快速檢測講義(杜)

1、蔬菜、水果中農(nóng)藥、重金屬和蔬菜、水果中農(nóng)藥、重金屬和硝酸鹽的快速檢測技術(shù)硝酸鹽的快速檢測技術(shù) 第一章第一章 農(nóng)藥（酶抑抑制法）農(nóng)藥（酶抑抑制法）1、農(nóng)藥檢測的重要性、農(nóng)藥檢測的重要性2、農(nóng)藥快速檢測發(fā)展歷史、農(nóng)藥快速檢測發(fā)展歷史一、概述一、概述 有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，使昆蟲中毒致死，根據(jù)這一昆蟲毒理學(xué)原理，影響正常傳導(dǎo)，使昆蟲中毒致死，根據(jù)這一昆蟲毒理學(xué)原理，用在對農(nóng)藥殘留的檢測中。加入反應(yīng)試劑后

2、，用分光光度計(jì)測用在對農(nóng)藥殘留的檢測中。加入反應(yīng)試劑后，用分光光度計(jì)測定吸光值隨時間的變化值，計(jì)算出抑制率，判斷蔬菜中含有機(jī)定吸光值隨時間的變化值，計(jì)算出抑制率，判斷蔬菜中含有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘毒情況。磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘毒情況。 二、檢測原理二、檢測原理二、檢測原理二、檢測原理乙酰膽堿酯酶乙酰膽堿酯酶+有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥酶活性被抑制酶活性被抑制活性被抑制活性被抑制樣本中含有樣本中含有有機(jī)磷或有機(jī)磷或 氨基甲酸酯類農(nóng)藥氨基甲酸酯類農(nóng)藥乙酰膽堿酯酶乙酰膽堿酯酶 + 樣本提取液樣本提取液活性正?；钚哉?樣本中不含有樣本中不含有有機(jī)磷或有機(jī)磷或 氨基甲酸酯

3、類農(nóng)藥氨基甲酸酯類農(nóng)藥 如以乙酰硫代膽堿（如以乙酰硫代膽堿（AsCh）為底物，在乙酰膽堿酯酶）為底物，在乙酰膽堿酯酶（AchE）的作用下乙酰硫代膽堿（）的作用下乙酰硫代膽堿（AsCh）水解成硫代膽堿和）水解成硫代膽堿和乙酸，硫代膽堿和二硫雙對硝基本甲酸（乙酸，硫代膽堿和二硫雙對硝基本甲酸（DTNB）產(chǎn)生顯色反應(yīng)，）產(chǎn)生顯色反應(yīng)，使反應(yīng)液呈黃色，在分光光度計(jì)使反應(yīng)液呈黃色，在分光光度計(jì)410nm處有最大吸收峰，用分處有最大吸收峰，用分光光度計(jì)可測得酶活性被抑制程度（用抑制率表示）。光光度計(jì)可測得酶活性被抑制程度（用抑制率表示）。 二、檢測原理二、檢測原理3、檢測結(jié)果計(jì)算、檢測結(jié)果計(jì)算n式中：式中

4、：Ac-對照組對照組3min前和前和3min后與前吸光值之差；后與前吸光值之差； As-樣本樣本3min前與前與3min后吸光值之差。后吸光值之差。 抑制率抑制率70時，蔬菜中含有種有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)時，蔬菜中含有種有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒。此時樣本要有藥殘毒。此時樣本要有2次以上重復(fù)檢測，幾次重復(fù)檢測的重現(xiàn)次以上重復(fù)檢測，幾次重復(fù)檢測的重現(xiàn)性性80以上。以上。三、檢測方法三、檢測方法100AcAs-Ac(%)抑制率 測定蔬菜種類：葉菜類（除韭菜）、果菜類、豆菜類、根測定蔬菜種類：葉菜類（除韭菜）、果菜類、豆菜類、根菜類（除胡蘿卜、茭白等）。菜類（除胡蘿卜、茭白等）。 農(nóng)藥種類：甲胺磷

5、、氧化樂果、對硫磷、甲拌磷、久效磷、農(nóng)藥種類：甲胺磷、氧化樂果、對硫磷、甲拌磷、久效磷、倍硫磷、殺撲磷、敵敵畏、克百威、涕滅威、滅多威、抗蚜威、倍硫磷、殺撲磷、敵敵畏、克百威、涕滅威、滅多威、抗蚜威、丁硫克百威、甲萘威、丙硫克百威、速滅威、殘殺威、異丙威丁硫克百威、甲萘威、丙硫克百威、速滅威、殘殺威、異丙威等。等。 三、檢測方法三、檢測方法1、取樣、取樣 用不銹鋼管取樣器取來自不同植株葉片（至少用不銹鋼管取樣器取來自不同植株葉片（至少810片葉子）片葉子）的樣本：果菜從表皮至果肉的樣本：果菜從表皮至果肉11.5cm處取樣。處取樣。2、檢測過程、檢測過程 取取2g切碎的樣本（非韭菜類取切碎的樣本

6、（非韭菜類取4g克），放入提取品瓶內(nèi)，克），放入提取品瓶內(nèi)，加入加入20ml緩沖液，振蕩緩沖液，振蕩12min，倒出提取液，靜止，倒出提取液，靜止35min：于小試管內(nèi)分別加入于小試管內(nèi)分別加入50uL酶，酶，3mL樣本提取液，樣本提取液，50uL顯色劑，顯色劑，于于3738下放置下放置30min后再分別加入后再分別加入50uL底物，倒入比色底物，倒入比色杯中，用儀器進(jìn)行測定。杯中，用儀器進(jìn)行測定。三、檢測方法三、檢測方法各種農(nóng)藥最低檢出濃度各種農(nóng)藥最低檢出濃度丁酰膽堿酯酶對甲基對硫磷、樂果、毒死蜱、二嗪磷等農(nóng)藥不太靈敏，檢出濃度均在丁酰膽堿酯酶對甲基對硫磷、樂果、毒死蜱、二嗪磷等農(nóng)藥不太靈敏

7、，檢出濃度均在10mg/kg以上。以上。 主要影響因素為酶、顯色反應(yīng)以及反應(yīng)時間、溫度等密切主要影響因素為酶、顯色反應(yīng)以及反應(yīng)時間、溫度等密切關(guān)系。關(guān)系。 1. 酶。無論采用何種具體檢測方法，酶是其中決定檢測方酶。無論采用何種具體檢測方法，酶是其中決定檢測方法靈敏度和可靠性的最關(guān)鍵因子。酶對常用有機(jī)磷和氨基甲酸法靈敏度和可靠性的最關(guān)鍵因子。酶對常用有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的敏感度決定了方法的靈敏度，酶的種類決定了方法酯類農(nóng)藥的敏感度決定了方法的靈敏度，酶的種類決定了方法的可靠性。（酶的活性不高，酶失活等）?？捎糜跉埩魴z測的的可靠性。（酶的活性不高，酶失活等）?？捎糜跉埩魴z測的酶有羧酸酯酶（主要

8、來源于動物肝臟、植物等）、丁酰膽堿酯酶有羧酸酯酶（主要來源于動物肝臟、植物等）、丁酰膽堿酯酶（動物血清等）及乙酰膽堿酯酶（昆蟲頭部、動物紅細(xì)胞酶（動物血清等）及乙酰膽堿酯酶（昆蟲頭部、動物紅細(xì)胞等）。前兩種酶受干擾因素多，假陽性率高，專一性低。乙酰等）。前兩種酶受干擾因素多，假陽性率高，專一性低。乙酰膽堿酯酶是有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的最適反應(yīng)底物，其活膽堿酯酶是有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的最適反應(yīng)底物，其活性能夠?qū)Ｒ恍缘乇挥袡C(jī)磷和氨基甲酸酯類所抑制，用其檢測這性能夠?qū)Ｒ恍缘乇挥袡C(jī)磷和氨基甲酸酯類所抑制，用其檢測這兩類農(nóng)藥比用丁酰酯酶和羧酸酯酶具有明顯的專一性和可靠性，兩類農(nóng)藥比用丁酰酯酶和羧酸

9、酯酶具有明顯的專一性和可靠性，檢測結(jié)果的假陽性率也明顯降低。檢測結(jié)果的假陽性率也明顯降低。 四、影響檢測結(jié)果的因素四、影響檢測結(jié)果的因素 不同底物及底物不同加入時間對抑制率不同底物及底物不同加入時間對抑制率(%)的影響的影響不同底物及底物不同加入時間對不同底物及底物不同加入時間對A的影響的影響 1 酶粉穩(wěn)定性較好，在常溫下可運(yùn)輸，短期內(nèi)不會失去活酶粉穩(wěn)定性較好，在常溫下可運(yùn)輸，短期內(nèi)不會失去活性，但要長期保存必須將其置于性，但要長期保存必須將其置于-20環(huán)境下；環(huán)境下； 2 只有在酶、底物和顯色劑等試劑以及反應(yīng)時間、過程統(tǒng)只有在酶、底物和顯色劑等試劑以及反應(yīng)時間、過程統(tǒng)一的情況下，快速檢測的結(jié)

10、果才有可比性。一的情況下，快速檢測的結(jié)果才有可比性。 3 此方法可用于含較高農(nóng)藥殘留的蔬菜等上市，但只能檢此方法可用于含較高農(nóng)藥殘留的蔬菜等上市，但只能檢測有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，不適用于其它農(nóng)藥殘留的檢測，測有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，不適用于其它農(nóng)藥殘留的檢測，且不能定性和定量。所以，當(dāng)用此方法檢測出有問題的蔬菜時，且不能定性和定量。所以，當(dāng)用此方法檢測出有問題的蔬菜時，還應(yīng)送有關(guān)部門進(jìn)一步用氣相色譜或液相、氣質(zhì)等進(jìn)行定性定還應(yīng)送有關(guān)部門進(jìn)一步用氣相色譜或液相、氣質(zhì)等進(jìn)行定性定量分析，方可用為最終結(jié)論性數(shù)據(jù)。量分析，方可用為最終結(jié)論性數(shù)據(jù)。 4 此方法對含農(nóng)藥量愈高的蔬菜，其測定的誤差愈小

11、。但此方法對含農(nóng)藥量愈高的蔬菜，其測定的誤差愈小。但即使是有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥中，仍有部分農(nóng)藥品種對此即使是有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥中，仍有部分農(nóng)藥品種對此方法不靈敏。方法不靈敏。五、注意事項(xiàng)五、注意事項(xiàng) 第二章第二章 重金屬重金屬1、重金屬檢測的重要性、重金屬檢測的重要性2、重、重金金屬屬快速檢測發(fā)展歷史快速檢測發(fā)展歷史一、概述一、概述 重金屬被提取后，與二硫腙生成紅色絡(luò)合物，其顏色深淺重金屬被提取后，與二硫腙生成紅色絡(luò)合物，其顏色深淺與重金屬含量成正比。與重金屬含量成正比。二、檢測原理二、檢測原理 取樣：取蔬菜樣勻漿取樣：取蔬菜樣勻漿5g，加入，加入25mL提取劑，振蕩，過濾。提取劑，

12、振蕩，過濾。濾液為樣品提取液。濾液為樣品提取液。 檢測：檢測：儀器設(shè)定：設(shè)定安全標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)值為儀器設(shè)定：設(shè)定安全標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)值為2mg/kg，將儀器，將儀器的標(biāo)準(zhǔn)調(diào)值設(shè)為的標(biāo)準(zhǔn)調(diào)值設(shè)為4 mg/kg，同時用做空白。，同時用做空白。取取40mg/kg重金重金屬儲備液屬儲備液0.5mL加蒸餾水至加蒸餾水至5mL，該溶液濃度為標(biāo)準(zhǔn)調(diào)值濃度。，該溶液濃度為標(biāo)準(zhǔn)調(diào)值濃度。同時吸取樣品提取液同時吸取樣品提取液5mL比色管中。分別在標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品提取比色管中。分別在標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品提取液中加入顯色劑，搖勻，倒入液中加入顯色劑，搖勻，倒入0.1mL比色杯中，用儀器進(jìn)行測定。比色杯中，用儀器進(jìn)行測定。 結(jié)果分析：儀器自動顯

13、示蔬菜合格與否。結(jié)果分析：儀器自動顯示蔬菜合格與否。三、檢測方法三、檢測方法四、影響檢測結(jié)果的因素四、影響檢測結(jié)果的因素 顯色劑放置時間顯色劑放置時間 0(天，溶液天，溶液) 0(天，溶液天，溶液) 7(天，溶液天，溶液) 30(天，溶液天，溶液) 顯色劑編號顯色劑編號0.5ug/ mL 0.2ug/ mL 0.5ug/ mL 0.5ug/ mL 4 5 顯色劑放置時間對測定效果的影響顯色劑放置時間對測定效果的影響 由表可見，當(dāng)溶液中復(fù)合重金屬濃度為由表可見，當(dāng)溶液中復(fù)合重金屬濃度為0.5ug/ mL時，用時，用4和和5號顯色劑以溶液號顯色劑以溶液的形式存放的形式存放07天（天（04）測定與對

14、照有極明顯差異，以粉劑形式存放）測定與對照有極明顯差異，以粉劑形式存放30天（天（0-4 ）與對照有極明顯差異?？梢姳驹囼?yàn)配制的重金屬顯色劑具有較好的穩(wěn)定性，可滿足）與對照有極明顯差異?？梢姳驹囼?yàn)配制的重金屬顯色劑具有較好的穩(wěn)定性，可滿足快速檢測的需求。因此選用快速檢測的需求。因此選用5號顯色劑作為本試驗(yàn)重金屬的顯色劑號顯色劑作為本試驗(yàn)重金屬的顯色劑. 混配顯色劑檢測鉻、鎘、鉛、汞和砷等混配顯色劑檢測鉻、鎘、鉛、汞和砷等5種重金屬的檢測效果：所用顯色劑為種重金屬的檢測效果：所用顯色劑為5號號四、影響檢測結(jié)果的因素四、影響檢測結(jié)果的因素重金屬種類重金屬種類0.5ug/ mL 0.2ug/ mL

15、顏色顏色 鉻鉻 偏紅偏紅鎘鎘 偏偏紅紅鉛鉛 偏暗偏暗汞汞褐紫褐紫砷砷鮮亮鮮亮不同重金屬測定效果不同重金屬測定效果 從表從表可見，當(dāng)各重金屬的濃度低至可見，當(dāng)各重金屬的濃度低至0.5ug/ mL和和0.2ug/ mL時，用本試驗(yàn)試制時，用本試驗(yàn)試制的顯色劑仍能較好進(jìn)行檢測。但各重金屬元素的表現(xiàn)略有差異，汞和鉻效果略差。將各的顯色劑仍能較好進(jìn)行檢測。但各重金屬元素的表現(xiàn)略有差異，汞和鉻效果略差。將各重金屬的顯色溶液用紫外分光光度計(jì)在重金屬的顯色溶液用紫外分光光度計(jì)在200nm800nm范圍掃描（范圍掃描（CK為基線），最為基線），最大吸收峰在大吸收峰在530nm570nm之間。從圖可看出，鉻、鎘、

16、鉛、砷等之間。從圖可看出，鉻、鎘、鉛、砷等4種重金屬及復(fù)合種重金屬及復(fù)合重金屬的最大吸收峰明顯高于汞的，驗(yàn)證了目重金屬的最大吸收峰明顯高于汞的，驗(yàn)證了目五、注意事項(xiàng)五、注意事項(xiàng) 第三章第三章 硝酸鹽硝酸鹽1、硝酸鹽檢測的重要性、硝酸鹽檢測的重要性2、硝、硝酸酸鹽鹽快速檢測發(fā)展歷史快速檢測發(fā)展歷史一、概述一、概述 酸性條件下，利用硝酸試粉中的鋅產(chǎn)生氫，將測試液中的酸性條件下，利用硝酸試粉中的鋅產(chǎn)生氫，將測試液中的硝酸根還原成亞硝酸根，然后亞硝酸根與氨基苯磺酸和硝酸根還原成亞硝酸根，然后亞硝酸根與氨基苯磺酸和萘胺萘胺作用，形成玫瑰紅顏色的偶氮染料，在一定范圍內(nèi)顏色的吸光作用，形成玫瑰紅顏色的偶氮染

17、料，在一定范圍內(nèi)顏色的吸光度與硝酸根濃度成線性關(guān)系，可用比色測定硝酸鹽的含量。度與硝酸根濃度成線性關(guān)系，可用比色測定硝酸鹽的含量。 二、檢測原理二、檢測原理 根據(jù)上實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定本改進(jìn)測定方法為：稱取根據(jù)上實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定本改進(jìn)測定方法為：稱取510g蔬菜勻漿蔬菜勻漿液（一般葉菜類液（一般葉菜類5g，瓜果類，瓜果類10g）于）于100mL燒杯中，加燒杯中，加50mL蒸蒸餾水，充分?jǐn)噭雍筮^濾。用水將濾液稀釋至硝酸鹽含量（以餾水，充分?jǐn)噭雍筮^濾。用水將濾液稀釋至硝酸鹽含量（以NaNO3計(jì)）在計(jì)）在0.5 20mg/L（一般葉菜類再稀釋（一般葉菜類再稀釋5倍，瓜果類倍，瓜果類稀釋稀釋50倍），在含上稀釋夜

18、倍），在含上稀釋夜25mL的比色管中加入的比色管中加入0.1g混合試粉，混合試粉，待充分反應(yīng)后過濾，濾液與標(biāo)準(zhǔn)曲線（待充分反應(yīng)后過濾，濾液與標(biāo)準(zhǔn)曲線（1.3.4）一同上機(jī)在）一同上機(jī)在538nm處測其吸光值，計(jì)算蔬菜中硝酸鹽含量（以處測其吸光值，計(jì)算蔬菜中硝酸鹽含量（以NaNO3計(jì)）。計(jì)）。三、檢測方法三、檢測方法四、影響檢測結(jié)果的因素四、影響檢測結(jié)果的因素五、注意事項(xiàng)五、注意事項(xiàng) 蔬菜硝酸鹽殘留儀器檢測使用說明蔬菜硝酸鹽殘留儀器檢測使用說明 1、試劑及配置方法、試劑及配置方法提取劑：提取劑：每包用1000mL蒸餾水溶解2、保存方法：、保存方法：檢測劑：檢測劑：應(yīng)避光、低溫保存在冰箱的冷藏室（0-5）。提取試劑：提取試劑：固體及溶解