共聚焦課件2010

1、蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心原理簡介原理簡介激光器光電倍增管檢測器顯微鏡步近器計(jì)算機(jī)電子圖像軟件激光器擴(kuò)光器樣品濾光片針孔檢測器入射光發(fā)射光長通濾光片入射光發(fā)射光長通濾光片激光器擴(kuò)光器樣品濾光片針孔檢測器入射光發(fā)射光長通濾光片激光器擴(kuò)光器樣品濾光片針孔檢測器普通光學(xué)顯微鏡與激光共聚焦顯微鏡的區(qū)別普通光學(xué)顯微鏡與激光共聚焦顯微鏡的區(qū)別Z 通過精細(xì)平面光切，形成生物樣品不同平面的通過精細(xì)平面光切，形成生物樣品不同平面的精細(xì)圖象，將一個(gè)連續(xù)的光切圖象精細(xì)圖象，將一個(gè)連續(xù)的光切圖象Z Z軸重疊就可形成軸重疊就可形成一個(gè)完整的三維圖象一個(gè)完整的三維圖象牛肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 ，微管牛肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

2、 ，微管鼠成纖維細(xì)胞單克隆anti-tubulin標(biāo)記 檢測人類癌細(xì)胞表皮生長因子渦蟲綱扁蟲肌動(dòng)蛋白絲鬼筆環(huán)肽培養(yǎng)的293細(xì)胞綠色熒光蛋白培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞啞叮橙染色隨機(jī)圈取細(xì)胞可得到所圈細(xì)胞的相對熒光強(qiáng)度值獲得數(shù)據(jù)的TXT文件將TXT文件導(dǎo)入EXCEL進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析入射光被檢測層面整個(gè)樣品白光（不能透過）發(fā)射光 較厚層面 較薄層面人血管內(nèi)皮細(xì)胞PI標(biāo)記觀測損傷。標(biāo)記細(xì)胞為損傷細(xì)胞。 較厚層面 （平滑肌損傷可見） 較薄層面兔動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞PI標(biāo)記觀測損傷。標(biāo)記細(xì)胞為損傷細(xì)胞。加藥加藥峰值峰值所選細(xì)胞所選細(xì)胞胞漿胞漿胞核胞核胞漿胞核同時(shí)測胞漿胞核同時(shí)測量量綠色：SYBR 14染色，活精子紅色：PI染色，死精子牛精子綠色：MitoTracker Green 紫色：Hoechst 33342 Mouse 3T3 cells 紅色：ethidium homodimer1 ，染核綠色：BODIPY FL phallacidin，染肌絲蛋白牛肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞藍(lán)色：Hoechst 33342 染DNA紅色：PI，染核仁RNA綠色：Alexa Fluor 488染肌絲蛋白藤黃微球菌綠色：活菌紅色：死菌染色：LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit 猴胚腎細(xì)胞