化學(xué)發(fā)光體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則-報(bào)批版

1、化學(xué)發(fā)光體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則 - 報(bào)批 版體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則發(fā)光免疫分析試劑 生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則 （ 報(bào)批稿）2009-05-15 09:00 發(fā)光免疫分析試劑是指利用特異的抗原抗體反應(yīng)等生物學(xué)原理，利用發(fā)光信號 的強(qiáng)弱來判斷樣本中相應(yīng)抗原或抗體是否存在來進(jìn)行檢測的一類試劑。主要包括化 學(xué)發(fā)光 （酶促、非酶促 ） ，電化學(xué)發(fā)光和時(shí)間分辨熒光等法。該指導(dǎo)原則主要適用于利用發(fā)光分析技術(shù)對蛋白質(zhì)等被測物質(zhì)進(jìn)行檢測的第三 類試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制，第二類試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制可參考該指導(dǎo)原則執(zhí)行，國 家食品藥品監(jiān)督管理部門將依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時(shí)組織修訂。

2、 一、基本 原則（ 一 ） 研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應(yīng)當(dāng)制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并符合有關(guān)法 規(guī)的要求。（ 二 ） 診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生 產(chǎn)環(huán)境，獲得醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證 ; 同時(shí)，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照體外診斷試劑生 產(chǎn)實(shí)施細(xì)則 （ 試行） 的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施 并保持有效運(yùn)行 ; 生產(chǎn)企業(yè)還應(yīng)該通過體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核 評定標(biāo)準(zhǔn) （試行） 的考核。企業(yè)應(yīng)對試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品 監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。（ 三 ） 診斷試劑的研制應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇 和確定應(yīng)符合基本

3、的科學(xué)原理。（ 四 ） 研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的 事宜。（ 五 ） 試劑生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標(biāo) : 保證產(chǎn)品使用安全，質(zhì)量穩(wěn)定，工藝可 控，使用有效。二、原材料質(zhì)量控制（ 一 ） 主要生物原料與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克 隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶 標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶 （ 辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等 ） 、中和反應(yīng)用抗原或抗 體、制備校準(zhǔn)品 （標(biāo)準(zhǔn)品 ） 等。一般按工藝要求對這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，以保 證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須

4、相對穩(wěn)定 若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝 ）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括 :1（ 外觀肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉 淀或顆粒 ; 或者為白色粉末，不含其他顏色雜質(zhì) ; 特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo) 準(zhǔn)。2（ 純度和分子量主要經(jīng) SDS-PAGE電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方 法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度 進(jìn)行電泳。一般每個電泳道加樣量為 5g，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或 銀染法染色。

5、染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相 應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位置。3( 蛋白濃度蛋白濃度可通過 Lowry 法、 280nm光吸收法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測。4( 效價(jià)效價(jià)的測定一般根據(jù)蛋白含量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī) 定的要求。5( 功能性實(shí)驗(yàn) 功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料 的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。( 二 ) 生物輔料生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料、主要包括 小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合 20

6、00 年 版的中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗(yàn) :1( 牛血清或羊血清外觀: 為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物無菌試驗(yàn) : 將血清直接 37?度放置 7 天，放在明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或沉 淀。總蛋白含量 : 用雙縮脲法測定，蛋白含量不小于 32mg/ml。球蛋白含量 : 取待測血清 1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于0.85%NaCl溶液，至 1ml，用 Lowry 方法測定，蛋白含量應(yīng) ?2mg/ml。2( 牛血清白蛋白 :外觀: 應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見 的其它雜質(zhì)顆粒溶解性:

7、將牛血清白蛋白配成 10%溶液，在 18-26?時(shí)，溶解時(shí)間應(yīng)不大于 15 分 鐘。 1%牛血清白蛋白水溶液的 pH值應(yīng)為 6.57.1 。總蛋白含量 : 用雙縮脲方測定，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為 ?95,?？偟鞍字械?BSA含量: 采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為 ?95%。BSA的凈含量 : 總蛋白含量乘總蛋白中的 BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為 ?90%。3（酪蛋白 :酸度應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。4（ 標(biāo)記用酶應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱 （ 如辣根過氧化物酶、堿 性磷酸酶等 ） ，同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純 度 RZ 值 （OD403nm/OD280nm應(yīng)）

8、 大于 3.0 。對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí) 驗(yàn)，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行測定，均不得出現(xiàn)非特異 性反應(yīng)。生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。（ 三 ） 化學(xué)原材料 化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液 pH 值、重金屬檢 測、溶解情況、干燥失重、熾灼殘?jiān)龋鶓?yīng)符合中國生物制品主要原輔材 料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) （2000 年版） 分析純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。1（無機(jī)類 : 主要包括有氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氯鈉等。2（有機(jī)類 : 主要包括有吐溫 20、三羥基氨基甲烷等。3（ 特殊化學(xué)原料 :

9、Eu-DTTA，魯米諾等。Eu-DTTA純度分析與鑒定 : 要求 Eu-DTTA各功能團(tuán)符合分子結(jié)構(gòu)，純度在 96%以 上。（ 四 ） 其他原輔料1（ 微孔板條外觀: 明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量應(yīng)無劃痕、破損、飛邊、骯臟、表面 光滑。板條與微孔反應(yīng)條塑料框架應(yīng)配合合適。材質(zhì): 微孔反應(yīng)板條每孔加 200L增強(qiáng)液，用發(fā)光免疫分析儀檢測其熒光值， 平均本底熒光值 ?1500。吸附能力和精密性 : 用一定濃度的蛋白包被微孔板條，檢測熒光值， CV值結(jié)果 應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi) CV?5,，批間 CV?10,。2（ 其他粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應(yīng)參照國家食

10、品藥品監(jiān) 督管理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則和醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽 和包裝標(biāo)識管理規(guī)定建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。三、試劑盒各組分的生產(chǎn)發(fā)光免疫分析試劑主要組分的生產(chǎn)包括包被反應(yīng)板、標(biāo)記物制備、各種溶液的 配置、凍干、分包裝等步驟 ; 并通過產(chǎn)品的半成品檢驗(yàn)和成品檢驗(yàn)兩個質(zhì)控過程來 保證其質(zhì)量符合規(guī)定。（ 一 ） 固相載體的制備 （ 因不同產(chǎn)品使用的包被載體有很大區(qū)別，在此以標(biāo)準(zhǔn) 96 孔微孔反應(yīng)板為例進(jìn)行描述 ）1（ 包被板的準(zhǔn)備準(zhǔn)備經(jīng)檢驗(yàn)合格的包被板，記錄批號、數(shù)目、狀態(tài)標(biāo)識。質(zhì)控項(xiàng)目 : 尺寸，外觀，包裝。2（ 包被液的配制配制包被緩沖液，加入包被的抗體或抗原至工作濃度，混合均勻，即

11、成所需的包被液，工作濃度的包被液應(yīng)在規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目 : 包被緩沖液配方， pH值，包被物成份。3（ 包被板的包被 包被液按工藝要求加入包被板。記錄所包被的包被板數(shù)量。 質(zhì)控項(xiàng)目 : 包被體積，溫度，時(shí)間，過程監(jiān)控。4（洗板工作液的配制 （ 按各單位工藝要求，可以不洗板 ） 按配方配制洗板工作液。質(zhì)控項(xiàng)目 : 洗板工作液配方， pH值。5（ 封閉液的配制 按配方配制封閉液。 質(zhì)控項(xiàng)目 : 封閉液配方， pH值。6（ 洗板和封閉包被完成后，抽去孔內(nèi)包被液，用洗板工作液洗板后 （ 按各單位工藝要求， 可以不洗板 ） ，加入封閉液。質(zhì)控項(xiàng)目 : 封閉體積，溫度，時(shí)間，過程監(jiān)控。質(zhì)檢項(xiàng)目 :

12、封閉前檢驗(yàn)包被均一性。7（ 抽干 封閉后的反應(yīng)板，抽干孔內(nèi)液體。 質(zhì)控項(xiàng)目 : 過程監(jiān)控。8（ 干燥 反應(yīng)板應(yīng)按工藝的要求進(jìn)行干燥。 質(zhì)控項(xiàng)目 : 溫度，濕度，時(shí)間，過程監(jiān)控等。9（ 密封包裝將干燥后的反應(yīng)板用鋁箔袋密封包裝，內(nèi)放干燥劑 （ 按各單位工藝要求，可 以不放）。質(zhì)控項(xiàng)目 : 密封性能，標(biāo)示及效期等。10（反應(yīng)板 （ 半成品 ） 檢驗(yàn)對裝袋密封后的反應(yīng)板進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、板內(nèi)變異、板間變異。（ 二 ） 滴配過程1（ 酶結(jié)合物的制備 （ 根據(jù)各產(chǎn)品實(shí)際情況，該步驟可不進(jìn)行 ） 采用常規(guī)過碘酸鈉乙二醇法將相關(guān)的抗體 （或抗原 ） 標(biāo)記辣根過氧化物酶 （ 或其他酶 ） ，酶標(biāo)記后的抗體

13、（ 或抗原 ） 應(yīng)加入適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑保存于低溫。質(zhì)控項(xiàng)目 : 標(biāo)記方法，過程控制。2（ 酶結(jié)合物的鑒定（1） 功能性實(shí)驗(yàn)將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋后，用于產(chǎn)品的滴配，其結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)試劑盒的 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（2） 穩(wěn)定性將酶結(jié)合物用酶稀釋液稀釋，進(jìn)行 2-8? ，及熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，滴配結(jié)果應(yīng)符合相 關(guān)試劑盒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。3（ 酶結(jié)合物稀釋液按酶結(jié)合物稀釋液的配方配制，存放在 2-8? 保存，并于規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用。 質(zhì)控項(xiàng)目 : 酶結(jié)合物稀釋液配方， pH值。4（ 酶結(jié)合物工作濃度的滴配取酶結(jié)合物，用酶結(jié)合物稀釋液稀釋到不同的濃度，用已制備好的反應(yīng)板進(jìn)行 滴配。測定系列標(biāo)準(zhǔn)品及相應(yīng)的質(zhì)控品，確定使體系達(dá)到最優(yōu)

14、的酶結(jié)合物工作濃 度。5（ 酶結(jié)合物工作液配制 將所需量酶結(jié)合物和酶結(jié)合物稀釋液按滴配濃度混合均勻。質(zhì)檢項(xiàng)目 : 分裝前檢驗(yàn)，用配套的反應(yīng)板進(jìn)行檢驗(yàn)，外觀、靈敏度、質(zhì)控品測 定值、定量產(chǎn)品應(yīng)作校準(zhǔn)品線性檢測。6（ 酶結(jié)合物工作液的分裝按工藝要求分裝酶結(jié)合物工作液。質(zhì)控項(xiàng)目 : 分裝前確認(rèn)試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。7（酶結(jié)合物工作液 （ 半成品） 檢驗(yàn) 對分裝后的酶結(jié)合物工作液進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、靈敏度、校準(zhǔn)品劑 量-反應(yīng)曲線線性、質(zhì)控品測定值。（ 三 ） 校準(zhǔn)品、陰 / 陽性對照或質(zhì)控品的制備1（ 稀釋液按稀釋液的配方配制，存放在 2-8?或-20? 保存，并于有效期

15、內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目 : 稀釋液配方， pH值。2（校準(zhǔn)品、陰 /陽性對照或質(zhì)控品的配制校準(zhǔn)品、陰 / 陽性對照或質(zhì)控品的配制應(yīng)具有量值溯源性，可參照國家標(biāo)準(zhǔn)品、 WHO標(biāo)準(zhǔn)品或其他級別的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行配制。質(zhì)檢項(xiàng)目 :分裝前檢驗(yàn)，準(zhǔn)確性、劑量 ,反應(yīng)曲線線性 （定量產(chǎn)品） 、質(zhì)控品測定 值。3（校準(zhǔn)品、陰 /陽性對照或質(zhì)控品的分裝按工藝要求分裝校準(zhǔn)品、陰 / 陽性對照或質(zhì)控品。質(zhì)控項(xiàng)目 : 分裝前確認(rèn)試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量。4（校準(zhǔn)品、陰 /陽性對照或質(zhì)控品 （半成品）檢驗(yàn)對分裝后的校準(zhǔn)品、陰 / 陽性對照或質(zhì)控品進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀、分裝量、準(zhǔn) 確性、劑量 ,反應(yīng)曲線線性 （定量產(chǎn)品） 、質(zhì)

16、控品測定值。（ 四 ） 化學(xué)發(fā)光底物的制備1（ 底物緩沖液按底物緩沖液的配方配制，存放在 2-8? 保存，并于有效期內(nèi)使用。質(zhì)控項(xiàng)目 : 底物緩沖液配方， pH值。2（ 化學(xué)發(fā)光底物 （氧化劑和發(fā)光劑 ） 的配制分別按氧化劑和發(fā)光劑的配方在底物緩沖液中加入相應(yīng)的氧化劑和發(fā)光劑質(zhì)控項(xiàng)目 : 氧化劑和發(fā)光劑配方。質(zhì)檢項(xiàng)目 : 分裝前檢驗(yàn)，本底、發(fā)光強(qiáng)度。3（ 化學(xué)發(fā)光底物 （氧化劑和發(fā)光劑 ） 的分裝按工藝要求分裝化學(xué)發(fā)光底物 （ 氧化劑和發(fā)光劑 ） 。質(zhì)控項(xiàng)目 : 分裝前確認(rèn)試劑名稱、批號、數(shù)量，分裝量，封裝后密封性。4（化學(xué)發(fā)光底物 （半成品 ） 檢驗(yàn) 對分裝后的化學(xué)發(fā)光底物進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，外觀

17、、分裝量、本底、靈敏度、發(fā)光 強(qiáng)度。（ 五 ） 銪標(biāo)記物的制備針對不同的標(biāo)記生物原料，確定不同的標(biāo)記制備工藝，包括銪 -DTTA與標(biāo)記生 物原料的比例，標(biāo)記溫度和標(biāo)記時(shí)間、 標(biāo)記得率的計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)等。在實(shí)際操作過程 中要求嚴(yán)格按照 SOP進(jìn)行操作（ 六 ） 凍干各種凍干品都需建立各自的凍干工藝，凍干品外觀應(yīng)該呈現(xiàn)疏松的粉末狀固 體，具有一定的形狀，復(fù)溶完全、迅速，呈澄清透明液體。（ 七 ） 分裝、燈檢和貼簽 分裝量用減重稱量法進(jìn)行測量，把質(zhì)量換算成體積后進(jìn)行分裝量的控制。燈檢 是目測檢查各組分的色澤、分裝量以及是否混濁、有雜質(zhì)等。（ 八 ） 包裝根據(jù)試劑盒包裝 SOP要求及說明書的要求，以流水線操

18、作形式進(jìn)行包裝。包裝時(shí)應(yīng)嚴(yán)格檢查品名、批號、裝量，認(rèn)真核對各物料數(shù)量，并在關(guān)盒前進(jìn)行復(fù)核。四、質(zhì)量控制（ 一 ） 半成品質(zhì)量控制1（ 半成品抽樣 檢驗(yàn)人員按試劑的批號，根據(jù)抽樣申請單抽取規(guī)定數(shù)量的半成品各組分，作號 標(biāo)記、待檢。2（質(zhì)控品的要求用于半成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括陰 / 陽性樣品符合率，靈敏度 （最低檢出 量） ，特異性，檢測范圍，定量曲線的線性，精密性，穩(wěn)定性等指標(biāo)，如具有國家 標(biāo)準(zhǔn)品或參考品的產(chǎn)品應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品 （ 參考品 ） 或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品 （ 參考品 ） 標(biāo)化 的企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)。如無國家標(biāo)準(zhǔn)品 （ 參考品 ） ，可采用企業(yè)參考品，企業(yè)參考 品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其 質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。3（ 半成品檢驗(yàn) 根據(jù)各個試劑盒的企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或者制檢規(guī)程進(jìn)行半成品的檢驗(yàn)，檢驗(yàn)指標(biāo)一般包 括準(zhǔn)確性、靈敏度、特異性、精密性、 相關(guān)性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)對每一批試劑的半成品進(jìn)行穩(wěn)定性研究。試劑盒各組分應(yīng)留樣，2?8?定期作穩(wěn)定性考核，同時(shí)作 37?熱穩(wěn)定性試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（ 二 ） 成品質(zhì)量控制1（ 成品抽樣產(chǎn)品包裝完成后，質(zhì)檢人員根據(jù)試劑的批號、實(shí)際包裝量、抽樣申請單