增骨丸對(duì)維甲酸誘導(dǎo)的大鼠骨質(zhì)疏松模型影響的實(shí)驗(yàn)研究(一)

1、增骨丸對(duì)維甲酸誘導(dǎo)的大鼠骨質(zhì)疏松模型影響的實(shí)驗(yàn)研究 一 摘要】目的：探討中藥復(fù)方制劑增骨丸對(duì)維甲酸誘導(dǎo)的大鼠骨質(zhì)疏 松模型的影響。方法：將 50 只 8 月齡雌性 SD 大鼠隨機(jī)分為 2 組：正 常組13只、骨質(zhì)疏松組 37只。模型復(fù)制成功后，把骨質(zhì)疏松組隨機(jī) 分為 3 組：模型組、乙烯雌酚組、增骨丸組。觀察增骨丸對(duì)模型大鼠 血清雌二醇E2、骨鈣素BGF、堿性磷酸酶AKP、血清抗酒石酸 酸性磷酸酶TRAP、鈣Ca、磷P及尿中鈣U|Ca、羥脯氨酸U|HOP、尿肌酐U|Cr的影響。結(jié)果：增骨丸組與模型組比擬，血清 E2、 BGP、 AKP 顯著升高 P0.05 ； T RA P、 U|Ca、 U|

2、HOP 含量及 U|Ca/U|Cr、U|HOP/U|Cr 值明顯下降P0.05 或 P0.01。結(jié)論：增 骨丸對(duì)骨質(zhì)疏松有良好的治療作用，其機(jī)理可能是一定程度地提高了 體內(nèi)的雌激素水平，抑制骨的吸收，影響骨的形成。中藥增骨丸可通 過體內(nèi)多方面調(diào)節(jié)作用，到達(dá)制骨質(zhì)疏松的開展，具有良好的應(yīng)用前 景?！娟P(guān)鍵詞】增骨丸；維甲酸；骨質(zhì)疏松癥；實(shí)驗(yàn)研究骨質(zhì)疏松Ostteoporosis簡稱0P是以骨量減少、骨組織顯微結(jié)構(gòu)退化為特征，以致骨的脆性增高而骨折危險(xiǎn)性增加的系統(tǒng)性多病因的一種 全身骨骼疾病 1-2。臨床表現(xiàn)腰背痛、身體畸形、骨折等。由于世界 人口的老齡化，致使該病發(fā)病率逐年升高，且合并嚴(yán)重并發(fā)證，

3、對(duì)個(gè) 人、家庭、社會(huì)構(gòu)成嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。因此，對(duì) OP的研究已成為一個(gè)世界 性醫(yī)學(xué)課題。增骨丸是在中醫(yī)辨證論治理論的指導(dǎo)下，根據(jù)骨質(zhì)疏松癥病理特點(diǎn)， 由甘肅省中醫(yī)骨傷科專家宋貴杰老教授擬定的中藥復(fù)方， 經(jīng) 30 余年來臨床觀察，對(duì)治療骨質(zhì)疏松癥療效肯定，并已有相關(guān)科研 報(bào)道。為了進(jìn)一步研究該方對(duì) 0P的作用機(jī)制，我們做了增骨丸對(duì)維甲 酸誘導(dǎo)的骨質(zhì)疏松大鼠模型影響的實(shí)驗(yàn)研究。 1材料與方法 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物8月齡健康未交配 SpragueDawleySD大鼠50只，體重250280g, 購自青海省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。 1.2 藥物及試劑盒增骨丸煎液：由甘肅省中 醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科制備，常規(guī)煎煮，減壓濃

4、縮，藥液質(zhì)量濃度為 每mL含生藥2.67g,冷藏備用。乙烯雌酚：購自甘肅省中醫(yī)學(xué)院附屬 醫(yī)院，由天津力生制藥股份生產(chǎn)，批號(hào)2021214，每片 1mg，使用時(shí)研磨以蒸餾水配制成 0.01mg/ml 的藥液灌胃。維甲酸：購自重 慶華邦制藥股份，批號(hào) 0950191，每個(gè)膠囊20mg,使用時(shí)研 磨以蒸餾水配制成10mg/ml的混懸液灌胃，現(xiàn)配現(xiàn)用。BGP放免試劑 盒、E2放免試劑盒北京北方生物技術(shù)研究所生產(chǎn)，TRAP試劑盒、 AKP試劑盒、Ca試劑盒、P試劑盒、HOP試劑盒、Cr試劑盒南京建 成生物工程研究所生產(chǎn)。1.3主要儀器LG-3A高速冷凍離心機(jī)北京 醫(yī)用離心機(jī)廠、VIS-7220型可見分光

5、光度儀北京第二光學(xué)儀器廠、 SN-695B型智慧放免測(cè)量儀上海原子能研究所日環(huán)儀器廠、CX全自 動(dòng)生化分析儀美國Beckman公司生產(chǎn)。1.4實(shí)驗(yàn)方法動(dòng)物的分組 和造模實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)10d，將50只大鼠按體重隨機(jī)分為2組：一 組為正常組13只，以蒸餾水灌胃，1次/ d, 3mL/次。另一組為骨質(zhì) 疏松組37只，每只每天給予維甲酸按 70啞/您灌胃14d, 1次/d。在第 15d 兩組各處死 5 只大鼠取材(脛骨)，觀察模型復(fù)制情況。 1.4.2 給藥與飼養(yǎng)所有動(dòng)物在統(tǒng)一條件下(室溫1924C,相對(duì)濕度40%左右)，普通飼料喂養(yǎng)(由蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物飼養(yǎng)中心提供) ，自由飲 水。造模成功后進(jìn)入

6、 45d 的治療階段，給藥劑量按人與大鼠體外表積 比折算成等效劑量。因兩組各處死 5 只大鼠，加之在造模及喂養(yǎng)過程 中因不明原因骨質(zhì)疏松組又死亡 2 只，故正常組為 8 只，骨質(zhì)疏松組 為 30 只。再將骨質(zhì)疏松組隨機(jī)分為 3 組：模型組 10 只，灌蒸餾水 3mL/ 次；增骨丸組10只，按5g/ (kg )劑量灌胃45d;乙烯雌酚組10只， 按0.86mg/ (k d)劑量灌胃。各組大鼠每周灌胃6次，連續(xù)灌胃45d。 1.4.3 取材與處理灌藥第 46d 處死大鼠，處死前用電子臺(tái)秤稱其重量。 股動(dòng)脈取血 35mL,置37C水浴箱中 2h，待血清別離后離心(2000r/min ),取大鼠血清置-20C低溫冰箱保存待測(cè)。處死前Id,分 別置大鼠于代謝籠中，收集24h空腹尿液，置-20C低溫冰箱中備用。 檢測(cè)指標(biāo)和方法放免法測(cè)血清 BGP及E2含量。采用偶氮胂皿法 測(cè)定血清鈣及尿鈣 (S|Ca、U|Ca ， mol/L) ，磷鉬酸法測(cè)定血清磷 (S|P,mol/L)， 比色法測(cè)定血清堿性磷酸酶(S|AKPIU/L),用比色法測(cè)定血清抗酒石酸 酸性磷酸酶(S|TRAPU/L),用苦味酸法測(cè)定尿肌酐(U|Cr,umol/L),用氯 安T法測(cè)定尿羥脯氨酸(U|HOP,mg/L),并計(jì)算U|Ca/U|Cr值、