實驗五 SDS-PAGE蛋白質電泳準備實驗

1、實驗五實驗五 SDS-PAGE蛋白質電泳蛋白質電泳準備實驗準備實驗 -溶液的配置溶液的配置實實 驗驗 內(nèi)內(nèi) 容容一、變性蛋白質電泳系列溶液一、變性蛋白質電泳系列溶液1、單體母液、單體母液 （第一小組）（第一小組） 25 ml 丙烯酰胺丙烯酰胺 7.50 g 甲叉雙丙烯酰胺甲叉雙丙烯酰胺 0.20 g 去離子水定容至去離子水定容至25 ml ,定性中速濾紙過定性中速濾紙過濾，濾，棕色試劑棕色試劑 瓶瓶4存放。存放。2、 10 (w/v) SDS （第一小組）（第一小組） 10ml SDS 1.0 g 去離子水去離子水 10 ml 3、分離膠緩沖液（、分離膠緩沖液（4，pH=8.80，25 ml）

2、（第二小組）（第二小組） Tris-Base(1.5 mol/L) 4.54 g 10(w/v)SDS 1 ml 用用20ml去離子水溶解，再用濃去離子水溶解，再用濃HCl調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH到到8.8，過，過濾，定容到濾，定容到25ml,4存放。存放。4、濃縮膠緩沖液（、濃縮膠緩沖液（4 ，pH=6.80，50 ml ）（）（第二小組）第二小組） Tris-Base(0.50 mol/L) 3.03 g 10(w/v)SDS 2ml 加去離子水加去離子水40 ml溶解，用濃溶解，用濃HCl調(diào)調(diào)pH到到6.80，定，定容到容到50ml，4存放。存放。5、10的過硫酸銨（的過硫酸銨（1ml） （現(xiàn)配現(xiàn)用

3、）（現(xiàn)配現(xiàn)用） （第三小組）（第三小組） 過硫酸銨過硫酸銨 0.10 g 去離子水去離子水1.00 ml,4密閉存放。密閉存放。6、電極緩沖液、電極緩沖液(pH=8.30) 500 ml(1) ）（第三小組）（第三小組） Tris-Base 1.5g 甘氨酸甘氨酸 6.25 g SDS (10%) 2.5ml 去離子水溶解。去離子水溶解。7、樣品緩沖液儲液（、樣品緩沖液儲液（2 ）（第四小組）（第四小組） 2.5 ml 濃縮膠緩沖液（濃縮膠緩沖液（4） 1.25 ml SDS（固體干粉）（固體干粉） 0.1 g 甘油甘油 0. 5 ml 溴酚蘭溴酚蘭 1 mg 加去離子水加去離子水0.75ml

4、 溶解，加溶解，加50ul巰基乙醇巰基乙醇，室溫保存。，室溫保存。8、染色液、染色液 400ml 考馬斯亮蘭考馬斯亮蘭R250 1.0 g 甲醇甲醇 182ml 冰醋酸冰醋酸 36.8 ml 水水 182 ml9、脫色液（第四組）、脫色液（第四組） 500 ml 甲醇甲醇 228.00 ml 冰醋酸冰醋酸 36.00 ml 水水 236.00 ml表表3 分離膠的配制分離膠的配制Table 3 The confect of separating gel膠濃度膠濃度12單體母液（單體母液（ml）9.60去離子水（去離子水（ml）8.40分離膠緩沖液（分離膠緩沖液（ml）6.0010APS（l）100TEMED(l)36表表4 濃縮膠的配制備濃縮膠的配制備Table 4 The confect of concentrating gel膠濃度膠濃度5單體母液（單體母