專題2課題1微生物的實驗室培養(yǎng)

1、課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)一、基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識（一）培養(yǎng)基（一）培養(yǎng)基1 1、概念、概念人們按照人們按照微生物對微生物對營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求的不同需求，配制出供其生長，配制出供其生長繁殖的繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)營養(yǎng)基質(zhì)。2 2、培養(yǎng)基的類型和用途、培養(yǎng)基的類型和用途（1 1）按物理性質(zhì)劃分：）按物理性質(zhì)劃分：液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基注：（固體、半固體培養(yǎng)基需注：（固體、半固體培養(yǎng)基需添加凝固劑添加凝固劑，如瓊脂如瓊脂；兩者；兩者的差別是添加量的的差別是添加量的多、少多、少；液體培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)基不加凝固劑不加凝固劑。）。）（工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)）（微生物保

2、存、微生物保存、分離、鑒定分離、鑒定、活菌計數(shù)、活菌計數(shù)）（觀察微生物的運動、分類觀察微生物的運動、分類、鑒定、鑒定）液體培養(yǎng)基與固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基與固體培養(yǎng)基（2 2）按化學(xué)成分劃分：）按化學(xué)成分劃分：合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確（用化學(xué)成分已知的化合物配制）培養(yǎng)基成分明確（用化學(xué)成分已知的化合物配制）（微生物的分類、鑒定微生物的分類、鑒定）天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基含化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)含化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)（工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)）（3 3）按用途劃分：）按用途劃分：選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基加入加入某種化學(xué)物質(zhì)某種化學(xué)物質(zhì)，以，以抑制抑制不需要的微生物的生長，不需要的微生物的生長，促進促進所

3、需要微生物的生長。所需要微生物的生長。（分離微生物、進行選擇培養(yǎng)。分離微生物、進行選擇培養(yǎng)。）鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化指示劑或化學(xué)藥品學(xué)藥品配制而成的，用以配制而成的，用以鑒別鑒別不同種類的微生物。不同種類的微生物。（微生物的鑒定微生物的鑒定）青霉素青霉素抗青霉素基因抗青霉素基因基因工程，對導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌的篩選基因工程，對導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌的篩選選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基: :分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:分離酵

4、母菌、霉菌等分離酵母菌、霉菌等真菌真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: :分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌伊紅美藍伊紅美藍大腸桿菌大腸桿菌在伊紅美藍培養(yǎng)基上在伊紅美藍培養(yǎng)基上菌落呈現(xiàn)黑色菌落呈現(xiàn)黑色 注：注：病毒專性活細胞寄生病毒專性活細胞寄生，目前不能利用人工培養(yǎng)基來培，目前不能利用人工培養(yǎng)基來培養(yǎng)，需接種在動植物組織中才能增值。養(yǎng)，需接種在動植物組織中才能增值。常用于培養(yǎng)動物病常用于培養(yǎng)動物病毒的是活雞胚毒的是活雞胚。鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基3 3、培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基的成分不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有不管哪種培

5、養(yǎng)基，一般都含有水水、碳源碳源、氮源氮源和和無機鹽無機鹽。（1 1）碳源）碳源為微生物提供所需為微生物提供所需碳元素碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)，的營養(yǎng)物質(zhì)，需要量最大需要量最大。概念：概念：來源來源： 無機碳源：無機碳源：COCO2 2、NaHCONaHCO3 3等（等（自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物）有機碳源：有機碳源：糖類糖類（異養(yǎng)型微生物異養(yǎng)型微生物） 、脂肪酸、花、脂肪酸、花生粉餅、石油等生粉餅、石油等作用作用：構(gòu)成微生物的細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物構(gòu)成微生物的細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；思考：大腸桿菌，硝化細菌，藍藻，乳酸菌分別選用哪種思考：大腸桿菌，硝化細菌，藍藻，乳酸菌分別選用哪種碳源？碳源？糖類，二氧

6、化碳，二氧化碳，糖類糖類，二氧化碳，二氧化碳，糖類（2 2）氮源）氮源概念：概念：為微生物提供所需為微生物提供所需氮元素氮元素的營養(yǎng)物質(zhì)。的營養(yǎng)物質(zhì)。來源來源：無機氮源：無機氮源：N N2 2、NHNH3 3 、 NHNH4+4+、NONO3-3-等。等。（固氮微生物，硝化細菌固氮微生物，硝化細菌）有機氮源：有機氮源：尿素、尿素、牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等、氨基酸等（異養(yǎng)型微生物異養(yǎng)型微生物）作用作用：主要用于主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物。注：注：“含含C C、N”N”的有機物常是異養(yǎng)微生物的氮源的有機物常是異養(yǎng)微生物的氮源，也是碳也

7、是碳源源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是單一方面的，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是單一方面的作用。作用。思考：培養(yǎng)根瘤菌、大腸桿菌、硝化細菌時分別需要哪一思考：培養(yǎng)根瘤菌、大腸桿菌、硝化細菌時分別需要哪一類氮源？類氮源？N N2 2，銨鹽或硝酸鹽，銨鹽或硝酸鹽，NHNH3 3（3 3）水）水（4 4）無機鹽）無機鹽（5 5）培養(yǎng)基內(nèi)所需的其他條件培養(yǎng)基內(nèi)所需的其他條件概念：概念：微生物生長不可缺少的微生物生長不可缺少的微量有機物微量有機物。注：并不是所有微生物都需要添加特殊營養(yǎng)物質(zhì)，有些需注：并不是所有微生物都需要添加特殊營養(yǎng)物質(zhì)，有些需要添加，原因是它們自身要添加，原因是它們自身

8、缺乏合成這些物質(zhì)的酶缺乏合成這些物質(zhì)的酶或或合成能合成能力有限力有限。如：如：培養(yǎng)乳酸桿菌需要在培養(yǎng)基中添加培養(yǎng)乳酸桿菌需要在培養(yǎng)基中添加維生素。維生素。來源：來源：維生素維生素、氨基酸氨基酸、堿基堿基等。等。作用：作用：酶酶、核酸核酸的組成成分。的組成成分。、特殊營養(yǎng)物質(zhì)特殊營養(yǎng)物質(zhì)（生長因子生長因子）、pHpH值值如如: :培養(yǎng)培養(yǎng)霉菌需酸性霉菌需酸性、培養(yǎng)、培養(yǎng)細菌需中性或微堿性細菌需中性或微堿性。、氧氣的含量氧氣的含量如如: :培養(yǎng)培養(yǎng)厭氧微生物厭氧微生物時需要提供時需要提供無氧無氧的條件。的條件。4 4、培養(yǎng)基的配制原則、培養(yǎng)基的配制原則（1 1）目的要明確（）目的要明確（根據(jù)微生物

9、的種類、培養(yǎng)目的根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的）（2 2）營養(yǎng)協(xié)調(diào)）營養(yǎng)協(xié)調(diào) （注意營養(yǎng)物質(zhì)的（注意營養(yǎng)物質(zhì)的濃度濃度和和比例比例）（3 3）pHpH適宜適宜（4 4）溫度適宜）溫度適宜例例1：為了檢測飲用水中是否含有某種細菌，配制的培養(yǎng)：為了檢測飲用水中是否含有某種細菌，配制的培養(yǎng)基的配方如下表：基的配方如下表： (1)該培養(yǎng)基所含的碳源有該培養(yǎng)基所含的碳源有_ _，其功，其功能是能是_。(2)該培養(yǎng)基所含的氮源是該培養(yǎng)基所含的氮源是_，其功能是，其功能是_。(3)該培養(yǎng)基除含碳源、氮源外，還有微生物需要的營養(yǎng)該培養(yǎng)基除含碳源、氮源外，還有微生物需要的營養(yǎng)物質(zhì)是物質(zhì)是_。(4)該細菌在同化作用上

10、的代謝類型是該細菌在同化作用上的代謝類型是_。(5)該培養(yǎng)基可用來鑒別哪種細菌該培養(yǎng)基可用來鑒別哪種細菌( ) A霉菌霉菌B大腸桿菌大腸桿菌 C酵母菌酵母菌 D乳酸菌乳酸菌乳糖、蔗糖、蛋白胨乳糖、蔗糖、蛋白胨構(gòu)成微生物的細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物構(gòu)成微生物的細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物蛋白胨蛋白胨合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物水、無機鹽水、無機鹽異養(yǎng)型異養(yǎng)型B B（二）無菌技術(shù)（二）無菌技術(shù)1 1、概念、概念泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染防止雜菌污染的方法。的方法。獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵（目的）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵（目的）:

11、:防止外來雜菌的入侵防止外來雜菌的入侵。2 2、無菌技術(shù)包括的四個方面（、無菌技術(shù)包括的四個方面（措施措施）（1 1）對實驗操作的）對實驗操作的空間、操作者的衣著和手空間、操作者的衣著和手進行進行清潔和清潔和消毒消毒；（2 2）將）將培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行等器具進行滅菌滅菌；（3 3）為避免周圍微生物污染，）為避免周圍微生物污染，實驗操作實驗操作應(yīng)在應(yīng)在酒精燈火焰酒精燈火焰附近附近進行；進行；（4 4）避免避免已滅菌處理的材料用具已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸與周圍物品相接觸。3 3、消毒與滅菌、消毒與滅菌（1 1）消毒）消毒概念：概念：使用使

12、用較為溫和較為溫和的物理或化學(xué)方法的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面僅殺死物體表面或或內(nèi)部一內(nèi)部一部分部分對人體有害的微生物（對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子）。）。有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休休眠體眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。在生物體的一定部位產(chǎn)生一種在生物體的一定部位產(chǎn)生一種特殊的生殖細胞特殊的生殖細胞叫孢子。孢叫孢子。孢子的特點是能直接長成新個體。子的特點是能直接長成新個體。常用常用方法

13、方法: :a a、煮沸消毒法、煮沸消毒法100100煮沸煮沸5-6min5-6min，用于，用于一般物品一般物品的消毒。的消毒。b b、巴氏消毒法、巴氏消毒法70-7570-75下煮下煮30min30min或或 8080下煮下煮15min15min，對一些，對一些不耐高溫的不耐高溫的液體液體，如，如牛奶的消毒牛奶的消毒。c c、化學(xué)藥劑消毒、化學(xué)藥劑消毒酒精、氯氣、石炭酸、煤酚皂溶液等，如酒精、氯氣、石炭酸、煤酚皂溶液等，如酒精擦拭雙手酒精擦拭雙手、氯氣消毒水源氯氣消毒水源等。等。d d、紫外線消毒、紫外線消毒對對接種室、接種箱或超凈工作接種室、接種箱或超凈工作臺臺首先噴灑石炭酸或煤酚皂等首先

14、噴灑石炭酸或煤酚皂等溶液以增強消毒效果，然后使溶液以增強消毒效果，然后使用紫外線進行物理消毒。只適用紫外線進行物理消毒。只適用于物體用于物體表面滅菌和空氣滅菌表面滅菌和空氣滅菌。（2 2）滅菌）滅菌使用使用強烈強烈的理化因素的理化因素殺死物體內(nèi)外所有殺死物體內(nèi)外所有的的微生物，微生物，包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子。常用常用方法方法: :a a、灼燒滅菌、灼燒滅菌用于用于金屬用具金屬用具（接種環(huán)、接種針接種環(huán)、接種針）、）、或接種過程中或接種過程中試管口和瓶口試管口和瓶口的滅菌；的滅菌；b b、干熱滅菌、干熱滅菌160160170 170 ，1 12h2h。能耐高溫的需能耐高溫的需要保持干燥的物

15、品要保持干燥的物品，用于，用于玻璃器皿、玻璃器皿、金屬用具金屬用具的滅菌的滅菌 ，所用設(shè)備是，所用設(shè)備是干熱干熱滅菌箱滅菌箱 ；c c、高壓蒸汽滅菌、高壓蒸汽滅菌121121，100kPa100kPa，15-3015-30分鐘。用于分鐘。用于培養(yǎng)基、無菌水培養(yǎng)基、無菌水等的滅菌等的滅菌 ，所用設(shè)，所用設(shè)備是備是高壓蒸汽滅菌鍋高壓蒸汽滅菌鍋。二、實驗操作二、實驗操作( (以培養(yǎng)大腸桿菌為例以培養(yǎng)大腸桿菌為例) )（一）制備（一）制備牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基1 1、計算、計算2 2、稱量、稱量注意：牛肉膏比較注意：牛肉膏比較黏稠黏稠，天平稱量時，放等大的，天平稱量時，放等大的稱

16、量紙稱量紙，防止牛肉膏防止牛肉膏粘在托盤上粘在托盤上；牛肉膏和蛋白胨都；牛肉膏和蛋白胨都易吸潮易吸潮，稱，稱取時取時動作迅速動作迅速，稱后要，稱后要及時蓋上瓶蓋及時蓋上瓶蓋。（通用培養(yǎng)基通用培養(yǎng)基）3 3、溶化、溶化牛肉膏和稱量紙牛肉膏和稱量紙+ +水水取出稱量紙取出稱量紙加熱加熱加蛋白胨和氯化鈉加蛋白胨和氯化鈉攪拌攪拌加瓊脂加瓊脂（不斷攪拌，防止糊不斷攪拌，防止糊底而導(dǎo)致燒杯破裂底而導(dǎo)致燒杯破裂）補加蒸餾水至補加蒸餾水至100ml100ml思考思考1.1.溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱? ?可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中可保證粘附在

17、稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中, ,減少誤差。減少誤差。2.2.加瓊脂的目的是什么加瓊脂的目的是什么? ?作為凝固劑作為凝固劑4 4、滅菌、滅菌培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)皿：培養(yǎng)皿：干熱滅菌干熱滅菌思考思考1.1.在滅菌前在滅菌前, , 用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？的目的是什么？滅菌時能避免水蒸汽凝結(jié)時浸濕棉塞；滅菌時能避免水蒸汽凝結(jié)時浸濕棉塞；取出培養(yǎng)基錐形瓶時也能起到隔絕空氣中雜菌污染的作用。取出培養(yǎng)基錐形瓶時也能起到隔絕空氣中雜菌污染的作用。2.培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？不能不能, ,

18、因為培養(yǎng)皿要保持干燥因為培養(yǎng)皿要保持干燥, ,應(yīng)該用干熱滅菌。應(yīng)該用干熱滅菌。3.3.在培養(yǎng)微生物時，由于不同微生物適應(yīng)的在培養(yǎng)微生物時，由于不同微生物適應(yīng)的PHPH不同，因此不同，因此在熔化后必須調(diào)節(jié)在熔化后必須調(diào)節(jié)PHPH，那么是先調(diào)，那么是先調(diào)PHPH還是先滅菌還是先滅菌? ?先調(diào)先調(diào)PHPH，后滅菌。，后滅菌。5 5、倒平板、倒平板用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手時即可開始倒平用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手時即可開始倒平板。板。灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。思考思考1.1.培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到5050時倒平板。

19、用什么辦法來估時倒平板。用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？計培養(yǎng)基的溫度？2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，將平板倒置，平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染, ,又可以避免培養(yǎng)又可以避免培養(yǎng)基中的水分過快地揮發(fā)?；械乃诌^快地揮發(fā)。空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝

20、后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？（二）純化大腸桿菌（二）純化大腸桿菌1 1、純化培養(yǎng)技術(shù)：純化培養(yǎng)技術(shù)：自然環(huán)境中，微生物混在一起生長，要想純培養(yǎng)，首先要自然環(huán)境中，微生物混在一起生長，要想純培養(yǎng)，首先要將單個細胞與其他細胞分離開，進而培養(yǎng)成可見的群體將單個細胞與其他細胞分離開，進而培養(yǎng)成可見的群體（即菌落）。（即菌落）。2 2、細菌的菌落、細菌的菌落定義定義：單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，

21、會形成一個單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，會形成一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體。肉眼可見的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體。特征：特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。等。功能功能：菌種鑒定的重要依據(jù)菌種鑒定的重要依據(jù)。形態(tài)各異的菌落形態(tài)各異的菌落3、常用接種方法、常用接種方法平板劃線法平板劃線法稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法（主要用于純化培養(yǎng)主要用于純化培養(yǎng)）（主要用于分離菌種并計數(shù)主要用于分離菌種并計數(shù)）(1)(1)平板劃線法：平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基表面表面連連續(xù)劃線的續(xù)劃線的操作，

22、將操作，將聚集的菌種逐步稀聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的釋分散到培養(yǎng)基的表面。在表面。在數(shù)次劃線數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離后培養(yǎng)，可以分離到由到由一個細胞一個細胞繁殖繁殖而來的而來的菌落菌落。接種環(huán)接種環(huán)平板劃線法獲取的微生物經(jīng)恒溫培養(yǎng)后的生長情況平板劃線法獲取的微生物經(jīng)恒溫培養(yǎng)后的生長情況1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作結(jié)束后灼燒：操作結(jié)束后灼燒：殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污

23、染環(huán)境及感染操作者。染環(huán)境及感染操作者。思考思考第一步灼燒：第一步灼燒：消滅接種環(huán)上的微生物避免污染培養(yǎng)物；消滅接種環(huán)上的微生物避免污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒：每次劃線前灼燒：為了殺死上一次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘為了殺死上一次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到由單個細菌繁殖的菌落時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到由單個細菌繁殖的菌落。2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線

24、？在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。(2)(2)稀釋涂布平板法：稀釋涂布平

25、板法：將將菌液菌液進行進行一系列的一系列的梯度稀釋梯度稀釋后，分別涂后，分別涂布到布到固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基表面。表面。稀釋度足夠高時，能稀釋度足夠高時，能培養(yǎng)出培養(yǎng)出單個菌落單個菌落。稀稀釋涂布平板法操作過釋涂布平板法操作過程程分兩個步驟分兩個步驟，即，即系系列稀釋操作列稀釋操作和和涂布平涂布平板操作板操作。涂布器涂布器系列稀釋操作系列稀釋操作101102103104105106注意：注意：1.移液管需要經(jīng)過滅菌移液管需要經(jīng)過滅菌2.操作時，試管口和移液管應(yīng)在離火焰操作時，試管口和移液管應(yīng)在離火焰12CM處處涂布平板操作涂布平板操作思考思考 將將接種后接種后和和未接種未接種（作為對照組作為對照

26、組）的培養(yǎng)基均）的培養(yǎng)基均放到放到37370 0C C的恒溫箱中，的恒溫箱中，培養(yǎng)培養(yǎng)121224h24h后后進行觀察并進行觀察并記錄結(jié)果。記錄結(jié)果。涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。結(jié)合平板涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2 2步應(yīng)步應(yīng)如何進行無菌操作？如何進行無菌操作？答：答：應(yīng)從操作的各個環(huán)節(jié)保證應(yīng)從操作的各個環(huán)節(jié)保證“無菌無菌”。1.1.酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適；酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適；2.2.吸管頭不要接觸任何其他物體；吸管頭不要接觸任何其他物體；3.3.要要在火焰周圍迅速操作。在

27、火焰周圍迅速操作。未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無菌落生長，說后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。如果接種成功的話，在培養(yǎng)基的表面可觀察到大小、形狀、如果接種成功的話，在培養(yǎng)基的表面可觀察到大小、形狀、顏色相似的菌落。顏色相似的菌落。三、結(jié)果分析與評價三、結(jié)果分析與評價1 1、未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有菌落生、未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有菌落生長，說明了什么？長，說明了什么？2 2、在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能否觀察到獨立的菌落？、在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能

28、否觀察到獨立的菌落？它們的大小、形狀、顏色相似嗎？它們的大小、形狀、顏色相似嗎？培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同。明顯不同。隨著時間的延長、菌落的不斷生長，使菌落不斷增大。隨著時間的延長、菌落的不斷生長，使菌落不斷增大。無菌操作未達到要求：無菌操作未達到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接種時發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過程中受到了污染。接種時發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過程中受到了污染。3 3、培養(yǎng)、培養(yǎng)12h12h和和24h24h后，觀察到的實驗結(jié)果相同嗎？如果不后，觀察到的實驗結(jié)果相同

29、嗎？如果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因？同，請分析產(chǎn)生差異的原因？4 4、如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請分析其可、如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請分析其可能的原因。能的原因。將菌種接種到將菌種接種到試管的固試管的固體斜面培養(yǎng)基體斜面培養(yǎng)基，放入，放入44冰箱冰箱中保存。以后每中保存。以后每3636個月，要將菌種轉(zhuǎn)移到個月，要將菌種轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基。新的培養(yǎng)基。四、課題延伸四、課題延伸3ml3ml甘油瓶中裝入甘油瓶中裝入1ml1ml甘油甘油后滅菌，再加入后滅菌，再加入1ml1ml菌液菌液，混勻，混勻后放入后放入-20-20冷凍箱保存。冷凍箱保存。1.對于對于頻繁使用頻繁使用的菌種的菌種

30、2.對于對于需要長期保存需要長期保存的菌種的菌種臨時保藏：臨時保藏：甘油管藏：甘油管藏：例例2 2：下列有關(guān)細菌培養(yǎng)的敘述，正確的是：下列有關(guān)細菌培養(yǎng)的敘述，正確的是（ ）A A在瓊脂固體培養(yǎng)基上長出的單個菌落含有多種在瓊脂固體培養(yǎng)基上長出的單個菌落含有多種細菌細菌B B在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進細菌在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進細菌生長生長C C向液體培養(yǎng)基中通人氧氣能促進破傷風(fēng)桿菌的向液體培養(yǎng)基中通人氧氣能促進破傷風(fēng)桿菌的生長生長D D在半固體培養(yǎng)基中接種細菌培養(yǎng)后可以觀察其在半固體培養(yǎng)基中接種細菌培養(yǎng)后可以觀察其運動運動D D例例3 3：某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細菌的污染

31、情況而進行：某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細菌的污染情況而進行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數(shù)。請回答與此實驗相關(guān)的問題。觀察計數(shù)。請回答與此實驗相關(guān)的問題。(1)(1)培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細菌培養(yǎng)提供了培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細菌培養(yǎng)提供了_和和_。除此之外，培養(yǎng)基還必須含。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是有的基本成分是_和和_。(2)(2)對培養(yǎng)基進行滅菌，應(yīng)該采用的方法是對培養(yǎng)基進行滅菌，應(yīng)該采用的方法是_。(3)(3)為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)的實驗結(jié)果，應(yīng)將接種了湖為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)的實驗結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于水樣品的平板置于_中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定