PBS緩沖液配制

1、精選文檔PBS緩沖液配制 0.01M 磷酸鹽緩沖液（PBS）配制方法稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)整溶液的pH值至7.4，最終加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌（至少20分鐘），保存存于室溫或4冰箱中。需要留意的是，通常所說的濃度0.01M 指的是緩沖溶液中全部的磷酸根濃度，而非Na 離子或K 離子的濃度，Na 離子和K 離子只是用來調(diào)整滲透壓的。假如是用于免疫組化的話，則需要在配置的時候分別加入100 u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH、定

2、容、滅菌消毒。 NaCl 8.0g ； KCl 0.2g ； Na2HPO4 1.44g ； KH2PO4 0.24g ；加蒸餾水 至 1000ml，調(diào)整pH 到 7.4（用Na2HPO4或KH2PO4調(diào)整） 。 用于免疫反應(yīng)時可加入 0.1%疊氮鈉（0.1g/100ml PBS）;當(dāng)試劑中含有辣根過氧化物酶時，嚴禁使用疊氮鈉，可改用0.01%柳硫汞。PBS緩沖液配方PH            7.6      7.4

3、0;        7.2        7.0 H2O       1000     1000     1000     1000 NaCl         8.5   

4、;   8.5        8.5         8.5 Na2HPO4 2.2      2.2       2.2         2.2 NaH2PO4 0.1      0.2&

5、#160;      0.3         0.4依據(jù)閱歷來看，新穎配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4之間，可是在溫度的影響下，尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了轉(zhuǎn)變，在經(jīng)過晝夜的時間后，PH值會明顯轉(zhuǎn)變（我親自測過偏酸）。所以做試驗的同學(xué)可要留意了，PH值可能會影響試驗結(jié)果，甚至可能導(dǎo)致陰性。所以務(wù)必記得這個時候和天氣，要加強試驗條件把握問題。每次使用前最好用試紙測一下過夜了的PBS，假如發(fā)生偏酸或偏堿，留意重新?lián)Q新液。 PBS緩沖液 稱取NaCl

6、 8g，KCl 0.2g，Na2HPO412H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4，加水定容至1L，常溫保存?zhèn)溆谩BST緩沖液 取300l Tween-20 加入PBS 100ml中，混勻后即刻使用?，F(xiàn)用現(xiàn)配。 假如是把全部固體加大十倍，配置為濃縮液，工作時候十倍稀釋，那么，在剛配好濃縮液時，PH在6.5左右，明顯偏酸。不能用鹽酸調(diào)。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調(diào)，但是有更便利的方法。 十倍稀釋以后，PH自動上升到所需要的值。不需要其它任何處理。這個可以先取少量試一試，配好之后再測一次  PH8.0的PBS配方具體1. NaCl 1

7、37mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L 2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)整至8.0，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。留意：上述PBS Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。  0.05mol/L PBS(磷酸緩沖液Phosphate Buffer Solution，PBS)的配制：    甲液：0.05mol/L Na2H

8、PO4溶液 ：稱取磷酸氫二鈉9.465g 7.099g,加蒸 餾水至1000ml ;    乙液：0.05mol/L KH2P04溶液: 稱取磷酸二氫鉀, 9.07g 6.803g,加蒸餾水至1000m1。     將甲乙液分裝在棕色瓶內(nèi)，于4冰箱中保存，用時甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見下表: pH    甲液ml   乙液mI 5.29   2.5      97.5 5.59 

9、  5.0      95.0 5.91   10.0     90.0 6.24   20.0     80.0 6.47   30.0     70.0 6.64   40.0     60.0 6.81   50.0     50.0 6.98   60.0     40.0 7.17   70.0     30.0 7.38   80.0   &#