微生物檢查方法驗(yàn)證方案

1、微生物限度檢查方法驗(yàn)證方案編號(hào)部門(mén)起草人起草日期審核人所在部門(mén)簽字日期 年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日年 月 日方案的批準(zhǔn)及實(shí)施日期:批準(zhǔn)人: 年 月 日目 錄1、 概述2、 驗(yàn)證目的3、 驗(yàn)證條件4、 驗(yàn)證步驟5 驗(yàn)證試驗(yàn)小結(jié)1.概述微生物限度為產(chǎn)品質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)，其檢查方法的選擇對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果真實(shí)性有很大的影響，為此必須對(duì)其檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證。2.驗(yàn)證目的通過(guò)對(duì)微生物限度檢查方法的驗(yàn)證，確認(rèn)在正常條件下本檢驗(yàn)方法處于控制狀態(tài)，且能夠穩(wěn)定地對(duì)公司產(chǎn)品進(jìn)行有效的微生物的檢查和控制。確認(rèn)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的適用性。3.

2、驗(yàn)證條件3.1驗(yàn)證小組成員與分工成員姓名所在部門(mén)分工生產(chǎn)部負(fù)責(zé)組織協(xié)調(diào)和安排實(shí)際生產(chǎn)。生產(chǎn)車(chē)間按照要求組織生產(chǎn)。質(zhì)量部負(fù)責(zé)起草驗(yàn)證方案，負(fù)責(zé)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控，現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)實(shí)施和對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行匯總、分析、總結(jié)以及完成驗(yàn)證報(bào)告檢驗(yàn)室負(fù)責(zé)安排檢驗(yàn)工作3.2 參加本方案實(shí)施操作的人員須事先進(jìn)行微生物限度檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序的培訓(xùn)，能熟練掌握檢查方法和原理，熟悉本方案的內(nèi)容。3.3驗(yàn)證所用的各類(lèi)物料均應(yīng)符合相應(yīng)的規(guī)定或標(biāo)準(zhǔn)。相應(yīng)的設(shè)備須驗(yàn)證的應(yīng)事先進(jìn)行驗(yàn)證并符合要求。4.驗(yàn)證步驟41驗(yàn)證依據(jù)參照2010年版中國(guó)藥典微生物限度檢查計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證42與驗(yàn)證有關(guān)的文件微生物限度檢查標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件編號(hào)：SOP-Z

3、L-010凈化工作臺(tái)標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件編號(hào)：SOP-ZL-032 43驗(yàn)證用材料431試驗(yàn)樣品 藥品包裝用復(fù)合膜產(chǎn)品432實(shí)驗(yàn)菌株 1金黃色葡萄球菌 CMCC（B）260032大腸埃希菌 CMCC（B）441023枯草芽孢桿菌 CMCC（B）635014白色念株菌CMCC（F）980015黑曲霉CMCC（F）98003以上菌株購(gòu)自省藥品檢驗(yàn)所。44細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證441驗(yàn)證方法4411菌液制備 接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯中，培養(yǎng)1824小時(shí)；接種白色念株菌至改良培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2448小時(shí)，上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為

4、50100CFU的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)57天，加入35ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，吸出孢子懸液（用管口帶有薄的無(wú)菌紗布能過(guò)濾菌絲的無(wú)菌毛細(xì)吸管）至無(wú)菌試管內(nèi)，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)為50100CFU的孢子懸液，備用。4412供試液制備 取藥品包裝用復(fù)合膜用開(kāi)孔面積為20cm2消毒過(guò)的金屬模板壓在內(nèi)層面上，將無(wú)菌棉簽用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稍沾濕，在板孔范圍內(nèi)擦抹5次，換一支棉簽再擦抹5次，每個(gè)位置用2支棉簽共擦抹10次，共擦抹5個(gè)位置100cm2。每支棉簽?zāi)ㄍ旰罅⒓醇魯啵ɑ驘龜啵?，投入盛?0mL0.9%無(wú)菌氯化

5、鈉溶液的錐形瓶（或大試管）中。全部擦抹棉簽投入瓶中后，將瓶迅速搖晃1分鐘，即得供試液。4413試驗(yàn)組供試液的制備 取1：10的供試液3ml和50100CFU的試驗(yàn)菌液，注入營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，平行制備2個(gè)平皿，置適宜溫度培養(yǎng)2472小時(shí)，觀(guān)察結(jié)果。按中國(guó)藥典2010年版微生物限度菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定菌數(shù)。4414菌液組供試品的制備 取菌液1ml分別注入平皿中，立即傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，平行制備2個(gè)皿，置適宜溫度培養(yǎng)2472小時(shí)，觀(guān)察結(jié)果。按中國(guó)藥典2010年版微生物限度菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定菌數(shù)。4415供試品對(duì)照組供試品的制備 取供試液1ml，立即傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，平行制備2個(gè)皿，置適宜溫度培養(yǎng)2472小

6、時(shí)，觀(guān)察結(jié)果。按中國(guó)藥典2010年版微生物限度菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定本品的本底數(shù)。4416菌落數(shù)回收率計(jì)算試驗(yàn)組平均數(shù)供試品對(duì)照組平均數(shù)試驗(yàn)組的菌回收率（%）= - ×100%菌液組的平均菌落數(shù)4417回收率測(cè)定結(jié)果見(jiàn)附件一。45控制菌檢查驗(yàn)證451大腸埃希菌檢查的驗(yàn)證方法4511菌液制備 接種大腸埃希菌至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)1824小時(shí)，培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為10100CFU的菌懸液。4512試驗(yàn)組：取上述供試液10ml和10100CFU的大腸埃希菌加入膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24小時(shí)。4513陰性菌對(duì)照組：將金黃色葡萄球菌10100CFU加入膽鹽乳糖培養(yǎng)基中

7、，培養(yǎng)24小時(shí)。取上述培養(yǎng)物0.2ml，接種至含5mlMUG培養(yǎng)基中培養(yǎng)，于5小時(shí)、24小時(shí)在366nm紫外光線(xiàn)下觀(guān)察，同時(shí)用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對(duì)照。若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)熒光，為MUG陽(yáng)性；不呈現(xiàn)熒光，為MUG陰性。觀(guān)察后沿培養(yǎng)基的管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽(yáng)性；呈試劑本色，為靛基質(zhì)陰性。4514控制菌驗(yàn)證試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)附件二。附件二： 控制菌（大腸埃希菌）驗(yàn)證測(cè)定內(nèi) 容增 菌 組M U G靛 基 質(zhì)試驗(yàn)組陰性菌對(duì)照組附件一： 菌回收率測(cè)定結(jié)果表菌 種試 驗(yàn)次 數(shù)供試品稀釋倍數(shù)菌 落 計(jì) 數(shù)回 收 率試 驗(yàn) 組菌 液 組供 試 品對(duì) 照 組試 驗(yàn) 組大腸埃希菌11：1021：1031：10金黃色葡萄球菌11：1021：1031：10枯草芽孢桿菌11：1021：1031：10白色念株菌11：1021：1031：10黑曲霉11：1021：1031：105驗(yàn)證試驗(yàn)小結(jié)本品經(jīng)采用平皿法處理后，對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、白色念株菌、黑曲霉生長(zhǎng)無(wú)影響，其試驗(yàn)組回收率達(dá)70%以上