酶的基本性質(zhì)實驗

1、專業(yè)： 姓名： 學(xué)號： 日期： 地點： 裝 訂 線實驗報告課程名稱：生物化學(xué)實驗（甲） 指導(dǎo)老師： 成績：_同組學(xué)生姓名： 一、實驗?zāi)康暮鸵螅ū靥睿┒嶒瀮?nèi)容和原理（必填）三、實驗材料與試劑（必填） 四、實驗器材與儀器（必填）五、操作方法和實驗步驟（必填） 六、實驗數(shù)據(jù)記錄和處理七、實驗結(jié)果與分析（必填） 八、討論、心得 酶的基本性質(zhì)實驗 A、底物專一性1、 實驗?zāi)康暮鸵螅?. 了解酶的專一性；2. 掌握驗證酶的專一性的基本原理及方法；3. 學(xué)會排除干擾因素，設(shè)計酶學(xué)實驗。2、 實驗內(nèi)容和原理： 酶催化作用的一個重要特點是具有高度的底物專一性，即一種酶只能對某一種底物或一類底物起催化作用

2、，對其他底物無催化反應(yīng)。 相對專一性酶的專一性 絕對專一性 立體異構(gòu)專一性 本實驗以唾液淀粉酶、蔗糖酶對淀粉、蔗糖水解反應(yīng)的催化作用來觀察酶的專一性。采用Benedict試劑檢測反應(yīng)產(chǎn)物。 Benedict試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定的氧化能力，能與還原性糖的半縮醛羥基發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成磚紅色氧化亞銅沉淀。 Na2CO3+ 2H2O 2NaOH + H2CO3 CuSO4+ 2NaOH Cu(OH)2+ Na2SO4 還原糖(CHO or C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu2O + 2H2O + 糖的氧化產(chǎn)物 醛基 酮基 磚紅色或紅色 在分子結(jié)構(gòu)上，淀粉幾乎沒有，而蔗糖全無半縮醛基，它們

3、均無還原性，因此它們與Benedict試劑無呈色反應(yīng)。淀粉被淀粉酶水解，產(chǎn)物為葡萄糖；蔗糖被蔗糖酶水解，其產(chǎn)物為果糖和葡萄糖，它們都為具有自由半縮醛羥基的還原糖，與Benedict試劑共熱，即產(chǎn)生紅棕色Cu2O沉淀。 本實驗以此顏色反應(yīng)觀察淀粉酶、蔗糖酶對淀粉和蔗糖的水解作用。3、 實驗材料與試劑：1、實驗材料 蔗糖酶液(樣品1：10稀釋）; 新鮮唾液（含唾液淀粉酶）。2、實驗試劑 蔗糖酶液(樣品1：10稀釋）； 唾液淀粉酶液（唾液1：200稀釋） 5%蔗糖（A.R.）溶液； 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）； Benedict試劑。4、 實驗器材與儀器：1.漏斗； 2.脫脂棉花； 3.

4、恒溫水?。?7，100）； 4.量筒；5.試管及試管架；6.燒杯；7.吸量管。5、 操作方法和實驗步驟：往1，2，3試管中分別加入蒸餾水、5%蔗糖溶液、0.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液3ml 檢查試劑往三支試管中各加入Benedict試劑2ml取三支試管，編號1，2，3 將三支試管搖勻，置于沸水浴中煮沸23min記錄觀察結(jié)果 （2） 淀粉專一性往1，2，3試管中分別加入蒸餾水、5%蔗糖溶液、0.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液3ml往1，2，3試管中各加入唾液淀粉酶液1ml取三支試管，編號1，2，3 將三支試管搖勻，置于沸水浴中煮沸23min往三支試管中各加入Benedict試劑2ml搖勻

5、，置于37水浴中保溫10min 記錄觀察結(jié)果 往1，2，3試管中分別加入蒸餾水、5%蔗糖溶液、0.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液3ml（3） 蔗糖酶的專一性往1，2，3試管中各加入蔗糖酶液1ml取三支試管，編號1，2，3 將三支試管搖勻，置于沸水浴中煮沸23min往三支試管中各加入Benedict試劑2ml搖勻，置于37水浴中保溫10min 記錄觀察結(jié)果6、 實驗結(jié)果與分析：（1） 檢查試劑：試劑處理 試管編號1230.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液（ml）35%蔗糖溶液 （ml）3蒸餾水 （ml）3Benedict試劑 （ml）222 搖勻，沸水浴23分鐘記錄觀察結(jié)果 （2） 淀粉酶專一

6、性：試劑處理試管編號1230.5%淀粉溶液 （ml）35%蔗糖溶液 （ml）3蒸餾水 （ml）3唾液淀粉酶溶液 （ml）111 搖勻，37水浴10分鐘Benedict試劑 （ml）222 搖勻，沸水浴23分鐘記錄觀察結(jié)果 （三）蔗糖酶專一性： 試劑處理試管編號1230.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液 （ml）35%蔗糖溶液 （ml）3蒸餾水 （ml）3蔗糖酶溶液 （ml）111 搖勻，37水浴10分鐘Benedict試劑 （ml）222 搖勻，沸水浴23分鐘記錄觀察結(jié)果 七、討論、心得：1、 設(shè)計第一組實驗的目的是為了檢測是否存在干擾因素；第二組實驗是為了驗證淀粉酶的底物專一性；第三組實驗是

7、為了驗證蔗糖酶的底物專一性。2、 三組實驗中的蒸餾水都是作為對照用的。3、 淀粉溶液中0.3%NaCl的作用是為了保證淀粉酶的活性，同時氯離子作為激活劑，可以增加酶的活性，使反應(yīng)現(xiàn)象更加明顯。4、 試管要潔凈，所有試劑加量要準確，加好試劑后要搖勻。使用試劑時不要人為造成試劑間的互相污染；試劑用好瓶蓋要立即蓋好，防止試劑間的互相污染。以免實驗結(jié)果的錯誤。B、影響酶活性的因素激活劑、抑制劑1、 實驗?zāi)康暮鸵螅?. 了解激活劑和抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響；2. 學(xué)習(xí)檢定激活劑和抑制劑影響酶促反應(yīng)速度的原理和方法。2、 實驗內(nèi)容和原理：激活劑：能使酶的活性增加的物質(zhì)。抑制劑：不引起酶蛋白變性，但能使

8、酶分子上的某些必需基團（主要是指酶活性中心上的 一些基團）發(fā)生變化，因而引起酶活力下降，甚至喪失，致使酶反應(yīng)速度降低的 物質(zhì)。本實驗利用淀粉被水解的不同階段產(chǎn)物與碘有不同顏色反應(yīng)，定性觀察唾液淀粉酶在酶促反應(yīng)中激活或抑制現(xiàn)象。淀粉經(jīng)酶促水解為葡萄糖的不同階段的產(chǎn)物與碘作用的顏色反應(yīng)如下： 淀粉紫色糊精紅色糊精無色糊精麥芽糖葡萄糖加碘液加碘液加碘液加碘液加碘液加碘液 顯藍色 顯紫色 顯紅色 不顯色 不顯色 不顯色 還原性 還原性本實驗中，氯離子為唾液淀粉酶的激活劑；銅離子為唾液淀粉酶的抑制劑。利用淀粉被水解的不同階段產(chǎn)物與碘有不同的呈色反應(yīng)，定性觀察唾液淀粉酶在酶促反應(yīng)中激活和抑制現(xiàn)象。 淀粉

9、+ 碘 藍色淀粉 + 淀粉酶 Cl-或Cu2+ 水解產(chǎn)物 + 碘液 顏色變化水解的程度是通過水解混合物遇碘溶液所呈現(xiàn)的顏色之變化來判斷的。 3、 實驗材料與試劑： 1、實驗材料 新鮮唾液（1：200稀釋）2、實驗試劑 唾液淀粉酶（自制） 0.1% 淀粉溶液 1.0% 氯化鈉溶液 1.0% 硫酸銅溶液 1.0% 硫酸鈉溶液 碘化鉀-碘液4、 實驗器材與儀器：1.試管及試管架2.量筒3.漏斗4.脫脂棉花5.點滴板6.吸量管7.恒溫水?。?7）5、 操作方法和實驗步驟：往八支試管中分別加入3ml 0.1%淀粉溶液、1ml 蒸餾水和1ml 淀粉酶溶液混勻，分別置于37水浴中保溫1，2，3，4，5，6，

10、7，8分鐘取八支試管，編號1，2，3，4，5，6，7，8 分別滴加1滴碘液 記錄觀察結(jié)果 1號試管呈紫紅色，2，3，4，5，6，7，8號試管均呈棕黃色，最終確定最佳反應(yīng)時間為1 min。往1，2，3，4號試管中分別加入1ml硫酸銅溶液、1ml氯化鈉溶液、1ml硫酸鈉溶液、1ml蒸餾水分別加入3ml 0.1%淀粉溶液取四支試管，編號1，2，3，4將各管混勻后，置于37水浴中保溫1分鐘分別加入1ml唾液淀粉酶液記錄觀察結(jié)果6、 實驗結(jié)果與分析： 試劑處理試管編號12340.1%淀粉溶液 （ml）33331%CuSO4溶液 （ml）11%NaCl溶液 （ml）11%Na2SO4溶液 （ml）1蒸餾水

11、 （ml）1唾液淀粉酶溶液 （ml）1111 混勻，37水浴1分鐘KI-I2溶液 （滴）1111記錄觀察結(jié)果 7、 討論、心得：1、 本實驗中，試管1是為了驗證抑制劑對酶促反應(yīng)速率的影響；試管2是為了驗證激活劑對酶促反應(yīng)速率的影響；試管3是為了排除氯離子和硫酸根離子的干擾；試管4是作為對照的。2、 抑制劑和變性劑是不同的。抑制劑不引起酶蛋白變性，僅僅是降低其活性，除去后酶的活性恢復(fù)；而變性劑則會破環(huán)酶蛋白原有活性，使酶失去活性，是不可逆的。3、 試管要潔凈，所有試劑加量要準確，加好試劑后要搖勻。使用試劑時不要人為造成試劑間的互相污染；試劑用好瓶蓋要立即蓋好，防止試劑間的互相污染。以免實驗結(jié)果的

12、錯誤。C、影響酶活性的因素溫度 最適溫度測定1、 實驗?zāi)康暮鸵螅?. 了解溫度對酶活力的影響；2. 學(xué)習(xí)測定最適溫度的原理和方法。二、實驗內(nèi)容和原理： 酶的催化反應(yīng)受溫度影響很大，每一種酶所催化的反應(yīng)，在一定條件下，僅在某一溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出最大的活力，即反應(yīng)速度最大時的溫度，這個溫度稱為該酶促反應(yīng)的最適溫度，高于或低于最適溫度時，反應(yīng)速度逐漸下降。因此，酶促反應(yīng)與溫度的關(guān)系，用酶活力對溫度作圖，通常具有鐘罩形曲線特征。 實驗：利用唾液淀粉酶為試驗對象，在065之間選擇不同的溫度，進行酶活力測定。根據(jù)淀粉被唾液淀粉酶水解的程度的不同，遇碘呈現(xiàn)顏色的變化來判斷酶活力的大小及最適溫度。 實驗：采用

13、蔗糖酶為試驗對象，在室溫至75之間選擇不同溫度進行酶活力測定。蔗糖酶的活力常以其反應(yīng)產(chǎn)物還原糖（葡萄糖）的生成量來表示。本實驗選擇3,5二硝基水揚酸法測定還原糖量。在堿性條件下，3,5二硝基水楊酸與還原糖溶液共熱后被還原成紅色氨基化合物，并在一定濃度范圍內(nèi)，還原糖的量與反應(yīng)溶液所呈棕紅色物質(zhì)顏色的深淺程度成正比。因此，可以用分光光度法測定酶促反應(yīng)后生成的還原糖量，從而測定蔗糖水解的速度和酶活力。3、 實驗材料與試劑： 1、實驗材料 蔗糖酶液(樣品1：10稀釋）； 新鮮唾液（1：200稀釋）。2、實驗試劑 0.2mol/L醋酸緩沖液（pH4.6） 5%蔗糖（A.R.）溶液（W/V） 3,5二硝基

14、水揚酸（簡稱DNS）試劑 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl） IK-I2溶液 四、實驗器材與儀器：1. 試管及試管架；2恒溫水浴(37、50、65、75、100） ；3吸量管；4滴管；5點滴板；6分光光度計；7制冰機。5、 操作方法和實驗步驟： 一、溫度對唾液淀粉酶活力的影響1觀察溫度對酶活動的影響：將1，2，3，4，5號試管分別置于冰中、室溫、37水浴、50水浴、65水浴中預(yù)溫5min分別滴加2ml 0.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液取五支試管，編號1，2，3，4，5分別加入經(jīng)過預(yù)溫的淀粉酶液1ml混勻，分別置于各相應(yīng)溫度，保溫1min分別滴加1ml碘液記錄觀察結(jié)果2、繪制溫度-酶活力

15、曲線圖，以反應(yīng)溫度為橫坐標，反應(yīng)液顏色的深淺程度（代表酶活力的大?。榭v坐標。繪制溫度酶活力曲線（鐘罩形），確定唾液淀粉酶的最適溫度。 二、溫度對蔗糖酶活力的影響1、蔗糖酶最適溫度的測定 蔗糖酶液（樣品IV）稀釋10倍，備用。0、1號試管置于室溫中，2、3、4、5號試管分別置于37、50、65、75水浴中保溫3min分別加入1ml 0.2mol/L醋酸緩沖液、0.5ml 5%蔗糖溶液取六支試管，編號0，1，2，3，4，5分別置于相應(yīng)溫度環(huán)境中保溫10 min0號試管中加入0.5 ml蒸餾水，15號管分別加入0.5ml蔗糖酶液。水和蔗糖酶液均經(jīng)過預(yù)溫分別加入1ml DNS測定在520nm下的光吸

16、收值分別加入5 ml蒸餾水混勻，置于沸水浴中5min2、繪制溫度酶的活力曲線圖七、實驗結(jié)果與分析： 1、 溫度對唾液淀粉酶活力的影響：1 觀察溫度對酶活動的影響：試劑處理試管編號123450.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液 （ml）22222溫度 （）0室溫375065 搖勻，預(yù)熱5分鐘唾液淀粉酶溶液（預(yù)溫） （ml）11111 混勻，置于相應(yīng)溫度中保溫1分鐘I2-IK溶液 （滴）11111記錄觀察結(jié)果 2.溫度-酶活力曲線圖：2、 溫度對蔗糖酶活力的影響：1、 蔗糖酶最適溫度的測定： 試劑條件試管編號012345反應(yīng)溫度 （）室溫室溫375065750.2mol/LpH4.6醋酸緩沖液（ml）1111115%蔗糖溶液 （ml）0.50.50.50.50.50.5 混勻，預(yù)熱3分鐘蔗糖酶溶液（預(yù)溫） （ml）H2O 0.50.50.50.50.50.5 混勻，保溫10分鐘DNS （ml）111111 混勻，沸水浴23分