第4章23 免疫檢測與防治

1、免疫學(xué)檢測技術(shù)免疫學(xué)檢測技術(shù) 的基本原理的基本原理免疫學(xué)檢測方法：免疫學(xué)檢測方法： 依據(jù)依據(jù)免疫學(xué)理論免疫學(xué)理論設(shè)計的設(shè)計的測定測定抗原、抗體、免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子抗原、抗體、免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子的的實驗方法實驗方法。一、基本原理一、基本原理 抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，并呈現(xiàn)抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，并呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象，如凝集或沉淀，以此檢測某種反應(yīng)現(xiàn)象，如凝集或沉淀，以此檢測抗原或抗體?？乖蚩贵w。第一節(jié)第一節(jié) 體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng)體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 的特點及其影響因素的特點及其影響因素抗原抗體反應(yīng)的特點抗原抗體反應(yīng)的特點1.抗原抗體結(jié)合的特異性 抗原抗體結(jié)合除抗原抗體結(jié)合除空間構(gòu)型空間構(gòu)型互

2、補(bǔ)外，還以互補(bǔ)外，還以氫鍵氫鍵、靜電引力靜電引力、范、范德華力德華力和和疏水鍵疏水鍵等非共價方式等非共價方式結(jié)合，結(jié)合，一定條件下一定條件下復(fù)合物可復(fù)合物可解離解離成游離狀態(tài)，成游離狀態(tài)，且仍且仍保持原有性質(zhì)保持原有性質(zhì)。2.抗原抗體結(jié)合的可逆性 復(fù)合物復(fù)合物解離度解離度主要取決于特異性抗體主要取決于特異性抗體超變區(qū)超變區(qū)與相應(yīng)與相應(yīng)抗原表位抗原表位三維空間構(gòu)型的三維空間構(gòu)型的互補(bǔ)程度互補(bǔ)程度，互補(bǔ)程度越高，分子間距越小，作用力越大，互補(bǔ)程度越高，分子間距越小，作用力越大，兩者結(jié)合越牢固，不易解離；反之，則容易兩者結(jié)合越牢固，不易解離；反之，則容易發(fā)生解離。發(fā)生解離。3.抗原抗體結(jié)合的比例與濃

3、度 抗原與抗體結(jié)合抗原與抗體結(jié)合比例合適比例合適，則可形成，則可形成肉眼可見的肉眼可見的大結(jié)合物大結(jié)合物；反之形成肉眼；反之形成肉眼不可見不可見的的小結(jié)合物。小結(jié)合物。4.抗原抗體反應(yīng)的階段性 第二階段：第二階段：可見反應(yīng)階段?？梢姺磻?yīng)階段。數(shù)分鐘、數(shù)小時至數(shù)日，因素影響多。數(shù)分鐘、數(shù)小時至數(shù)日，因素影響多。第一階段：第一階段：特異結(jié)合階段。特異結(jié)合階段。僅幾秒到幾分鐘、尚無可見反應(yīng)；僅幾秒到幾分鐘、尚無可見反應(yīng)；細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)的抗體，或表面包被抗原的顆粒狀物質(zhì)與相應(yīng)的抗體在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團(tuán)現(xiàn)象。毒素、組織浸液以及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)

4、后，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物。顯色顯色 第二節(jié)第二節(jié) 免疫細(xì)胞的測定免疫細(xì)胞的測定 淋巴細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)主要的免疫細(xì)胞，檢測其數(shù)量和淋巴細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)主要的免疫細(xì)胞，檢測其數(shù)量和功能是了解機(jī)體免疫狀態(tài)的重要手段。功能是了解機(jī)體免疫狀態(tài)的重要手段。 一一 、淋巴細(xì)胞的分離、淋巴細(xì)胞的分離 常用常用ficoll（淋巴細(xì)胞分離液）密度梯度離心除去紅淋巴細(xì)胞分離液）密度梯度離心除去紅細(xì)胞、粒細(xì)胞而獲得外周血單個核細(xì)胞（細(xì)胞、粒細(xì)胞而獲得外周血單個核細(xì)胞（PBMC），），再再經(jīng)吸附除去單核細(xì)胞而得到淋巴細(xì)胞。若要分離經(jīng)吸附除去單核細(xì)胞而得到淋巴細(xì)胞。若要分離T細(xì)胞細(xì)胞，可用尼龍毛柱、抗，可用尼龍毛柱、抗CD3單抗

5、、單抗、E花結(jié)試驗等分離?；ńY(jié)試驗等分離。二、免疫細(xì)胞細(xì)胞的鑒定二、免疫細(xì)胞細(xì)胞的鑒定 根據(jù)細(xì)胞的某些標(biāo)志，采用免疫熒光法、磁珠分離根據(jù)細(xì)胞的某些標(biāo)志，采用免疫熒光法、磁珠分離法、流式細(xì)胞術(shù)等方法可確定細(xì)胞不同類型和比例。法、流式細(xì)胞術(shù)等方法可確定細(xì)胞不同類型和比例。（一）（一）T細(xì)胞功能測定細(xì)胞功能測定 1. T細(xì)胞增殖試驗細(xì)胞增殖試驗 植物血凝素（植物血凝素（PHA）、）、刀豆蛋白刀豆蛋白A（ConA）等絲裂等絲裂原及抗原及抗CD3單抗等能非特異性激活培養(yǎng)的單抗等能非特異性激活培養(yǎng)的T細(xì)胞，使細(xì)胞，使其轉(zhuǎn)化成淋巴母細(xì)胞的試驗。其轉(zhuǎn)化成淋巴母細(xì)胞的試驗。 淋巴細(xì)胞功能測定淋巴細(xì)胞功能測定u在

6、該增殖過程中，細(xì)胞在該增殖過程中，細(xì)胞DNADNA、RNARNA、蛋白質(zhì)的合成增加，蛋白質(zhì)的合成增加，細(xì)胞形態(tài)改變。也可檢測特異性抗原致敏的細(xì)胞形態(tài)改變。也可檢測特異性抗原致敏的T T細(xì)胞。細(xì)胞。 （1 1）氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷摻入法：該法靈敏、可靠）氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷摻入法：該法靈敏、可靠，應(yīng)用廣泛，但需特殊儀器（液體閃爍儀），易有放射，應(yīng)用廣泛，但需特殊儀器（液體閃爍儀），易有放射性污染。性污染。 （2 2）MTTMTT法：該法操作簡單，無放射性污染，但敏感法：該法操作簡單，無放射性污染，但敏感性相對較差。性相對較差。 淋巴細(xì)胞功能測定淋巴細(xì)胞功能測定2. 細(xì)胞毒試驗：細(xì)胞毒試驗： Tc

7、、NK細(xì)胞對靶細(xì)胞有直接殺傷作用，可根據(jù)待細(xì)胞對靶細(xì)胞有直接殺傷作用，可根據(jù)待檢效應(yīng)細(xì)胞的性質(zhì)，選用相應(yīng)的靶細(xì)胞。檢效應(yīng)細(xì)胞的性質(zhì)，選用相應(yīng)的靶細(xì)胞。 （1）51Cr釋放法：用釋放法：用51Cr標(biāo)記靶細(xì)胞，標(biāo)記靶細(xì)胞，記數(shù)儀測定記數(shù)儀測定釋放的釋放的51C活性。活性。 （2）MTT法：其原理與增殖試驗相同，但甲法：其原理與增殖試驗相同，但甲 生成量生成量與靶細(xì)胞溶解破壞水平呈負(fù)相關(guān)。與靶細(xì)胞溶解破壞水平呈負(fù)相關(guān)。 （3）乳酸脫氫酶釋放法：細(xì)胞受損致膜通透性改變，）乳酸脫氫酶釋放法：細(xì)胞受損致膜通透性改變，乳酸脫氫酶釋放到培養(yǎng)液中。乳酸脫氫酶釋放到培養(yǎng)液中。 3.細(xì)胞因子檢測：細(xì)胞因子檢測：u

8、CK的檢測有助于了解其在免疫調(diào)節(jié)中的作用，的檢測有助于了解其在免疫調(diào)節(jié)中的作用，鑒定分離的淋巴細(xì)胞，監(jiān)測某些疾病狀態(tài)的細(xì)胞鑒定分離的淋巴細(xì)胞，監(jiān)測某些疾病狀態(tài)的細(xì)胞免疫功能。常用的檢測方法有以下三種：免疫功能。常用的檢測方法有以下三種：（1）ELISA法：法：（2）生物活性測定法：生物活性測定法：（3）聚合酶鏈反應(yīng)（）聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）：）： 淋巴細(xì)胞功能測定淋巴細(xì)胞功能測定 4.皮膚實驗皮膚實驗 正常機(jī)體對某種抗原產(chǎn)生細(xì)胞免疫后，用相同抗原正常機(jī)體對某種抗原產(chǎn)生細(xì)胞免疫后，用相同抗原做皮膚試驗時出現(xiàn)以局部紅腫為特征的做皮膚試驗時出現(xiàn)以局部紅腫為特征的DTH。細(xì)胞免細(xì)胞免疫正常時出現(xiàn)陽性反

9、應(yīng)，細(xì)胞免疫低下則呈陰性反應(yīng)疫正常時出現(xiàn)陽性反應(yīng)，細(xì)胞免疫低下則呈陰性反應(yīng)。 該方法簡便，可幫助診斷某些病原微生物感染（如該方法簡便，可幫助診斷某些病原微生物感染（如結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌等）及免疫缺陷病等。結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌等）及免疫缺陷病等。 淋巴細(xì)胞功能測定淋巴細(xì)胞功能測定（二）（二）B細(xì)胞功能測定細(xì)胞功能測定u B細(xì)胞介導(dǎo)體液免疫，檢查細(xì)胞介導(dǎo)體液免疫，檢查B細(xì)胞的數(shù)量與功能細(xì)胞的數(shù)量與功能是確定體液免疫是否正常的重要手段。是確定體液免疫是否正常的重要手段。1.B細(xì)胞增殖試驗細(xì)胞增殖試驗2.抗體形成細(xì)胞的測定：吸附有特異性抗原的抗體形成細(xì)胞的測定：吸附有特異性抗原的SRBC與抗體形成細(xì)胞分

10、泌的與抗體形成細(xì)胞分泌的Ig特異性結(jié)合后活特異性結(jié)合后活化補(bǔ)體，溶解化補(bǔ)體，溶解SRBC。又稱溶血空斑試驗。又稱溶血空斑試驗。免疫學(xué)防治免疫學(xué)防治 “國防建設(shè)國防建設(shè)”學(xué)習(xí)要求：學(xué)習(xí)要求：1.掌握人工主動免疫與人工被動免疫的概念；掌握死疫苗和活疫苗概念以及特性；2.熟悉疫苗的基本要求。1.1.定義：定義：為為預(yù)防、控制預(yù)防、控制傳染病的發(fā)生和流行，用傳染病的發(fā)生和流行，用于于人體預(yù)防接種人體預(yù)防接種的的生物制品生物制品。包括疫苗、菌苗和類毒素。包括疫苗、菌苗和類毒素。2.2.基本要求基本要求：安全安全實用實用有效有效對絕大多數(shù)人群有保護(hù)性作用，對絕大多數(shù)人群有保護(hù)性作用，使用后群體抗感染能力強(qiáng)

11、，使用后群體抗感染能力強(qiáng)，理想的疫苗：同時誘導(dǎo)細(xì)胞和體理想的疫苗：同時誘導(dǎo)細(xì)胞和體液免疫，維持時間長。液免疫，維持時間長。接種程序簡單，無嚴(yán)重不良反應(yīng)，接種程序簡單，無嚴(yán)重不良反應(yīng)，便于運(yùn)輸和儲存，價格低。便于運(yùn)輸和儲存，價格低。活疫苗要求遺傳性狀穩(wěn)定，活疫苗要求遺傳性狀穩(wěn)定，無返祖、致癌和致畸作用，無返祖、致癌和致畸作用，無熱原性和過敏原。無熱原性和過敏原。抗感染抗感染抗腫瘤抗腫瘤計劃生育計劃生育防止免疫病理損傷防止免疫病理損傷3.3.疫苗應(yīng)用疫苗應(yīng)用疫苗疫苗死疫苗）與減毒活疫苗死疫苗）與減毒活疫苗活疫苗活疫苗：人工的方法使病原體減毒減毒或從自然界篩選病原體無毒株無毒株或微毒株微毒株所制成的活的活的微生物制劑。也稱減毒活疫苗，卡介苗，甲肝疫苗。死疫苗死疫苗：選用免疫原性強(qiáng)免疫原性強(qiáng)的病原微生物，經(jīng)人工大量培養(yǎng)，經(jīng)理化方法將其殺死殺死后制成的疫苗。無毒力無毒力，但仍保持其免疫原性免疫原性。傷寒、百日咳、鉤端螺旋體、斑疹傷寒、乙型腦炎等疫苗死疫苗與活疫苗特點的比較含義：含義：細(xì)菌外毒素經(jīng)0.30.4%甲醛處理。特點：特點：失去毒性而仍保留其免疫原性。亞單位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗。食用轉(zhuǎn)基因植物以預(yù)防接種已初步成功。含義：含義：細(xì)菌外毒素經(jīng)0.30.4%甲醛處理。特點：特點：失去毒性而仍保留其免疫原性。主動免疫治療主動免疫治療被動免疫治療被動免疫治療刺激或增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)，使