實(shí)驗(yàn)四玉米須中黃酮和多糖的提取

1、實(shí)驗(yàn)四 玉米須中黃酮和多糖的提取 、鑒別與含量測(cè)定（設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)）一、目的與要求通過對(duì)玉米須中黃酮和多糖的分步提取、 鑒別和含量測(cè)定， 掌握天然產(chǎn)物的 提取、鑒別和含量測(cè)定的方法。二、基本原理黃酮類化合物多為結(jié)晶性固體，少數(shù) （如黃酮苷類 ）為無定形粉末。黃酮類化 合物多為黃色，其顏色的深淺與其是否具有交叉共扼體系、助色團(tuán)的多少有關(guān)， 一般具有交叉共軛體系的黃酮類化合物 （如黃酮、黃酮醇、查耳酮 ） 多呈黃色或顏 色較深，而不含有交叉共軛體系的黃酮類化合物 （如二氫黃酮、二氫查耳酮、異 黃酮 ）多為無色或顏色較淺。黃酮類化合物在紫外光下一般具有熒光，熒光的顏 色與分子的結(jié)構(gòu)有關(guān)。 黃酮類化合物的

2、溶解度因其結(jié)構(gòu)及存在的狀態(tài) （苷或苷元、 單糖苷、雙糖苷或三糖苷 ）不同而有很大的差異。一般的游離黃酮苷元難溶或不 溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙腈等有機(jī)溶劑及稀堿中。黃酮類化合 物糖苷化后，水溶性增加，脂溶性降低，一般易溶于熱水、甲醇、乙醇及稀堿溶 液，而難溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚等親脂性有機(jī)溶劑。游離黃酮和黃酮苷一 般都含酚羥基，故都可溶于堿中，加酸后又沉淀出來，可利用此性質(zhì)提取、分離 黃酮類化合物。玉米須中含黃酮類物質(zhì)，能清除羥基和DPPH自由基，有調(diào)節(jié)小鼠脂質(zhì)代謝、 抗衰老和抗疲勞作用。 研究結(jié)果表明低濃度的玉米須提取物也有很好的抗氧化能 力。多糖又稱多聚糖（polysacc

3、haride）,由單糖聚合成聚合度大于10的極性大分 子，分子量為數(shù)萬至數(shù)百萬， 是構(gòu)成生命活動(dòng)的 4 大基本物質(zhì)之一， 與生命的多 種生理功能密切相關(guān)。 多糖是自然界含量最豐富的生物聚合物， 幾乎存在于所有 生物體中。多糖的種類繁多， 傳統(tǒng)水提法是研究和應(yīng)用的最多的一種方法。 水提 法可用水煎煮提取，也可用冷水浸提。玉米須多糖在玉米須中含量14%,是玉米須最主要的水溶性成分之一。 大 量試驗(yàn)證明多糖具有抗病毒、增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、延緩衰老、降血糖、抗凝血 等多種功效。三、儀器和試劑1. 儀器圓底燒瓶、冷凝管 燒杯2只，10mL、50mL量筒各1個(gè)，濾布，滴管，蒸 發(fā)皿， pH 試紙，玻璃棒，

4、恒溫槽，減壓裝置一套。紫外分光光度計(jì)，容量瓶。2. 試劑玉米須10.0g（干燥至恒重，過40目篩，精密稱?。┮掖?、蒸餾水、濃鹽酸、 濃硫酸、苯酚、三氯化鋁、鋅粉、萘酚四、實(shí)驗(yàn)步驟1g玉米須放入150ml的圓底燒瓶中，以30倍水量、恒溫水浴鍋加熱至90 °C， 開始計(jì)時(shí)，反應(yīng)1h，離心3min （3500轉(zhuǎn)/min），上清液抽濾，1. 提?。?）黃酮苷取玉米須柱頭2.0g放入圓底燒瓶中，以1 : 20為料液比，用60%乙醇于80C 水浴內(nèi)提取1h;倒出，加入10mL溶劑提取30min，共提取2次，合并兩次提取 液過濾后，置 50mL 容量瓶中定容。（2）多糖取玉米須柱頭2.0g放入圓底

5、燒瓶中，以1 : 20為料液比，用蒸餾水于90C 水浴內(nèi)提取1h，倒出，加入10mL溶劑提取30min，共提取2次，合并兩次提取 液過濾后，置 50mL 容量瓶中定容。2. 鑒別（1）a萘酚試驗(yàn)（Molisch紫環(huán)反應(yīng)）取檢品的水溶液1ml，加5%萘酚試液數(shù)滴振搖后，沿管壁滴入5- 6滴濃硫 酸，使成兩液層，待 23 分鐘后，兩層液面出現(xiàn)紫紅色環(huán)（糖、多糖或甙類）。多糖類遇濃硫酸被水解成單糖， 單糖被濃硫酸脫水閉環(huán)， 形成糠醛類化合物， 在濃硫酸存在下與a萘酚發(fā)生酚醛縮合反應(yīng)，生成紫紅色縮合物。（ 2）鹽酸一鎂（或鋅）粉試驗(yàn)取檢品的乙醇溶液1ml，加放少量鎂粉（或鋅粉），然后加濃鹽酸4-5滴，

6、 置沸水浴中加熱 2-3分鐘，如出現(xiàn)紅色示有游離黃酮類或黃酮甙（以同法不加 鎂或粉做一對(duì)照， 如兩管都顯紅色則有花色素存在。 如繼續(xù)加碳酸試液使成堿笥 即變成紫色雙轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，即證明含花色素） 。黃酮類的乙醇溶液， 在鹽酸存在的情況下， 能被鎂粉還原， 生成花色甙元而 呈現(xiàn)紅色或紫色反應(yīng)（個(gè)別為淡黃色、橙色、紫色或藍(lán)色） 。這是由于酮類化合 物分子中含有一個(gè)堿性氧原子，致能溶于稀酸中被還原成帶四價(jià)的氧原子即鋅 鹽。本法是鑒別黃酮類的一個(gè)反應(yīng)。但花色素本身在酸性下（不需加鎂粉）呈紅 色，應(yīng)加以區(qū)別。3. 含量測(cè)定方法（ 1 ）黃酮含量測(cè)定2g玉米須40mL乙醇，提取出來的提取液濃縮至接近 50m

7、L （小于50mL）， 然后用60%乙醇定容至50mL，搖勻，過濾， 精密移取續(xù)濾液4mL于10mL容 量瓶中，精密加入0.1mol/L三氯化鋁甲醇顯色劑溶液4ml，搖勻，定容，放置 10 分鐘。以 60%乙醇為空白，測(cè)定吸光度，代入上述回歸方程中，計(jì)算出百分 含量。Y=29.302X+0.0213相關(guān)系數(shù)：r=0.9999。黃酮在4ug-20ug/mL范圍內(nèi)，吸 收度和糖含量呈良好的線性關(guān)系。（ 2）多糖含量測(cè)定取玉米須柱頭2.0g放入圓底燒瓶中，以1 : 20為料液比，用蒸餾水于90E 水浴內(nèi)提取1h，倒出，加入10mL溶劑提取30min，共提取2次，合并兩次提取 液過濾后，置50mL容量

8、瓶中定容。取濾液5mL，定容于25ml容量瓶，搖勻。從25ml容量瓶中移液0.5ml至10mL具塞試管，加1ml5%苯酚，3.5ml濃硫酸， 40C恒溫水浴30min，自然冷卻15min至室溫，在490nm處測(cè)吸光度，在標(biāo)準(zhǔn) 曲線上計(jì)算出濃度， 最后計(jì)算出得率。 同時(shí)精密吸取蒸餾水 0.5ml, 于 10ml 試具 塞試管中，加入5%苯酚溶液1 mL,迅速加入3.5ml濃硫酸，迅速搖勻，同法做空 白在 490 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度 （A） 值如下：y=0.0038+5.91x相關(guān)系數(shù)尸0.9999,在糖含量60140卩g/mL范圍內(nèi)，吸收度和 糖含量呈良好的線性關(guān)系。模塊二實(shí)驗(yàn)五 高錳酸鉀法

9、測(cè)定蛋殼中 CaO 的含量 （設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 學(xué)習(xí)間接氧化還原測(cè)定 CaO 的含量。2. 鞏固沉淀分離、過濾洗滌與滴定分析基本操作。3. 培養(yǎng)學(xué)生理論聯(lián)系實(shí)際， 獨(dú)立進(jìn)行 實(shí)驗(yàn)的能力二、實(shí)驗(yàn)原理雞蛋殼的主要成分為CaCQ,其次為MgC03、蛋白質(zhì)、色素以及少量的 Fe、 Al。利用蛋殼中的Ca2+與草酸鹽形成難溶的草酸鹽沉淀，將沉淀經(jīng)過濾洗滌分離 后溶解，用高錳酸鉀法測(cè)定C2O：含量，換算出CaO的含量，反應(yīng)如下：22Ca2 C2O42CaC2O4CaC 2O 4 H 2SO4 CaSO 4 H 2C 2 O 425H2C2O4 2MnO4 6H 2Mn2 +10CO2 8H2O

10、2某些金屬離子（Ba2+，Sr2： Mg2+，Pb2+, Cd2+等）與C2°4能形成沉淀對(duì) 測(cè)定Ca2+有干擾。三、實(shí)驗(yàn)步驟1. 蛋殼的處理。2. CAO 含量的測(cè)定。四、思考題1. 用高錳酸鉀滴定草酸根時(shí)，應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？2. 用 （NH4）2C2°4沉淀Ca2+，為什么要先在酸性溶液中加入沉淀劑，然后在7080C時(shí)滴加氨水至甲基橙變黃，使 Ca2C2°4沉淀？3. 為什么沉淀要洗至無 Cl 離子為止？4. 如果將帶有Ca2C2°4沉淀的濾紙一起投入燒杯，以硫酸處理后再用KMn°4 滴定，這樣操作對(duì)結(jié)果有什么影響？實(shí)驗(yàn)十一 三草酸根合鐵（

11、III ）酸鉀的制備、性質(zhì)和組成分析綜合性實(shí)驗(yàn)）、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握三草酸根合鐵（III）酸鉀的制備方法。2. 熟悉化學(xué)分析、熱分析、電導(dǎo)率測(cè)定等方法在化合物組成分析中的應(yīng)用。3了解三草酸根合鐵（III）酸鉀的光化學(xué)性質(zhì)。二、實(shí)驗(yàn)原理三草酸根合鐵（III）酸合成工藝有多種，例如，可采用氫氧化鐵和草酸氫鉀 反應(yīng)；也可用硫酸亞鐵銨與草酸反應(yīng)得到草酸亞鐵，再在過量草酸根存在下用過氧化（）本實(shí)驗(yàn)采用三氯化鐵和草酸鉀直接反應(yīng)制備。K3Fe（C2O4）3 3H2O 為亮綠色晶體，溶于水（0°C時(shí) 4.7g/100g水，100C時(shí) 117.7g/100g水），難溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑。110C失去結(jié)

12、晶水，230C分解。 該配合物對(duì)光敏感；可進(jìn)行下列光反應(yīng)：2 K3Fe（C2O4）3 :2FeC2O4+3K2C2O4+2CO2f因此，在實(shí)驗(yàn)室中可用堿草酸根含鐵（III）酸鉀作成感光紙；進(jìn)行感光實(shí)驗(yàn)。 另外，由于它具有光的化學(xué)性質(zhì)，能定量進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，常用作化學(xué)光量計(jì)材料。用稀H2SO4可使三草酸根合鐵III酸鉀分解產(chǎn)生F0和C2O2-用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定試樣中的C2O2-此時(shí)Fe'+不干擾測(cè)定滴定后的溶液用鋅粉還原為。過濾除去過量的鋅粉，使用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定Fe2+通過消耗高錳酸鉀標(biāo) 準(zhǔn)溶液的體積及濃液計(jì)算得到C2o4-和Fe3%£含量。用電導(dǎo)體測(cè)定配合物的摩爾電導(dǎo)

13、體 Km可確定陰，陽離子數(shù)目之比，從而確 定配合物離子的電荷數(shù)，進(jìn)一步確定化學(xué)式和原子結(jié)合的方式三、主要儀器和試劑天平，臺(tái)秤，電導(dǎo)率儀，抽濾瓶，布氏漏斗循環(huán)水泵，棕色容量瓶，燒杯, 量筒蒸發(fā)皿。草酸鉀（k2c2o4 H2O,化學(xué)純）三綠化鐵（FeCl3 6H2O,化學(xué)純）,K3 Fe（cn）6（化學(xué)純）,NaoH（2mol/L）,H 2SO4（2mol/L,0.2mol/L）, kMno4 標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.0200mol/L）鋅粉（分析純）,丙酮。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟1. 三草酸根合鐵（III）酸鉀的制備稱取12g草酸鉀放入100mL燒杯中，加20mL水，加熱使全部溶解.在溶液近沸 時(shí)邊攪拌加入8

14、mL,三氯化鐵溶液（0.4g/mL），將此溶液在冷水中冷卻既有綠色 晶體析出，析出完全后減壓過濾得粗產(chǎn)品。將粗產(chǎn)品溶解在約20mL熱水中，趁熱過濾。將濾液在冰水中冷卻，待結(jié) 晶完全后抽濾晶體產(chǎn)物先用少量冰水和丙酮洗滌，晾干，稱重，計(jì)算，產(chǎn)率2. 配合物的組成分析 C2O4的測(cè)定準(zhǔn)確稱取約1g合成的三草酸合鐵（III）酸鉀綠色晶體于 燒杯中，加入 25mL 3mol/L 的硫酸使之溶解再轉(zhuǎn)移至 250mL 容器瓶中，稀釋至 刻度，搖均。移取25mL試液于錐形瓶中加入 20mL3mol/L硫酸，在7080C水浴中加熱5min 后，趁熱用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定到溶液呈淺粉色，且 30s 不褪色即為終點(diǎn)

15、，計(jì)下讀 數(shù)。平行測(cè)定三次，每次滴定完后溶液保留。 F0的測(cè)定往上述滴定后的每份溶液中加入 1g鋅粉、5mL3moL/L硫酸 振蕩 810min 后，過濾除去過量的鋅粉，濾紙用另一個(gè)錐行瓶承接。用40mL0.2mol/L 的硫酸溶液洗滌原錐行瓶和沉淀，然后用高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定 到溶液呈淺粉色， 30s 不褪色即為終點(diǎn)計(jì)下讀數(shù)平行測(cè)定三次。 配離子電荷的確定，稱取產(chǎn)品0.1g，配成100mL溶液。在電導(dǎo)率儀上測(cè) 其電導(dǎo)然后求出摩爾電導(dǎo)率 km 值 根據(jù)上述結(jié)果分析配合物的組成3. 光化學(xué)性質(zhì) 將少量產(chǎn)品放在表面皿或點(diǎn)滴板上， 在日光下放置一段時(shí)間， 觀察晶體顏 色的化與放在暗處的晶體比較。 稱

16、取0.5g產(chǎn)物和0.4K3 Fe(cn)6,加5mL水配成溶液，用玻璃棒或毛筆 取在紙上涂畫，在日光直照下，觀察變化?；蛘邔⒋嘶旌弦壕鶆蛲吭诩埳?，放 暗處晾干后，附上圖案，在強(qiáng)光下照射，觀察變化。五、注意事項(xiàng)制備三草酸根合鐵(III)酸鉀時(shí)，可以往溶液中加入少量丙酮或乙醇，促使 晶體析出完全。六、思考題寫出Fe(C2O4)33-的結(jié)構(gòu)式。1. 三草酸根合鐵( III )酸鉀固體和溶液應(yīng)如何保存？2. 用化學(xué)式表示本實(shí)驗(yàn)卩£+和C2O4-的測(cè)定原理。3. K3Fe(C2O4)3與K3Fe(CN)6混合物為什么在光照產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)？4. 設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，定性說明產(chǎn)物中的 FeT和C2O?是處

17、在配合物的外界還是 內(nèi)界。5. 產(chǎn)物中的K+可以用什么方法進(jìn)行定性和定量分析？實(shí)驗(yàn)十二 彩色固體酒精的制備及燃燒熱測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 了解彩色固體酒精的制備原理、用途，掌握其制備方法。2. 了解燃燒熱的定義、氧彈量熱計(jì)的結(jié)構(gòu)、工作原理，學(xué)會(huì)用氧彈量熱計(jì)測(cè)定固體酒精的燃燒熱。二、實(shí)驗(yàn)原理固體酒精制備過程中涉及的主要化學(xué)反應(yīng)式為：C17H35COOH+NaOH=C17H35COONa+H2O 反應(yīng)后生成的硬脂酸鈉是一個(gè)長(zhǎng)碳鏈的極性分子，室溫下在酒精中不易溶， 在較高的溫度下， 硬脂酸鈉可以均勻地分散在液體酒精中， 而冷卻后則形成凝膠 體系，使酒精分子被束縛于相互連接的大分子之間， 呈不流動(dòng)狀態(tài)而

18、使酒精凝固， 形成固體酒精。三、主要儀器與試劑1. 儀器三頸燒瓶（100mL）,回流冷凝管，電熱恒溫水浴鍋，天平，電動(dòng)攪拌器， 氧彈量熱計(jì)，貝克曼溫度計(jì)或數(shù)字精密度 /溫差測(cè)量?jī)x，容量瓶。2. 試劑硬脂酸（化學(xué)純） ，酒精（工業(yè)品， 90%），氫氧化鈉（分析純） ，酚酞（指 示劑），硝酸銅（分析純） ，苯甲酸（分析純） ，棉紗，引火絲，氧氣鋼瓶。四、實(shí)驗(yàn)步驟安全預(yù)防：酒精易燃，避免明火。1. 彩色固體酒精的制備用蒸餾水將硝酸銅配成 10%的水溶液，備用。將氫氧化鈉配成 8%的水溶液， 然后用工業(yè)酒精稀釋成1:1的混合溶液，備用。將lg酚酞溶于100mL60%的工 業(yè)酒精中，備用。分別取2.5g工業(yè)硬脂酸、50mL工業(yè)酒精和兩滴酚酞置于100mL 三頸燒瓶中，水浴加熱，攪拌，回流。維持水浴溫度在70C左右，在冷凝管上方滴加上述 1: 1 的混合溶液，直至溶液顏色由無色變?yōu)闇\紅又立即褪掉為止。 繼續(xù)維持水浴溫度在70T左右，攪拌，回流反應(yīng)10min后，一次性加入1.5mL10% 硝酸銅溶液再反應(yīng)5min后，停止加熱，冷卻