溶血對生化檢驗結(jié)果的影響

1、溶血對生化檢驗結(jié)果的影響溶血對生化檢驗結(jié)果的影響溶血的定義溶血的定義溶血對生化檢驗結(jié)果的影響溶血對生化檢驗結(jié)果的影響溶血標(biāo)本的處理溶血標(biāo)本的處理標(biāo)本溶血的原因標(biāo)本溶血的原因如何避免溶血如何避免溶血一、溶血的定義一、溶血的定義溶血是紅細(xì)胞破壞溶血是紅細(xì)胞破壞, ,紅細(xì)胞的一些組分釋紅細(xì)胞的一些組分釋放進入血清或血漿，導(dǎo)致實驗樣品出現(xiàn)特有的放進入血清或血漿，導(dǎo)致實驗樣品出現(xiàn)特有的紅色增加。很多因素都可以使紅細(xì)胞破壞，發(fā)紅色增加。很多因素都可以使紅細(xì)胞破壞，發(fā)生溶血，從而干擾監(jiān)測，使檢驗結(jié)果失去真實生溶血，從而干擾監(jiān)測，使檢驗結(jié)果失去真實性和準(zhǔn)確性，影響疾病的診斷和治療。性和準(zhǔn)確性，影響疾病的診斷和

2、治療。溶血是臨床生化檢驗中最常見的一種干擾溶血是臨床生化檢驗中最常見的一種干擾和影響因素。和影響因素。溶血后溶血后顯著增高顯著增高的有的有ASTAST、ALTALT、LDHLDH、K+K+、TBILTBIL、TPTP、ALBALB等；等；溶血后溶血后顯著降低顯著降低的項目有的項目有GLUGLU、CRCR等。等。（一）溶血對肝功能測定的影響（一）溶血對肝功能測定的影響1.1.天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ASTAST） 溶血造成溶血造成ASTAST升高可能是由以下兩個方面升高可能是由以下兩個方面的原因引起的原因引起(1)(1)人類紅細(xì)胞中人類紅細(xì)胞中ASTAST活性約為血清中的活性約

3、為血清中的4040倍，當(dāng)標(biāo)本溶血時紅細(xì)胞破裂后釋放倍，當(dāng)標(biāo)本溶血時紅細(xì)胞破裂后釋放ASTAST，勢，勢必引起血清必引起血清ASTAST活性的升高從而使溶血標(biāo)本的活性的升高從而使溶血標(biāo)本的結(jié)果明顯高于未溶血標(biāo)本。結(jié)果明顯高于未溶血標(biāo)本。(2)(2)溶血后血清顏色加深，致使測得的吸溶血后血清顏色加深，致使測得的吸光度值增高。光度值增高。2 2、谷氨酸、谷氨酸- -丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶（ALTALT） 紅細(xì)胞中紅細(xì)胞中ALTALT活性約是血清中活性約是血清中7 71515倍。嚴(yán)重溶血（倍。嚴(yán)重溶血（HbHb約約6.5g/L6.5g/L）時，可使）時，可使血清血清ALTALT由由20U/L20U

4、/L增高到增高到26.5U/L26.5U/L（增加約（增加約27%27%）。因此溶血后）。因此溶血后ALTALT含量測定的增高含量測定的增高主要來源于細(xì)胞內(nèi)主要來源于細(xì)胞內(nèi)ALTALT的大量釋放。的大量釋放。 可見與可見與ASTAST相比，相比，ALTALT受溶血影響輕受溶血影響輕些。些。3 3、乳酸脫氫酶（、乳酸脫氫酶（LDHLDH） 紅細(xì)胞和血小板中含有豐富的紅細(xì)胞和血小板中含有豐富的LDHLDH，紅細(xì)胞中，紅細(xì)胞中LDHLDH的含量是血清的的含量是血清的160160200200倍，故受溶血影響最大。在倍，故受溶血影響最大。在測定環(huán)節(jié)上都有可能發(fā)生不同程度的測定環(huán)節(jié)上都有可能發(fā)生不同程度的

5、血小板破壞，而影響血小板破壞，而影響LDHLDH測定，使其測定，使其測定結(jié)果偏高。測定結(jié)果偏高。4 4、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGTGGT） 由于紅細(xì)胞內(nèi)由于紅細(xì)胞內(nèi)GGTGGT含量很低，輕含量很低，輕微溶血對其測定結(jié)果影響不大，但重微溶血對其測定結(jié)果影響不大，但重度溶血則有影響度溶血則有影響5 5、總蛋白（總蛋白（TPTP） 總蛋白的測定通常選用雙縮脲法，總蛋白的測定通常選用雙縮脲法，主波長主波長540nm,540nm,而血紅蛋白在而血紅蛋白在555nm555nm有吸收有吸收峰，試驗表明如果溶血標(biāo)本中峰，試驗表明如果溶血標(biāo)本中HbHb 0.5g0.5gL L時無干擾；而高時無干擾；而高

6、HbHb，會使結(jié)，會使結(jié)果偏高，可以做樣品空白來消除影響。果偏高，可以做樣品空白來消除影響。6 6、總膽紅素（、總膽紅素（TBILTBIL） 重氮法測定重氮法測定TBILTBIL，最后生成紅紫色，最后生成紅紫色的偶氮膽紅素，主要在波長為的偶氮膽紅素，主要在波長為540nm540nm560nm560nm處有光吸收。而處有光吸收。而HbHb在波長在波長540nm540nm550nm550nm處有光吸收，恰與偶氮膽紅素的比處有光吸收，恰與偶氮膽紅素的比色波長相近。因此溶血后細(xì)胞破裂時大色波長相近。因此溶血后細(xì)胞破裂時大量量HbHb進入血清進入血清, ,勢必造成勢必造成TBILTBIL測定值的升測定值

7、的升高高, ,是是TBILTBIL測定的正向干擾因素。測定的正向干擾因素。 此外，由于此外，由于HbHb重氮試劑反應(yīng)形成的重氮試劑反應(yīng)形成的產(chǎn)物可破壞偶氮膽紅素，溶血對重氮法產(chǎn)物可破壞偶氮膽紅素，溶血對重氮法測定膽紅素同時存在負(fù)向干擾，使測定測定膽紅素同時存在負(fù)向干擾，使測定結(jié)果偏低，但該作用較輕微，因此溶血結(jié)果偏低，但該作用較輕微，因此溶血后由于后由于HbHb對測定結(jié)果的干擾，對測定結(jié)果的干擾，TBILTBIL的測的測定結(jié)果往往偏高。定結(jié)果往往偏高。（二）溶血對血脂測定的影響（二）溶血對血脂測定的影響1 1、總膽固醇（、總膽固醇（TCTC） 試驗表明如果溶血標(biāo)本中試驗表明如果溶血標(biāo)本中HbH

8、b1.5g1.5gL L無干擾；而高濃度時因無干擾；而高濃度時因HbHb的固有顏色的固有顏色干擾，會使結(jié)果偏高。干擾，會使結(jié)果偏高。2 2、甘油三酯（甘油三酯（TGTG） 除去上述如總膽固醇影響因素外，除去上述如總膽固醇影響因素外，目前所用甘油磷酸氧化酶目前所用甘油磷酸氧化酶過氧化物過氧化物酶法和乙酰丙醇顯色法都以測量甘油酶法和乙酰丙醇顯色法都以測量甘油為基礎(chǔ)，而紅細(xì)胞膜磷脂可被磷脂酶為基礎(chǔ)，而紅細(xì)胞膜磷脂可被磷脂酶作用，產(chǎn)生游離甘油，所以溶血后測作用，產(chǎn)生游離甘油，所以溶血后測定結(jié)果偏高。定結(jié)果偏高。3 3、載脂蛋白載脂蛋白A(APOA)A(APOA)及載脂蛋及載脂蛋(APOB)(APOB)

9、 免疫透射比濁法使用最廣泛，以免疫透射比濁法使用最廣泛，以抗原抗體為基礎(chǔ)，血紅蛋白可使測定抗原抗體為基礎(chǔ)，血紅蛋白可使測定結(jié)果升高，故標(biāo)本溶血后測定結(jié)果偏結(jié)果升高，故標(biāo)本溶血后測定結(jié)果偏高。高。（三）溶血對腎功能測定的影響（三）溶血對腎功能測定的影響1 1、尿素（尿素（UREA)UREA) 無論是二乙酰無論是二乙酰肟法還是脲酶肟法還是脲酶法，溶血均可導(dǎo)致光譜藍(lán)色部分吸法，溶血均可導(dǎo)致光譜藍(lán)色部分吸光度值升高對結(jié)果都有干擾，導(dǎo)致光度值升高對結(jié)果都有干擾，導(dǎo)致結(jié)果偏高。結(jié)果偏高。2 2、尿酸、尿酸(UA) (UA) 試驗表明如果溶血標(biāo)本中試驗表明如果溶血標(biāo)本中HbHb1g1gL L會干擾；是因為測

10、定波長會干擾；是因為測定波長546mm546mm時因時因HbHb固有顏色固有顏色潛在影響使測定結(jié)果潛在影響使測定結(jié)果偏高偏高( (比色法比色法) ) 。 3 3、肌酐（、肌酐（CreCre） 苦味酸法測定苦味酸法測定CreCre的特異性較差，的特異性較差，易受其它還原性物質(zhì)影響，主要是維易受其它還原性物質(zhì)影響，主要是維生素生素C C、酮體、丙酮酸等假肌酐干擾。、酮體、丙酮酸等假肌酐干擾。假肌酐物質(zhì)亦可與苦味酸形成顏色反假肌酐物質(zhì)亦可與苦味酸形成顏色反應(yīng)，導(dǎo)致測定值發(fā)生偏差。這種假肌應(yīng)，導(dǎo)致測定值發(fā)生偏差。這種假肌酐物質(zhì)紅細(xì)胞中最多，血清中較少，酐物質(zhì)紅細(xì)胞中最多，血清中較少，故溶血后紅細(xì)胞中假

11、肌酐物質(zhì)的釋放故溶血后紅細(xì)胞中假肌酐物質(zhì)的釋放是造成測定值發(fā)生偏差的主要原因。是造成測定值發(fā)生偏差的主要原因。 溶血釋放出的物質(zhì)導(dǎo)致溶血釋放出的物質(zhì)導(dǎo)致JaffeJaffe反應(yīng)反應(yīng) 而致測定結(jié)果的升高。而致測定結(jié)果的升高。JaffeJaffe反應(yīng)指血反應(yīng)指血漿中的肌酐與堿性苦味酸鹽反應(yīng)，生漿中的肌酐與堿性苦味酸鹽反應(yīng)，生成黃紅色的苦味酸肌酐復(fù)合物的反應(yīng)。成黃紅色的苦味酸肌酐復(fù)合物的反應(yīng)。（四）溶血對電解質(zhì)測定的影響（四）溶血對電解質(zhì)測定的影響1 1、鉀（、鉀（K K+ +） 細(xì)胞內(nèi)液的主要陽離子，約細(xì)胞內(nèi)液的主要陽離子，約9898的鉀存于細(xì)胞內(nèi)，紅細(xì)胞內(nèi)鉀濃的鉀存于細(xì)胞內(nèi)，紅細(xì)胞內(nèi)鉀濃度約為度

12、約為105mmol/L105mmol/L，而血清中僅有，而血清中僅有3.5 mmol/L3.5 mmol/L5.4 mmol/L5.4 mmol/L，紅細(xì)胞，紅細(xì)胞中鉀的含量比血清中高中鉀的含量比血清中高2323倍。因此倍。因此溶血造成血清鉀明顯升高，增高主溶血造成血清鉀明顯升高，增高主要來源于紅細(xì)胞內(nèi)鉀的大量釋放。要來源于紅細(xì)胞內(nèi)鉀的大量釋放。 有報道表明血清游離血紅蛋白有報道表明血清游離血紅蛋白在在2.52.52.8g/L2.8g/L時血清鉀增高時血清鉀增高14%14%16%16%，血清游離血紅蛋白達(dá)，血清游離血紅蛋白達(dá)6.6g/L6.6g/L時血清鉀增高可達(dá)時血清鉀增高可達(dá)41%41%，

13、所以應(yīng)在，所以應(yīng)在樣品采集后樣品采集后1h1h內(nèi)應(yīng)將紅細(xì)胞與血清內(nèi)應(yīng)將紅細(xì)胞與血清分離。并且在分析血清鉀的結(jié)果時分離。并且在分析血清鉀的結(jié)果時應(yīng)引起高度注意。應(yīng)引起高度注意。2 2、氯（、氯（CLCL- -） 血漿中氯約為血漿中氯約為103mmol/L103mmol/L，紅，紅細(xì)胞中氯約為細(xì)胞中氯約為4954mmol/L4954mmol/L。溶血。溶血會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的氯離子轉(zhuǎn)移到血清會導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的氯離子轉(zhuǎn)移到血清中，從而引起了血清氯離子測定值中，從而引起了血清氯離子測定值的升高的升高3 3、磷（、磷（P P） 實驗表明如果溶血標(biāo)本中實驗表明如果溶血標(biāo)本中HbHb1g/L1g/L影響很小，而在影響

14、很小，而在HbHb等于等于2.8g2.8gL L時影響較大，所以應(yīng)在采血時影響較大，所以應(yīng)在采血后后30min30min內(nèi)分離血細(xì)胞，否則會因磷內(nèi)分離血細(xì)胞，否則會因磷酸酯從酸酯從RBCRBC中釋放而會使結(jié)果偏高。中釋放而會使結(jié)果偏高。 （五）溶血對葡萄糖測定的影響（五）溶血對葡萄糖測定的影響葡萄糖葡萄糖(GLU)(GLU) 葡萄糖氧化酶法測定葡萄糖氧化酶法測定GLUGLU的特異的特異性較強，干擾物較少，但過氧化氫酶性較強，干擾物較少，但過氧化氫酶易受到其它物質(zhì)的影響，如維生素易受到其它物質(zhì)的影響，如維生素C C、谷胱苷肽均因能競爭谷胱苷肽均因能競爭H H2 2O O2 2而導(dǎo)致負(fù)偏而導(dǎo)致負(fù)偏

15、差，樣品中某些強的酶會促使差，樣品中某些強的酶會促使GLUGLU降降解而導(dǎo)致測定值明顯下降的。如果在解而導(dǎo)致測定值明顯下降的。如果在血清或血漿加入血清或血漿加入NaFNaF、KFKF作為酵解抑作為酵解抑制劑樣品收集后立即去蛋白時，溶血制劑樣品收集后立即去蛋白時，溶血樣品也可以用。樣品也可以用。（六）溶血對心肌酶譜測定的影響（六）溶血對心肌酶譜測定的影響 由于由于LDH LDH 、HBDHHBDH在紅細(xì)胞內(nèi)的含在紅細(xì)胞內(nèi)的含量皆明顯高于胞外，故溶血后結(jié)果都量皆明顯高于胞外，故溶血后結(jié)果都升高，雖然紅細(xì)胞中不含升高，雖然紅細(xì)胞中不含CK CK ，但含，但含有大量的腺苷酸激酶有大量的腺苷酸激酶(AK

16、)(AK)，可干擾測，可干擾測定定CK CK 的偶聯(lián)法的反應(yīng)體系，人為地的偶聯(lián)法的反應(yīng)體系，人為地引起引起CKCK結(jié)果的升高。結(jié)果的升高。三、標(biāo)本溶血的原因三、標(biāo)本溶血的原因1 1、環(huán)境溫度變化，氣溫較低時血清、環(huán)境溫度變化，氣溫較低時血清不易分離，標(biāo)本需經(jīng)多次離心，離心不易分離，標(biāo)本需經(jīng)多次離心，離心后容易出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。后容易出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。2 2、標(biāo)本運送過程中導(dǎo)致碰撞，從而、標(biāo)本運送過程中導(dǎo)致碰撞，從而使離心后也會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。使離心后也會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。3 3、采血量不足，相對低滲抗凝導(dǎo)致、采血量不足，相對低滲抗凝導(dǎo)致溶血。溶血。4 4、特殊人群如肥胖者、小孩等血管、特殊人群如肥胖者、小孩

17、等血管不易找到或太細(xì)導(dǎo)致抽血時多次操不易找到或太細(xì)導(dǎo)致抽血時多次操作或壓迫時間過長也會引起溶血現(xiàn)作或壓迫時間過長也會引起溶血現(xiàn)象。象。5 5、針頭過細(xì)或抽血速度過快，負(fù)壓、針頭過細(xì)或抽血速度過快，負(fù)壓太大，紅細(xì)胞通過針尖時破壞而溶太大，紅細(xì)胞通過針尖時破壞而溶血。血。四、溶血標(biāo)本的處理四、溶血標(biāo)本的處理1 1、主動與臨床聯(lián)系，結(jié)合臨床首先、主動與臨床聯(lián)系，結(jié)合臨床首先排除體內(nèi)溶血的可能，若不是體內(nèi)溶排除體內(nèi)溶血的可能，若不是體內(nèi)溶血，建議重新采取標(biāo)本，否則應(yīng)在檢血，建議重新采取標(biāo)本，否則應(yīng)在檢驗報告單上注明驗報告單上注明“標(biāo)本溶血標(biāo)本溶血”，以提，以提醒臨床醫(yī)生注意醒臨床醫(yī)生注意. .2 2、利用溶血指數(shù)變化值，根據(jù)各項、利用溶血指數(shù)變化值，根據(jù)各項目的回歸方程，對易受溶血影響的目的回歸方程，對易受溶血影響的ASTAST、CKCK、CK-MBCK-MB、LDH,LDH, K K+ + 的測定結(jié)的測定結(jié)果進行部分糾正，尤其對輕中度溶血果進行部分糾正，尤其對輕中度溶血效果較好，但對重度溶血標(biāo)本則應(yīng)重效果較好，但對重度溶血標(biāo)本則應(yīng)重新復(fù)查。新復(fù)查。3 3、從方法學(xué)上克服或減少溶血的干、從方法學(xué)上克服或減少溶血的干擾，如通過設(shè)置樣品空白或改用雙擾，如通過設(shè)置樣品空白或改用雙波長比色、導(dǎo)數(shù)分光光度法和動力波長比色、導(dǎo)數(shù)分光光度法和動力學(xué)方法，對參與