自己總結(jié)：流式細胞儀的原理和用途

1、=精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=自己總結(jié)：流式細胞儀的原理和用途流式細胞儀1流式細胞儀的概念及其發(fā)展歷史1.1流式細胞儀的基本概念流式細胞儀是對高速直線流動的細胞或生物微粒進行 快速定量測定和分析的儀器，主要包括 樣品的液流技術(shù)、細胞的計數(shù)和分選技 術(shù)，計算機對數(shù)據(jù)的采集和分析技術(shù)等。 流式細胞儀以流式細胞術(shù)為理論基礎(chǔ)， 是流體力學(xué)、激光技術(shù)、電子工程學(xué)、 分子免疫學(xué)、細胞熒光化學(xué)和計算機等 學(xué)科知識綜合運用的結(jié)晶。流式細胞術(shù) 是一種自動分析和分選細胞或亞細胞的 技術(shù)。其特點是：測量速度快、被測群 體大、可進行多參數(shù)測量，即對同一個 細胞做有關(guān)物理、生物化學(xué)特

2、性的多參 數(shù)測量，且在統(tǒng)計學(xué)上有效。1. 2流式細胞儀的發(fā)展簡史最早的流式細胞儀雛形誕生于1934年，Moldavan提 出使懸浮的單個血紅細胞流過玻璃毛細管，在亮視野下用顯微鏡進行計數(shù)，并 用光電記錄裝置測量的設(shè)想。1953年Crosland-Taylor根據(jù)牛頓流體在圓形管 中流動規(guī)律設(shè)計了流動室。其后又經(jīng)過 Coulter、Parker & Horst、Kamentsky、 Gohde Fulwyler、 Herzenberg 等人的不 斷改進，設(shè)計了光電檢測設(shè)備和細胞分 選裝置、完成了計算機與流式細胞儀的 物理連接及多參數(shù)數(shù)據(jù)的記錄和分析、 開創(chuàng)了細胞的免疫熒光染色及檢測技 術(shù)、推廣流

3、式細胞儀在臨床上的應(yīng)用。 近20年來，隨著流式細胞儀及其檢測技 術(shù)的日臻完善，人們越來越致力于樣品 制備、細胞標記、軟件開發(fā)等方面的工 作，以擴大FCM的應(yīng)用領(lǐng)域和使用效 果。宋平根的流式細胞術(shù)的原理和應(yīng)用是迄今為止對流式細胞儀及其 技術(shù)闡述的最為詳盡和透徹的中文著 作。這本書非常詳細地介紹了流式細胞 術(shù)的歷史、結(jié)構(gòu)、原理、技術(shù)指標等， 例舉了其在醫(yī)學(xué)和生物工程中的應(yīng)用， 非常適合從事此方面專業(yè)研究的人。于這本書是13年前出版的，所以基本上沒 有涉及植物流式細胞儀檢測技術(shù)。此外 對于只需要對流式細胞儀有些基本認識 的人士來說，這本書太復(fù)雜太深奧。謝 小梅主要介紹了流式細胞儀在生物工程 中的應(yīng)用

4、。楊蕊概括了流式細胞儀的工 作原理，簡單提及了流式細胞儀的應(yīng)用。 在分析這三篇論著或文章的優(yōu)缺點后， 用比較通俗的語言介紹了掌握流式細胞 儀檢測技術(shù)必須了解的一些原理，并對 目前市場上的主流型號進行了客觀的性 能概括。2流式細胞儀的工作原理和技 術(shù)指標2. 1流式細胞儀工作原理除電源外，流式細胞儀主要四部分組成： 流動室和液流系統(tǒng)：激光源和光學(xué)系統(tǒng)； 光電管和檢測系統(tǒng)；計算機和分析系統(tǒng)， 其中流動室是儀器的核心部件。這四大 部件共同完成了信號的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)換和傳 輸?shù)娜蝿?wù)。流動室和液流系統(tǒng)流動室樣品管、鞘液管和噴嘴等組成， 常用光學(xué)玻璃、石英等透明、穩(wěn)定的材 料制作。設(shè)計和制作均很精細，是液流精選

5、公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 3 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載系統(tǒng)的心臟。樣品管貯放樣品，單個細 胞懸液在液流壓力作用下從樣品管射 出；鞘液鞘液管從四周流向噴孔，包圍 在樣品外周后從噴嘴射出。為了保證液 流是穩(wěn)液，一般限制液流速度U 激光 源和光學(xué)系統(tǒng)經(jīng)特異熒光染色的細胞需要合適的光源照射激發(fā)才能發(fā)出 熒光供收集檢測。常用的光源有弧光燈 和激光；激光器又以僦離子激光器為普 遍，也有配和氟離子激光器或染料激光 器。光源的選擇主要根據(jù)被激發(fā)物質(zhì)的 激發(fā)光譜而定。汞燈是最常用的弧光燈， 其發(fā)射光譜大部分集中于300400nm, 很適合需

6、要用紫外光激發(fā)的場合。僦離子激光器的發(fā)射光譜中，綠光 514nm和藍光nm的譜線最強，約占總光強的；0%;氟離子激光器光譜多集中在可見光部分，以647nm較強。免疫學(xué)上使用 的一些熒光染料激發(fā)光波長在 550nm以上，可使用染料激光器。將有機染料做 為激光器泵浦的一種成份，可使原激光 器的光譜發(fā)生改變以適應(yīng)需要即構(gòu)成染精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 # 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載料激光器。例如用僦離子激光器的綠光 泵浦含有Rhodamine6G水溶液的染料激 光器，則可得到550650nm連續(xù)可調(diào)的 激光，尤在590nm處轉(zhuǎn)換

7、效率最高，約 可占到一半。為使細胞得到均勻照射， 并提高分辨率，照射到細胞上的激光光 斑直徑應(yīng)和細胞直徑相近。因此需將激 光光束經(jīng)透鏡會聚。光斑直徑 d可下式 確定：d=4入f/歷D入為激光波長；f為透 鏡焦距；D為激光束直徑。色散棱鏡用 來選擇激光的波長，調(diào)整反射鏡的角度 使調(diào)諧到所需要的波長尢為了進一步使 檢測的發(fā)射熒光更強，并提高熒光訊號 的信噪比，在光路中還使用了多種濾片。 帶阻或帶通濾片是有選擇性地使某一濾 長區(qū)段的光線濾除或通過。例如使用 525nm帶通濾片只允許 FITC發(fā)射的 525nm綠光通過。長波通過二向色性反 射鏡只允許某一波長以上的光線通過而 將此波長以下的另一特定波長

8、的光線反 射。在免疫分析中常要同時探測兩種以 上的波長的熒光信號，就采用二向色性 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 5 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=反射鏡，或二向色性分光器，來有效地 將各種熒光分開。光電管和檢測系統(tǒng)經(jīng)熒光染色的細胞受合適的光激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光是通過光電轉(zhuǎn)換 器轉(zhuǎn)變成電信號而進行測量的。光電倍 增管最為常用。PMT的響應(yīng)時間短，僅 為ns數(shù)量級；光譜響應(yīng)特性好，在200 900nm的光譜區(qū)，光量子產(chǎn)額都比較高。 光電倍增管的增益從10到10可連續(xù)調(diào) 節(jié)，因此對弱光測量十分有利。光電管運行時特別要注意穩(wěn)定性問題，

9、工 作電壓要十分穩(wěn)定，工作電流及功率不 能太大。一般功耗低于；最大陽極電流 在幾個毫安。此外要注意對光電管進行 暗適應(yīng)處理，并注意良好的磁屏蔽。在 使用中還要注意安裝位置不同的 PMT, 因為光譜響應(yīng)特性不同，不宜互換。也 有用硅光電二極管的，它在強光下穩(wěn)定 性比PMT好。 從PMT輸出的電 信號仍然較弱，需要經(jīng)過放大后才能輸 入分析儀器。流式細胞計中一般備有兩 類放大器。一類是輸出信號輻度與輸入信號成線性關(guān)系，稱為線性放大器。線 性放大器適用于在較小范圍內(nèi)變化的信 號以及代表生物學(xué)線性過程的信號，例 DNA測量等。另一類是對數(shù)放大器，輸 出信號和輸入信號之間成常用對數(shù)關(guān) 系。在免疫學(xué)測量中常

10、使用對數(shù)放大器。 因為在免疫分析時常要同時顯示陰性、 陽性和強陽性三個亞群，它們的熒光強 度相差12個數(shù)量級；而且在多色免疫 熒光測量中，用對數(shù)放大器采集數(shù)據(jù)易 于解釋。此外還有調(diào)節(jié)便利、細胞群體 分布形狀不易受外界工作條件影響等優(yōu) 點。計算機和分析系統(tǒng)經(jīng)放大后的電信號被送往計算機分析器。 多道的道數(shù)是和電信號的脈沖高度相對 應(yīng)的，也是和光信號的強弱相關(guān)的。對 應(yīng)道數(shù)年縱坐標通常代表發(fā)出該信號的 細胞相對數(shù)目。多道分析器出來的信號 再經(jīng)模-數(shù)轉(zhuǎn)換器輸往微機處理器編成 數(shù)據(jù)文件，或存貯于計算機的硬盤和軟 盤上，或存于儀器內(nèi)以備調(diào)用。計算機 的存貯容量較大，可存貯同一細胞的6 精選公文范文，管理類

11、，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 7 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=8個參數(shù)。存貯于計算機內(nèi)的數(shù)據(jù)可以在 實測后脫機重現(xiàn)，進行數(shù)據(jù)處理和分析， 最后給出結(jié)果。除上述四個主要部分外， 還備有電源及壓縮氣體等附加裝置。2. 1. 1信號的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)換和傳輸 在壓 力作用下，鞘液管中的鞘液被持續(xù)不斷 地壓入流動室，形成一股穩(wěn)定地連續(xù)的 液流，保證了樣本液穩(wěn)定地處于鞘液液 流的軸線上，并以單個細胞形式直線通 過激光照射區(qū)。激光照射區(qū)又稱測量區(qū)， 是指液流與激光束垂直相交的點。當細 胞攜帶熒光素標記物通過激光照射區(qū) 時，產(chǎn)生代表細胞內(nèi)部不同物質(zhì)、不同 波長的熒

12、光信號，這些信號以細胞為中 心，向空間360立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射 光和熒光信號。散射光不依賴任何細胞 樣品的制備技術(shù)，因此被稱為細胞的物 理參數(shù)或固有參數(shù)。散射光又包括前向 角散射和測向角散射。前向角散射與被 測細胞直徑的平方密切相關(guān)，測向角散 射光對細胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更 敏感，可提供有關(guān)細胞內(nèi)精細結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。熒光信號也有二種；一 種是細胞自身在激光照射下發(fā)出的微弱 熒光信號，另一種是經(jīng)過特異熒光素標 記后的細胞受激發(fā)照射后得到的熒光信 號。在免疫分析中常要同時探測兩種以 上波長的熒光信 號，就采用二向色 性反射鏡，或二向色性分光器，來有效 地將各種熒光分開。 經(jīng)熒光染色的

13、細胞受到適合的光激發(fā)后產(chǎn)生的熒光是 通過光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變成電信號而進行測 量的。最常用的光電轉(zhuǎn)換器是光電倍增 管。從PMT輸出的電信號需要經(jīng)過放大 后才能輸入分析儀器。流式細胞儀中一 般備有兩類放大器。一類是線性放大器, 其輸出信號與輸入信號成線性關(guān)系。線 性放大器適用于在較小范圍內(nèi)變化的信 號以及代表生物學(xué)線性過程的信號，如 DNA測量等。另一類是對數(shù)放大器，其 輸出信號和輸入信號之間成常用對數(shù)關(guān) 系。在免疫學(xué)測量中常使用對數(shù)放大器。 放大后的電信號被傳送到計算機，再經(jīng) 模一數(shù)轉(zhuǎn)換器傳輸?shù)轿C處理器形成數(shù)據(jù)文件，保存在計算機上。保存在計算 機上的數(shù)據(jù)可在脫機后再進行數(shù)據(jù)處理 和分析。參數(shù)測量原

14、理流式細胞儀可同時進行多參數(shù)測量，信息 主要來自特異性熒光信號及非熒光散射 信號。測量是在測量區(qū)進行的，所謂測 量區(qū)就是照射激光束和噴出噴孔的液流 束垂直相交點。液流中央的單個細胞通 過測量區(qū)時，受到激光照射會向立體角 為2n的整個空間散射光線，散射光的波 長和入射光的波長相同。散射光的強度 及其空間分布與細胞的大小、形態(tài)、質(zhì) 膜和細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，因為這些 生物學(xué)參數(shù)又和細胞對光線的反射、折 射等光學(xué)特性有關(guān)。未遭受任何損壞的 細胞對光線都具有特征性的散射，因此 可利用不同的散射光信號對不經(jīng)染色活 細胞進行分析和分選。經(jīng)過固定的和染 色處理的細胞于光學(xué)性質(zhì)的改變，其散 射光信號當然不同于

15、活細胞。散射光不 僅與作為散射中心的細胞的參數(shù)相關(guān)， 還跟散射角、及收集散射光線的立體角等非生物因素有關(guān)。在流式細胞術(shù)測量中，常用的是兩種散射方向的散 射光測量：前向角散射；側(cè)向散射， 又稱90角散射。這時所說的角度指的是 激光束照射方向與收集散射光信號的光 電倍增管軸向方向之間大致所成的角 度。一般說來，前向角散射光的強度與 細胞的大小有關(guān)，對同種細胞群體隨著 細胞截面積的增大而增大；對球形活細 胞經(jīng)實驗表明在小立體角范圍內(nèi)基本上 和截面積大小成線性關(guān)系；對于形狀復(fù) 雜具有取向性的細胞則可能差異很大， 尤其需要注意。側(cè)向散射光的測量主要 用來獲取有關(guān)細胞內(nèi)部精細結(jié)構(gòu)的顆粒 性質(zhì)的有關(guān)信息。側(cè)

16、向散射光雖然也與 細胞的形狀和大小有關(guān)，但它對細胞膜、 胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，也能對 細胞質(zhì)內(nèi)較大顆粒給出靈敏反映。 在實際使用中，儀器首先要對光散射信 號進行測量。當光散射分析與熒光探針 聯(lián)合使用時，可鑒別出樣品中被染色和 未被染色細胞。光散射測量最有效的用精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 11 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=途是從非均一的群體中鑒別出某些亞 群。熒光信號主要包括兩部分：自發(fā)熒光，即不經(jīng)熒光染色細胞內(nèi)部的 熒光分子經(jīng)光照射后所發(fā)出的熒光； 特征熒光，即細胞經(jīng)染色結(jié)合上的熒光 染料受光照而發(fā)出的熒光，其熒光

17、強度 較弱，波長也與照射激光不同。自發(fā)熒光信號為噪聲信號，在多數(shù)情況下 會干擾對特異熒光信號的分辨和測量。 在免疫細胞化學(xué)等測量中，對于結(jié)合水 平不高的熒光抗體來說，如何提高信噪 比是個關(guān)鍵。一般說來，細胞成分中能 夠產(chǎn)生的自發(fā)熒光的分子的含量越高， 自發(fā)熒光越強；培養(yǎng)細胞中死細胞/活細 胞比例越高，自發(fā)熒光越強；細胞樣品 中所含亮細胞的比例越高，自發(fā)熒光越 強。減少自發(fā)熒光干擾、提高信噪比的主要措施是：盡量選用較亮的熒 光染料；選用適宜的激光和濾片光學(xué) 系統(tǒng)；采用電子補償電路，將自發(fā)熒 光的本底貢獻予以補償。2.1.2流式細胞儀分選原理并不是所有的流式細胞儀都具有分選功能。流式細胞儀的 分選

18、功能是細胞分選器來完成的。噴嘴 射出的液流柱在電信號作用下發(fā)生振 動，斷裂形成均勻的小液滴。根據(jù)選定 的某個參數(shù)邏輯電路判明是否將被分 選，而后充電電路對選定細胞液滴充電， 帶電液滴攜帶細胞通過靜電場而發(fā)生偏 轉(zhuǎn)，落入收集器中。使用不同孔徑的噴 孔及改變液流速度，可能會改變分選效 果。從參數(shù)測定經(jīng)邏輯選擇再到脈沖充 電需要一段延遲時間。精確測定延遲時 間是決定分選質(zhì)量的關(guān)鍵，可根據(jù)具體 要求進行適當調(diào)整。2. 1. 3數(shù)據(jù)的顯示和分析數(shù)據(jù)處理主要包括數(shù)據(jù) 的顯示和分析。單參數(shù)直方圖是使用最 多的圖形顯示形式，既可用于定性分析， 又可用于定量分析。單參數(shù)直方圖是X、 Y二方向組成的二維平面圖。橫

19、座標 X 是所測的熒光或散射光的強度，用 道 數(shù)”來表示。選擇的放大器類型不同，標 度不同?？v座標Y通常表示被測細胞的 絕對數(shù)目。正常情況下，數(shù)據(jù)分析得到精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 13 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=的圖形為具有一個或若干個峰的曲線 圖。對曲線圖的解釋應(yīng)該具體問題具體 分析。除直方圖外，數(shù)據(jù)顯示方式還包括二維點圖、二維等高圖、假三維 圖和列表模式等。二維點圖也是比較常 用的數(shù)據(jù)顯示類型。它顯示兩個獨立參 數(shù)與細胞相對數(shù)之間的關(guān)系，也是二維 平面圖，橫縱坐標可以根據(jù)自己選定的 被測參數(shù)自行決定，點的位置表明

20、了細 胞和顆粒具有的二個被測參數(shù)的數(shù)值。 二維點圖所提供的信息量要大于單參數(shù) 直方圖。數(shù)據(jù)分析的方法大體可分為參數(shù)法和非參數(shù)法兩大類。當被檢測 的生物學(xué)系統(tǒng)能夠用某種數(shù)學(xué)模型時則 多使用參數(shù)方法。非參數(shù)分析法不用對 顯示的圖像做任何假設(shè)，也不采用數(shù)學(xué) 模型，分析程序可以很簡單，也可能很 復(fù)雜。臨床醫(yī)學(xué)較常使用非參數(shù)分析法。2. 2流式細胞儀性能的技術(shù)指標流式 細胞儀性能的技術(shù)指標主要有熒光分辨 率、熒光靈敏度、適用樣品濃度、分選 純度等。熒光分辨率是指分辨兩個相鄰峰的最小距離，通常用變異系數(shù)來表示。 現(xiàn)在市場上主流型號出廠時的熒光分辨 率應(yīng)該小于。熒光靈敏度反映了儀器 探測最小熒光光強的能力。

21、一般用熒光 微球上可測出的FITC的最少分子數(shù)來 表示。目前儀器均可達到1000左右。儀 器工作時樣品濃度一般在105107細胞 /ml。分析速度/分選速度是指流式細胞儀 每秒種可分析或分選的顆粒數(shù)目。一般 分析速度為500010000,分選速度控制 在1000以下。流式細胞儀測量的數(shù)據(jù)是 相對值，因此需要在使用前對系統(tǒng)進行 校準或標定。流式細胞儀的校準有二個 目的，即儀器的準直調(diào)整和定量標度。 通常使用標準微球作為非生物學(xué)標準樣 品，雞血紅細胞做為生物學(xué)標準樣品。 3主流流式細胞儀型號及其特性介紹 目前擁有市場較大份額的公司是美國的 BD公司、Beckman-Coulter公司和德國 的Pa

22、rtec公司。3. 1 BD公司流式精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 15 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載細胞儀介紹BD公司生產(chǎn)的流式細胞儀 都冠以FACs,即熒光激活細胞分選器。其型號種類比較齊全，如早期的 FACSort、FACS Canto FACSean 現(xiàn)在 市場上供應(yīng)的型號有五種：FACSCount、FACS CAlibur、 FACSA ria、 FACSVantage SETM、LSR II 為精確計數(shù)淋巴細胞FACSCountCD3, CD4, CD：絕對數(shù)而設(shè)計的。FACSCalibur是全自動 多色流式系統(tǒng)，偏

23、重于臨床，其整體設(shè) 計幫助臨床醫(yī)生快速實現(xiàn)常規(guī)免疫表 型、CD4T細胞計數(shù)、DNA、網(wǎng)織紅細 胞、血小板等臨床分析，兼具分選功能。配備有二根激光管，可同時檢測 4個熒 光參數(shù)。可識別粘聯(lián)細胞。BDFACSA ria流式細胞分選儀為臺式高速 細胞分選儀，獲取速度達70, 000細胞/s, 分析速度達50, 000/So使用石英杯流動 檢測池固定光路校準技術(shù)。使用三種激 光，多色分析，分析參數(shù)可達15色。兩 管或四管分選，可以使用多種規(guī)格的收 集管。液流監(jiān)測系統(tǒng)白動監(jiān)測液流斷點， 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 16 檢查堵塞，實現(xiàn)了細胞分選的無人操作。 配件BDA

24、CDU裝置，可以在微孔板或載 波片上定量分選細胞。 FACSV antage SETM是在 FACSV antage 的細胞 分選功能基礎(chǔ)上推出的分選增強型流式 細胞儀。六色熒光分析系統(tǒng)，點對點分 選，配置FACS Diva數(shù)字化系統(tǒng)，提供 全面的配套試劑。速度和功能優(yōu)于 FACSV antage BD LSR II 是 LSR 的數(shù) 字化升級版，其性能介于FACSV antage SE和FACS Calibur之間，是專為生命科 學(xué)研究設(shè)計的臺式機。配備固定校準的 紫外激光，四種激光立體空間激發(fā)、十 色熒光同時分析、電子系統(tǒng)數(shù)字化、比 較易學(xué)易用。3.2 Beckman-Coulter公司流

25、式細胞儀介紹 Beckman- Coulter 公司生產(chǎn)的流式細胞儀以Profile和 EPICS系列為代表，近年又推出了 Cytomics FC500 系列。EPICS 系列是大 型流式細胞儀，目前市場上有XL、XL-MCL和ALTRA三種型號，其中 ALTRA具有分選功能，適用于免疫學(xué)、 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 17 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=細胞生理、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、微生 物學(xué)、水質(zhì)分析和植物細胞分析。Cytomics FC500系列流式細胞儀體積 小，可自動進行5種顏色的分析，適用 于免疫學(xué)檢測，如人類

26、HIV診斷。特別 是FC500MPL的獨特設(shè)計可以在同一系 統(tǒng)上使用12X75mm的離心管和24或96 孔的平板。特別適合工作量大的實驗室。 這二個公司主要針對醫(yī)學(xué)研究和臨床工 作進行設(shè)計和生產(chǎn)，其產(chǎn)品可應(yīng)用于生 物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究以及臨床檢測的許多領(lǐng)域，如遺傳、腫瘤、血液、免疫等 諸多研究中紅細胞、T細胞、淋巴細胞 亞群測定、檢測早期細胞凋亡、腫瘤細 胞免疫測定等。這二個公司的流式細胞 儀價格昂貴，我國主要購買、使用的單 位基本上都是一些醫(yī)療機構(gòu)。3. 3Partec公司流式細胞儀介紹 與BD和 Becman-Coutler公司的產(chǎn)品相比，德國 Partec公司生產(chǎn)的流式細胞儀的共同特 點是體積

27、小，造價低，易操作，便于攜 帶，適合植物學(xué)研究，適合邊遠地區(qū)和精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 19 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載發(fā)展中國家。德國Partec公司的產(chǎn)品分 為三類：CCA家族、PAS家族和CyFlow 家族。CCA家族包括細胞計數(shù)分析儀 CCA和倍性分析儀PA-L它是單或雙參 數(shù)的臺式小型機，可以進行一些常規(guī)分 析，如核DNA測定、細胞計數(shù)、細胞凋 亡。它的特點是體積小，易操作，價格 低，檢測范圍廣，可以檢測多種熒光素 發(fā)出的熒光。PAS家族包括粒子分析系 統(tǒng)PAS粒子分析系統(tǒng)III和倍性分析儀PA-II o提供三

28、種激光器的三種組合，可 檢測十余種熒光染料。最多可檢測和記 錄八個獨立熒光參數(shù)。倍性分析儀PA能 夠在2分鐘內(nèi)自動測量植物的倍性水平， 檢測異倍體?？梢詫θ~片、幼苗、種子、 果皮、根、花等植物材料進行分析。在 大多數(shù)植物中，異倍體染色體的檢測分辨率為1條染色體。PA-I使用HBO-100汞燈，屬于弧光燈，可產(chǎn)生紫外激發(fā)光 光器，能夠檢測幾乎所有的熒光染料，和藍光。PA-II中增加了 4nm僦離子激如 DAPI, Hoeehst, PI, EB, MMC , FITC,精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 19 FDA等。汞燈發(fā)光是電流經(jīng)過氣體時， 氣體電離產(chǎn)生的。它能

29、提供最佳的激發(fā) 波長。 CyFlowSL配備三種激光管, 可應(yīng)用于諸如人類健康、微生物學(xué)、工 業(yè)應(yīng)用、過程控制、生態(tài)學(xué)等研究。如HIV掃描中免疫標記細胞計數(shù)、食品處 理過程中的微生物計數(shù)、細胞凋亡等。它使用12 V直流電，特別適合邊遠地區(qū)和發(fā)展中國家國際上20世紀80年代開始將流式細胞儀檢測應(yīng)用到植物 的研究中，眾多學(xué)者都認為流式細胞儀 是一種準確、快速的檢測DNA含量的方 法。應(yīng)用范圍主要是利用流式細胞儀研 究屬內(nèi)、屬間多種植物的DNA含量和倍 性水平、檢測體細胞雜種和游離小抱子 培養(yǎng)再生株的DNA含量。過去我國應(yīng)用 這一檢測技術(shù)的植物研究工作者寥寥無 幾，且大多是在國外實驗室完成的。研 究

30、內(nèi)容包括植物生理、程序性死亡、倍 性鑒定等。植物研究中使用的流式細胞 儀基本上都是Partec公司的產(chǎn)品，也有 少量是BD公司生產(chǎn)的流式細胞儀。BD精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 21 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=公司的產(chǎn)品主要定位于醫(yī)學(xué)研究與應(yīng) 用，與Partec產(chǎn)品相比，不太適合從事 植物染色體倍性的鑒定。主要體現(xiàn)在不 能提供植物樣品制備技術(shù)/試劑，數(shù)據(jù)獲 取軟件可同時檢測到的倍性數(shù)目少。鑒 于目前我國科研院所中使用較多的是 BD公司生產(chǎn)的流式細胞儀，在下一篇中 將會對利用BD流式細胞儀進行植物倍 性檢測的技術(shù)和技巧做詳

31、細報告。 如何選擇流式細胞儀自七十年代出現(xiàn)第一代流式細胞儀以來，隨著計算 機技術(shù)、電子制造技術(shù)、激光技術(shù)及熒 光素合成技術(shù)的不斷發(fā)展，現(xiàn)代流式細 胞儀已今非昔比，制造工藝、功能、精 確度有了質(zhì)的飛躍。 流式細胞儀生 產(chǎn)廠商推出各種不同型號的流式細胞儀 來滿足用戶的不同需要?，F(xiàn)生產(chǎn)流式細 胞的廠商全球至少有六家，各廠商產(chǎn)品 又有不同的系列，各具特點。如何從眾 多的型號中挑選出最適合自己的機型， 我們還需從分析應(yīng)用出發(fā)，評估自己的 需求來決定什么樣的流式細胞儀最具性精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 23 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載價

32、比、最適合自己。 、DNA倍體分析 DNA分析是流式細胞儀最初且是現(xiàn)在應(yīng)用最廣檢測項目。于惡性細胞DNA含量通常與正常細胞不同，存在異 倍體細胞，所以現(xiàn)有很研究評價異倍體 細胞與腫瘤惡性度及其預(yù)后的關(guān)系。DNA含量檢測還可提供細胞周期方面的 信息，這在細胞生物學(xué)中運用很廣泛。 特別地，它可表示出細胞毒性藥物對細 胞作用過程。這些DNA檢測還可與細胞 表面標志物標記同時進行，這樣在細胞 混合培養(yǎng)中，可通常追蹤表達特異標志 物的細胞顯示其生長周期情況。所有方 法都是基于染料能與核酸起特異的化學(xué)反應(yīng)并發(fā)射出熒光，常用的染料為 PI,DAPI流式細胞儀要求:nm光源，575nm濾光片。、細胞生存能 力

33、實驗 使用Heochest 3334維料與DNA特異性結(jié)合，后因細胞活力不同， 染料的結(jié)合程度也各異，故可評估細胞 的活性度。流式細胞儀要求：360nm光源，455nm濾光片。、計數(shù)外周血 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 22 中檢測網(wǎng)織紅細胞使用TO染料能 夠特異性地與RNA結(jié)合，結(jié)合系數(shù)高達3000）故具有很好的性價比。流式細胞儀要求:488nm光源）525nm濾光片,液量絕對計數(shù)系統(tǒng)。、外周血、 骨髓采集物中CD34陽性干細胞計數(shù), 臨床上用于骨髓移植前干細胞數(shù)理的測定使用標準ISHAG方案，需要DNA或其他核染料占用 FITC通道，PE 標t己CD34抗

34、體，PE-CY5標t己CD45抗體。流式細胞儀要求:nm光源）525nm、575nm、675nm濾光片）液量絕對計數(shù)系統(tǒng)。 、交叉淋巴細胞、粒細胞毒實驗檢測識別供體血清中免 疫球蛋白與受體粒細胞之間是否存在反 應(yīng)有著重要臨床意義，因為這種反應(yīng)會 導(dǎo)致移植后發(fā)熱、移植后肺損傷及免疫 性粒細胞缺乏癥。流式細胞儀可檢測全血樣本與血清孵育后粒細胞上結(jié)合的人免疫球蛋白。FITC標記人免疫球蛋 白抗體、PE標記粒細胞表面標志物、PE-CY5標記HLA抗體。流式細胞儀要精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 23 =精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載=nm

35、 光源）525nm、575nm、675nm濾光片。、血小板自身抗體檢測 血小板自身抗體識別人血小板抗原，會 引起各種臨床相關(guān)癥狀，如新生兒自免 性血小板減少癥、輸血后紫瘢、難治性血小板減少。流式細胞可快速準確地檢 測血小板自身抗體。FITC標記抗人免疫 球蛋白抗體、PE標記識別血小板抗體。流式細胞儀要求:488nm光源）525nm、精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 # 575nm濾光片。、移植交叉配型原細胞毒實驗，主要用于避免移植物超 急性排拆反應(yīng)。流式細胞儀用于監(jiān)測 T或B細胞是否受到受體血清中免疫球蛋 白攻擊，作為HLA配型前的預(yù)實驗。流 式細胞儀因其高精確性

36、已成為該領(lǐng)域內(nèi) 的金標準。FITC標記抗人免疫球蛋白抗 體、PE標記識別T細胞CD3或B細胞nm光源）、檢測細胞CD29抗體。儀器要求:525nm、575nm 濾光片。經(jīng)抗原或細胞有絲分裂刺激后活化效應(yīng) 淋巴細胞早期活化指標 CD69可用來檢 測免疫治療效果。流式細胞使用三色分精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載析可監(jiān)測淋巴細胞各亞群活化情況:FITC標記的CD3抗體、PE標記的CD；抗體、PE-CY5標記的CD69抗體。 流 式細胞儀要求：488nm光源，525nm、575nm、575nm濾光片。、檢測細胞內(nèi)因子 未活化的淋巴細胞所分泌 的細胞因子極少，用流式細胞儀

37、很難檢 測出來，因此在檢測前需刺激活化?；?化所用的刺激素為PMA佛波酯+Ionomycin。淋巴細胞在刺激素的作用 下，活化分泌細胞因子到細胞外。因流 式細胞儀只能對細胞表面或內(nèi)部的抗原 進行檢測，如細胞因子分泌到細胞外則 檢測不到，因此必須阻止細胞因子的分 泌。抑制細胞因子分泌的試劑為Brefedlin A 或 Monensin。Th1/Th2 細胞 首先是CD4+T細胞，因此存在著用CD4 來設(shè)定細胞群的問題。我們知道CD4不 但在T細胞上表達，還在所有的單核細 胞上表達，因此單獨用CD4設(shè)門無法將 CD4+T細胞區(qū)分開來。那么我們用CD3 和CD4雙參數(shù)設(shè)門是否可以呢？回答是 精選公文

38、范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 25 精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，歡迎閱讀下載否定的。因為在佛波酯的刺激作用下CD4抗原的表達會迅速下調(diào)，甚至完全 喪失，所以不適合于設(shè)門。用 CD3和CD8設(shè)門，因CD8不受佛波脂的影響且 絕大多數(shù)CD3+CD8-的細胞都是CD3+CD4+細胞，因此可用CD3+CD8-精選公文范文，管理類，工作總結(jié)類，工作計劃類文檔，感謝閱讀下載 31 細胞群來確定CD4+T細胞群。FITC標 記CD8, PE標記IL-4和，PE-CY5標記IFN-r , APC 或 PE-CY7 標t己 CD3流式細胞儀要求:；nm或633nm

39、光源525nm、575nm、675nm, 767nm濾光片。(10)、細胞增殖狀態(tài)檢測核增殖抗PCNA、Ki67、BrdUrd用于衡量細胞增 殖分裂狀況，在評估腫瘤預(yù)后有重要意 義。為些標志物的檢測一般同細胞表面標志物同時檢測。FITC標記PCNA 或 Ki67 或 BrdUrd , PE 或 PE-CY5 標記 細胞表面標志物。流式細胞儀要求：488nm 或633nm光源,525nm、575nm、675nm濾光片。(11)、染色體分析流式細胞儀染色分析運用兩種特異性染料:Hoechest3325i與核昔酸AT 結(jié)合；Chromomycin A3 與 GC 相結(jié) 合。從而在雙參數(shù)坐標上根據(jù)染色

40、體 ATCG含量的不同識別各種染色體。平 時進行的染色體分析耗時且需要操作者 極具經(jīng)驗，而用流式細胞儀時可快速地 識別出異常染色體，如加配分選系統(tǒng)可 將這些異常染色體分選出來作進一步分 析。流式細胞儀要求：360nm或488nm 光源）450nm、580nm 濾光片。（12）、BrdUrd標記追蹤細胞分化通過細胞分化時涉入澳化尿喀咤，再使用抗 BrdUrd抗體及PI核酸染料可精確識別 它們。在流式細胞儀上可清楚地識別出 處于G1、S、G2、M期的細胞，在腫瘤 研究中有著重要作用。流式細胞儀要求:488nm光源）525nm、575nm 濾光片。（13）、淋巴細胞亞群分析外周血 CD3、CD4、CD8、CD19、NK等各類淋巴細胞亞群定量分析。流式細胞儀要求:nm 光源）525nm、575nm濾光片，液量絕對計數(shù)