口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導書

1、ujixruj.SSbopcon好好學習天天向上中國3000萬經(jīng)理人首選培訓網(wǎng)站更多免費資料下載請進：http:/好好學習社區(qū)口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導書修訂日期修訂單號修訂內(nèi)容摘要頁次版次修訂審核批準2011/03/30/系統(tǒng)文件新制定4A/0/批準：審核：編制：ujixruj.SSbopcon好好學習天天向上中國3000萬經(jīng)理人首選培訓網(wǎng)站更多免費資料下載請進：http:/好好學習社區(qū)口蹄疫監(jiān)測診斷作業(yè)指導書一、口蹄疫病毒 VP1 結(jié)構蛋白抗體檢測酶聯(lián)免疫吸附試驗1. 適用范圍用于檢測豬、牛、羊血清中的口蹄疫病毒VPI 結(jié)構蛋白抗體，與豬、牛、羊口蹄疫病毒非結(jié)構蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷試劑

2、盒聯(lián)合使用，可區(qū)分 口蹄疫病毒感染動物及疫苗免疫動物。 檢測豬血清應用豬口蹄疫病毒 VP1 結(jié)構 蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷試劑盒；檢測牛、羊血清應用牛、羊口蹄疫病 毒 VP1 結(jié)構蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷試劑盒。2. 檢測試劑口蹄疫病毒 VP1 抗原包被板、樣品稀釋液、酶結(jié)合物、陰性對照、VP1陽性對照、酶結(jié)合物稀釋液、TMB 底物 A 液、TMB 底物 B 液、終止液(I.OMHZSO。)、濃縮洗滌液、稀釋板、一次性封板膜、微孔定位標簽。3. 檢測步驟3.1 使用前將試劑盒恢復到室溫，避免陽光直射或放置在30C以上的環(huán)境中。3.2 取出試劑盒中的樣品稀釋液。A1、B1 兩孔作為陰性對

3、照，Cl、D1 兩 孔作為陽性對照孔，其余孔作檢測孔，每孔一個樣品。3.3 在稀釋板的各孔中加 200 樣品稀釋液。在相應各孔中分別加入 10 此 對照血清或被檢血清樣品。用加樣器重復吹吸數(shù)次。稀釋每個樣品時必須使用 不同的吸頭。3.4 取出抗原包被板ujixruj.SSbopcon好好學習天天向上中國3000萬經(jīng)理人首選培訓網(wǎng)站更多免費資料下載請進：http:/好好學習社區(qū)3.5 分別從稀釋板上取稀釋后的對照血清和被檢血清各100 此，加至抗原包被板的相應孔中，加益或封膜后，置37 士 2C下孵育 60 士 5 分鐘。3.6 洗滌工作液配制：按需要量，用去產(chǎn)離子水或雙蒸水將洗滌液作25倍稀釋

4、3.7 用洗滌工作液洗滌抗原包被板，每孔 300 噸，洗滌 6 次，拍干。3.8 酶結(jié)合物工作液配制：用酶結(jié)合物稀釋液將酶結(jié)合物作100 倍稀釋,現(xiàn)配現(xiàn)用。3.9 每孔加入 100 此酶結(jié)合物工作液，加蓋或封膜后，置 37i2 C下孵育 30 分鐘。3.10 重復 3.7。3.11TMB 底物工作液配制：將 TMB 底物 B 液和 TMB 底物 A 液等量混合， 現(xiàn)配現(xiàn)用。3.12 每孔加入 100 此底物工作液， 加蓋或封膜后， 置 37i2C下孵育 15 分鐘。3.13 每孔加入 100 此終止液，并輕輕振蕩混勻。3.14 在 15 分鐘內(nèi)，用酶聯(lián)讀數(shù)儀測定在 450nln 波長下的 0D

5、 值。結(jié)果判定 4.1 豬口蹄疫病毒 vPI 結(jié)構蛋白抗體檢測結(jié)果判定：4.1.1 陰性對照孔平均 0D 值應續(xù) 0.15，每個陽性對照孔 0D 值應妻 0.5 , 且簇2.0。否則，試驗無效。臨界值=0.23x 陽性對照孔平均 0D 值。4.1.2 被檢樣品孔 0D 值臨界值時、判為陰性，即為抗口蹄疫病毒VPI結(jié)構蛋白抗體陰性。4.1.3 被檢樣品孔 0D 值臨界值，判為陽性。4.1.4 對判定結(jié)果為陽性的樣品，應用 2 個孔進行重復檢測。重復檢測后,ujixruj.SSbopcon好好學習天天向上中國3000萬經(jīng)理人首選培訓網(wǎng)站更多免費資料下載請進：http:/好好學習社區(qū)若至少有一個孔為

6、陽性，則判為口蹄疫病毒 VPI 結(jié)構蛋白抗體陽性，若兩孔均 為陰性，則判為口蹄疫病毒 VPI 結(jié)構蛋白抗體陰性。4.1.5 當豬口蹄疫病毒 vPI 結(jié)構蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷試劑盒與豬口蹄疫病毒非結(jié)構蛋白抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷試劑盒聯(lián)合使用時，按下 列標準進行最終判定4.2 牛、羊口蹄疫病毒 VPI 結(jié)構蛋白抗體檢測結(jié)果判定：4.2.1 陰性對照孔平均 0D 值應0.2， 每個陽性對照孔 0D 值應0.5， 且W2.0。否則，試驗無效。臨界值=0.23x 陽性對照孔平均 0D 值。4.2.2 被檢樣品孔 0D 值V臨界值時，判為陰性，即為抗口蹄疫病毒VP1結(jié)構蛋白抗體陰性。4.2.3 被檢樣品孔 0D 值臨界值，判為陽性。4.2.4 對判定結(jié)果為陽性的樣品，應用 2 個孔進行重復檢測。重復檢測后, 若至少有一個孔為陽性，則判為口蹄疫病毒 VPI 結(jié)構蛋白抗體陽性，若兩孔均 為陰性，則判為口蹄疫病毒 V