第2章細胞生物學(xué)研究方法學(xué)習(xí)教案

1、會計學(xué)1第第2章細胞生物學(xué)研究章細胞生物學(xué)研究(ynji)方法方法第一頁，共56頁。第1頁/共55頁第二頁，共56頁?？荚嚐狳c(r din)：1.細胞培養(yǎng)的幾個概念2.光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造第2頁/共55頁第三頁，共56頁。系統(tǒng)第3頁/共55頁第四頁，共56頁。圖示：各種細胞(xbo)及其組分的大小在對數(shù)刻度尺上的分布圖及幾種顯微鏡的分辨范圍人眼(rn yn)0.2mm光鏡0.2m電鏡0.2nm線粒體、中心(zhngxn)體、核仁1mm=1000m1m=1000nm第4頁/共55頁第五頁，共56頁。（一）普通(ptng)光學(xué)顯微鏡第5頁/共55頁第六頁，共56頁。圖2-11 萊卡倒置(dozh)顯微

2、鏡第6頁/共55頁第七頁，共56頁。第7頁/共55頁第八頁，共56頁。第8頁/共55頁第九頁，共56頁。放大放大(fngd)倍數(shù)倍數(shù)分辨力分辨力最關(guān)鍵(gunjin)的因素第9頁/共55頁第十頁，共56頁。分辨力分辨力（resolution，R）角物鏡(wjng)聚光鏡n表示聚光鏡和物鏡之間介質(zhì)的折射率，空氣(kngq)中n為1， 香柏油中n為1.5；表示樣品對物鏡角孔徑的半角；表示照明光源的波長，可見光為0.5m。（一）普通（一）普通(ptng)光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡n sin=N.A=鏡口率鏡口率第10頁/共55頁第十一頁，共56頁。第11頁/共55頁第十二頁，共56頁。第12頁/共55頁第

3、十三頁，共56頁。介質(zhì)空氣水香柏油溴萘折射率11.331.5151.66折射率越接近玻璃的介質(zhì)(jizh)越理想光學(xué)玻璃(gungxub l)的折射率為：1.61.78第13頁/共55頁第十四頁，共56頁。圖2-3相差(xin ch)顯微鏡的光學(xué)原理第14頁/共55頁第十五頁，共56頁。圖2-10 DIC顯微鏡下的硅藻(u zo)（偽彩色）第15頁/共55頁第十六頁，共56頁。第16頁/共55頁第十七頁，共56頁。第17頁/共55頁第十八頁，共56頁。第18頁/共55頁第十九頁，共56頁。第19頁/共55頁第二十頁，共56頁。素直接標記技術(shù)。尼康E-600顯微鏡第20頁/共55頁第二十一頁，共

4、56頁。圖2-3 落射式照明(zhomng)原理第21頁/共55頁第二十二頁，共56頁。細胞骨架第22頁/共55頁第二十三頁，共56頁。培養(yǎng)的上皮細胞中的應(yīng)力纖維培養(yǎng)的上皮細胞中的應(yīng)力纖維(xinwi)（微絲紅色、微管綠色）（微絲紅色、微管綠色） 圖2-4 熒光顯微鏡照片（微管(wi un)呈綠色、微絲紅色、核藍色）， 第23頁/共55頁第二十四頁，共56頁。第24頁/共55頁第二十五頁，共56頁。熒光熒光(ynggung)素直接標記素直接標記第25頁/共55頁第二十六頁，共56頁。例：慢性(mn xng)粒細胞白血病CML第26頁/共55頁第二十七頁，共56頁。第27頁/共55頁第二十八頁，

5、共56頁。第28頁/共55頁第二十九頁，共56頁。圖2-12 JEM-1011透射(tu sh)電子顯微鏡圖2-14 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)透射電鏡圖（偽彩色(cis)）第29頁/共55頁第三十頁，共56頁。分辨力光源透鏡真空光鏡 200(油鏡)300 nm可見光玻璃透鏡 不需真空電鏡0.1 nm電子束電磁透鏡 真空第30頁/共55頁第三十一頁，共56頁。圖2-4光鏡與電鏡的比較(bjio)第31頁/共55頁第三十二頁，共56頁。圖圖2-5 掃描電鏡的光學(xué)系統(tǒng)掃描電鏡的光學(xué)系統(tǒng)第32頁/共55頁第三十三頁，共56頁。固定(gdng)包埋切片染色 2負染色技術(shù): 所謂負染色技術(shù)是染背景而不是染樣品的方法。主要過

6、程是，用重金屬鹽（如磷鎢酸鈉）對鋪展在載網(wǎng)上的樣品染色，樣品經(jīng)干燥后，整個載網(wǎng)都鋪上一層重金屬鹽，有凸出顆粒的地方?jīng)]有染料沉積，在圖像中背景是黑暗的；而未被包理的樣品顆粒則透明光亮，從而襯托出樣品的精細結(jié)構(gòu)，出現(xiàn)負染效果。 第33頁/共55頁第三十四頁，共56頁。第34頁/共55頁第三十五頁，共56頁。第35頁/共55頁第三十六頁，共56頁。圖2-7冰凍斷裂(dun li)與冰凍蝕刻技術(shù)P面E面第36頁/共55頁第三十七頁，共56頁。圖2-16冰凍蝕刻電鏡照片(zhopin)第37頁/共55頁第三十八頁，共56頁。第38頁/共55頁第三十九頁，共56頁。第39頁/共55頁第四十頁，共56頁。圖

7、2-22 速度逐漸提高(t go)，樣品按大小先后沉淀（一）差速離心（一）差速離心第40頁/共55頁第四十一頁，共56頁。圖2-23 A速度(sd)沉降，B等密度沉降用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。這類分離又可分為速度(sd)沉降和等密度沉降平衡兩種（圖2-23）。 第41頁/共55頁第四十二頁，共56頁。第42頁/共55頁第四十三頁，共56頁。第43頁/共55頁第四十四頁，共56頁。例如：細胞例如：細胞(xbo)(xbo)的分泌的分泌第44頁/共55頁第四十五頁，共56頁。流式細胞(xbo)術(shù)是對

8、單個細胞(xbo)進行快速定量分析與分選的一門技術(shù)。 圖2-8 用流式細胞計分(j fn)選細胞第45頁/共55頁第四十六頁，共56頁。第46頁/共55頁第四十七頁，共56頁。實驗(shyn)準備實驗用品：實驗用品：超凈工作臺，壓力超凈工作臺，壓力(yl)蒸汽消毒器，電熱干燥箱蒸汽消毒器，電熱干燥箱，濾器，酸缸，濾器，酸缸CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱倒置顯微鏡倒置顯微鏡酶標儀、微孔板震蕩器酶標儀、微孔板震蕩器液氮罐液氮罐自動雙重純水蒸餾器，純水儀自動雙重純水蒸餾器，純水儀耗材：培養(yǎng)瓶，吸管，電動吸引器，培養(yǎng)板，耗材：培養(yǎng)瓶，吸管，電動吸引器，培養(yǎng)板， 凍凍存管存管第47頁/共55頁第四十八頁，共56頁。

9、培養(yǎng)細胞(xbo)生長的條件1 細胞(xbo)的營養(yǎng)需要2 細胞(xbo)的生存環(huán)境 溫度: 37 O2 CO2: 5% CO2 +H2O H2CO3 H+ + HCO3- pH: 7.2-7.4 滲透壓 3 無污染 4 無毒第48頁/共55頁第四十九頁，共56頁。二、原代培養(yǎng)(piyng)和繼代培養(yǎng)(piyng)1.原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)(piyng) 取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細胞在傳代之前稱取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng)為原代培養(yǎng)(piyng)。2.繼代培養(yǎng)繼代培養(yǎng)(piyng)： 細胞在培養(yǎng)細胞在培養(yǎng)(piyng)器皿中生長一定時間后，被分開接種到新器皿中生長一定時間后，被分開接種到新的培養(yǎng)的培養(yǎng)(piyng)器皿中。器皿中。3.名詞：名詞： 細胞系（有限細胞系、無限細胞系）、細胞株細胞系（有限細胞系、無限細胞系）、細胞株第49頁/共55頁第五十頁，共56頁。第50頁/共55頁第五十一頁，共56