘導，因此利用小劑量genistein的抗雌激素作為抗著床的可能性是存在的。趙更力8的研究表明，應用大豆異黃酮后,內膜表現(xiàn)出不同程度的增生、子宮重量明顯增加，而且子宮重量系數(shù)和內膜增生程度與大豆異黃酮的劑量有關，表明大豆異黃酮具有雌激素樣作用并且作用強度與劑量有關，大劑量大豆異黃酮引起子宮內膜的增生反應明顯。本實驗結果顯示，在喂養(yǎng)不同劑量的大豆異黃酮后，D4獲取的胚胎總數(shù)和囊胚的發(fā)育率較對照組顯著降低（P0.05）；D6獲得的胚胎著床數(shù)和平均著床胚胎數(shù)較對照組顯著降低（P0.0

8、5）；D20獲得的活胎總數(shù)和平均活胎數(shù)也較對照組顯著降低（P0.01）。說明大豆異黃酮對生育期雌性小鼠存在著明顯的抗生育效應。遲曉星等9認為大豆異黃酮對青年雌性大鼠體質量的影響不顯著，但高劑量組大鼠的卵巢發(fā)生了病理變化，主要表現(xiàn)為卵泡增多，體積增大，卵泡內顆粒層細胞增多，厚度增加，卵泡液豐富。推測在300 mg/kg·bw的劑量下，大豆異黃酮可能會對青年雌性大鼠卵巢產(chǎn)生影響。Genistein與E2一樣，在低濃度時促進黃體酮的合成，高濃度時則抑制其合成10。Genistein對于年輕動物、雌激素化的動物及年輕婦女等高雌激素水平者，表現(xiàn)為抗雌激素活性，而在E2較低的自然絕經(jīng)和手術絕經(jīng)的

9、婦女則顯示雌激素樣作用11。有研究發(fā)現(xiàn)，青年婦女每天服用異黃酮45mg，月經(jīng)周期推遲1.5天，卵泡相延長2.5天，黃體相縮短1天。因而，從理論上推測genistein作為PTKS抑制劑一方面可干擾著床時細胞因子的信號轉導，破壞蛻膜組織的細胞因子網(wǎng)絡平衡；另一方面對體內高雌激素水平的生育期雌性小鼠還具有抗雌激素作用，故其具有抗著床作用。本研究結果還顯示，大豆異黃酮雖可抑制胚泡發(fā)育和胚胎著床，但對于著床后的胚胎發(fā)育卻無明顯影響，剖宮取胎未發(fā)現(xiàn)死胎或畸胎。綜上所述，大豆異黃酮作為黃酮類的PTKS抑制劑，對生育期雌性小鼠具有一定的抗生育作用。但具體的抗著床劑量及機制，還需進行更深入的研究，為新型避孕藥

10、物的研究及開發(fā)提供理論及實驗支持?！緟⒖嘉墨I】1 Arena S , Rappa C, Del Frate E，et al . Anatural alternative to menopausal hormone replacement therapy . Phytoestrogens. Minerva Ginecol , 2002 , 54(2):5358.5 Lachgar S,Moukadiri H,Jonca F , etal . Vascular endothelial growth factor is an autocrine growth factor for hair derm

11、al papilla cells . J Invest Dermatol ,1996，106(1):1723.6 Arcuri F, Ricci C, Ietta F, etal . Macrophage migration inhibitory factor in the human endometrium:expression and localization during the menstrual cycle and early pregnancy. Biol Repord , 2001,64(4):12001205.7 楊志華，綜述；沈倍奮，審閱.gp130的結構、功能及信號傳導.國

12、外醫(yī)學分子生物學分冊，2000，22（4）：217222.10 Tanaka T, Sakamoto T, Miyama M,etal. Interleukin-11 enhance cell survival of decidualized normal human endometrial stromal cells. Gynecol Endocrinol ,2001,15(4):272278.11 Loke YW, Burrows TD , King A. Adhesion molecules and trophoblastic invasion. Contracept Fertil Sex , 1995,23(9):573575.    你可能感興趣的論文