利巴韋林注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

1、利巴韋林注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查一、 試劑和樣品：鱟試劑（批號：0508031 , 靈敏度：0.25EU/ml 湛江博康海洋生物有限公司生 產(chǎn)）細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品 2005-6 ，100EU/支，中國藥品生物 制品檢定所提供）利巴韋林注射液（規(guī)格：100mg/ml，批 號：050302 生產(chǎn)廠家：廣 東南國藥業(yè)有 限公司）二、 靈敏度復(fù)核：2-1、標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂輪在 瓶頸上部輕輕劃痕，用 75%酒精棉球擦拭后啟開，啟開過程應(yīng)防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。 根據(jù)鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值（0.25EU/ml ），將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品

2、 2005-6 用細(xì) 菌內(nèi)毒素檢查用水 1ml 溶解，在旋渦混合器上混勻 15 分鐘，然后通過稀釋制備成 0.50EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml 和 0.06EU/ml 四 個濃度 的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液， 每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混勻 30 秒鐘1、取 1ml 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解工作標(biāo)準(zhǔn)品，得 100EU/ml ；取規(guī)格為 0.1ml/支的鱟試劑 18 支，放在試管架上，排成 5 列，其中 4 列 4 支， 1 列 2 支。輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，用 75%酒精棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃 屑落入瓶內(nèi)。每支加入 0.1ml檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解。

3、2-4、加樣4 支 4 列每列分別加入 0.1ml 的 0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml 和、 取第步溶液ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水ml，得EU/ml ；、 取第步溶液ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水ml，得EU/ml ；、 取第步溶液ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水ml，得EU/ml :細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 0.5 ml取第步溶液 0.5ml+、，得 0.06EU/ml ；2-2、待復(fù)核鱟試劑的準(zhǔn)備、 取第步溶液0.2ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 1.8 ml，得10、 取第步溶液0.2ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 1.8 ml，得1.0EU、 取第步溶液1.0ml+ 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 1.

4、0 ml，得 0.50EU/ml ；、 取第步溶液1.0ml+ 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 1.0 ml，得 0.25EU/ml ；取第步溶液1.0ml+ 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 1.0 ml，得 0.125EU/ml ；0.06EU/ml 的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，另 2 支加入 0.1ml 的檢查用水作為陰性對照。加樣 結(jié)束后，將鱟試劑用醫(yī)用膠布封口，輕輕振動混勻，連同試管架放入 37C水浴或 適宜恒溫器中，試管架保持水平狀態(tài)，保溫 60 分鐘。2-5、結(jié)果記錄及計(jì)算方法內(nèi)毒素濃度0.50.250.125 0.06NC反應(yīng)終點(diǎn)平 1行 2管 3數(shù) 41 _ -入 c=1g （刀 X/4）1=1g(lg + l

5、g + lg + lg )/4)= EU/ml三、樣品常規(guī)檢查1、 限值L=0.15EU/mg (中國藥典 2005 版)。2、 計(jì)算 MVDMVD=CL/入=100X0.15-0.25=603、 供試品溶液的制備將樣品利巴韋林注射液稀釋到 30 倍和 60 倍備用。1、取原溶液 0.2ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 1.8 ml ，得 10 倍；2、取第步溶液 0.5ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 1.0ml，得 30 倍；3、取第步溶液 1.0ml+細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 1.0ml，得 60 倍；4、鱟試劑的準(zhǔn)備取規(guī)格為 0.1ml/支的鱟試劑 8 支，放在試管架上，排成 4 列，每列 2 支。輕 彈瓶

6、壁使粉末落入瓶底，用 75%酒精棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。 每支加入 0.1ml 檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解。4、 操作加樣4-1、樣品陽性對照：（做 2 管）取利巴韋林注射液的 30 倍稀釋液和濃度為 1.0EU/ml 的內(nèi)毒素稀釋液各 0.3ml 混 合均勻，取該混合液 0.1ml 加入已經(jīng)復(fù)溶好的鱟試劑（入=0.25EU/ml ）中即可。4-2、陽性對照：（做 2 管）取 0.1ml 濃度為 0.5EU/ml 的內(nèi)毒素稀釋液加入已經(jīng)復(fù)溶好的鱟試劑（入=0.25EU/ml）中即可。4-3、樣品檢查：（做 2 管）取利巴韋林注射液的 60 倍稀釋液加入已經(jīng)復(fù)溶好的鱟試劑（入=0.25EU/ml）中即 可