Alltech 2000型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器解決HPLC檢測(cè)難題

1、ELSD檢測(cè)器的選擇和主要的應(yīng)用介紹GRACE 格雷斯公司探索科技 Davison 從分析到制備的解決方案美國(guó)奧泰公司(Alltech)于2004年8月并入Grace公司，隸屬于三大 分支之一的Davison旗下的探索科技部門。Davison是全球最大的硅膠生產(chǎn)商，能夠?yàn)長(zhǎng)C,GC和LC的應(yīng)用提供從小規(guī)模研發(fā)到大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的一站式解決方案。 HPLC和GC柱，配件和儀器 硅膠基色譜填料HPLC毛細(xì)柱和微徑柱 HPLC柱和小型儀器 制備級(jí)和工業(yè)級(jí)LC柱和裝柱服務(wù) 生物分離專用HPLC柱和填料 GRACE大綱常規(guī)檢測(cè)器的回顧ELSD的檢測(cè)原理ELSD與常規(guī)檢測(cè)器的比較ELSD在分析上的優(yōu)點(diǎn)All

2、tech ELSD的介紹ELSD的維護(hù)質(zhì)量保證總結(jié)GRACE其它檢測(cè)器的介紹 紫外可見UV/Vis 示差折光RI 熒光Fluorescence 質(zhì)譜Mass SpectrometryGRACE檢測(cè)器是高效液相色譜（HPLC）的核心部件之一，被喻為HPLC的眼睛。它的作用是將色譜柱流出物中樣品含量的變化轉(zhuǎn)換為可供觀測(cè)的信號(hào)，通常是轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，以便自動(dòng)記錄下來進(jìn)行定性定量分析。檢測(cè)器的應(yīng)用分布紫外可見 65%示差和蒸發(fā)光10%電化學(xué)10%熒光8%質(zhì)譜4%其它3%GRACE紫外/可見檢測(cè)器UV/VIS優(yōu)點(diǎn)： 易于操作 可靠性 費(fèi)用相對(duì)低廉 溶劑梯度兼容 對(duì)樣品沒有破壞性 相對(duì)靈敏度高GRACE局限

3、性： 沒有好的發(fā)光基團(tuán) 的化合物響應(yīng)較差 溶劑的使用上受紫外截止波長(zhǎng)的限制熒光檢測(cè)器Fluorescence 優(yōu)點(diǎn)：很好的靈敏度很好的選擇性受流速和溫度的變化影響很小GRACE局限性：線性范圍窄操作復(fù)雜-需要對(duì)化合物和儀器的變化了解透徹某些物質(zhì)如氧氣會(huì)熄滅熒光-必須嚴(yán)格脫氣能夠自然產(chǎn)生熒光的化合物不是很多衍生方法復(fù)雜示差折光檢測(cè)器RI優(yōu)點(diǎn)：通用性-對(duì)幾乎所有的物質(zhì)具有相應(yīng)寬的動(dòng)態(tài)線性范圍-104易于操作GRACE局限性:檢測(cè)靈敏度不高對(duì)于溫度和壓力的波動(dòng)敏感平衡慢檢測(cè)既有正峰也有負(fù)峰不能進(jìn)行梯度洗脫流動(dòng)相預(yù)先混合后的效果好于泵在線混合的質(zhì)譜 MS優(yōu)點(diǎn):靈敏度高選擇性好提供化學(xué)結(jié)構(gòu)信息GRACE

4、局限性:購(gòu)買費(fèi)用高操作復(fù)雜需要經(jīng)常維護(hù)定量分析困難蒸發(fā)光散射檢測(cè)器ELSD發(fā)展歷史檢測(cè)原理局限性優(yōu)點(diǎn)在分析中的應(yīng)用GRACE發(fā)展歷史: 第一臺(tái)商業(yè)化的產(chǎn)品出現(xiàn)在80年代初期 最早的應(yīng)用集中在聚合物的分析上 90年代初期，更多其它方面的應(yīng)用 目前,應(yīng)用在廣泛的領(lǐng)域GRACEELSD行業(yè)超過20年的領(lǐng)先制造經(jīng)驗(yàn):GRACE500 型2000 型800 型2000ES型3300 型獨(dú)特的檢測(cè)方法：檢測(cè)三部曲:霧化溶劑的蒸發(fā)檢測(cè)GRACEELSD可以對(duì)所有揮發(fā)性低于流動(dòng)相的物質(zhì)作出準(zhǔn)確檢測(cè)，而與被檢測(cè)物質(zhì)的化學(xué)基團(tuán)關(guān)系不大，物理性質(zhì)類似的物質(zhì)響應(yīng)一致，響應(yīng)值與樣品的質(zhì)量成正比。第一步：霧化色譜柱流出物

5、通過噴霧器針孔與氮?dú)饣旌闲纬删鶆虻撵F狀液滴(氣溶膠)GRACE第二步：溶劑的蒸發(fā)液滴通過加熱的漂移管流動(dòng)相蒸發(fā)干燥的樣品顆粒保留GRACE第三步：檢測(cè)樣品顆粒通過流動(dòng)池激光“撞擊”顆粒被散射光電二極管檢測(cè)散射光檢測(cè)角度為90，避免虛假信號(hào)(90折射/衍射光；90反射光)GRACE兩種類型氣溶膠處理方式：A型-所有液滴進(jìn)入漂移管及流動(dòng)池(又稱為“無氣溶膠分流 No Aerosol Splitting”)B型-部分液滴分流排掉；只有一部分進(jìn)入漂移管及流動(dòng)池(“氣溶膠分流Aerosol Splitting”)GRACEA型ELSD-氣溶膠不分流操作所有樣品從噴霧器進(jìn)入漂移管及流動(dòng)池需要較高溫度才能完

6、全蒸發(fā)流動(dòng)相；A型ELSD只有不分流一種操作模式GRACEB型ELSD-氣溶膠分流操作部分樣品被排掉較低的溫度已足夠蒸發(fā)所有溶劑B型ELSD只有分流一種操作模式GRACEAlltech 2000(ES)型ELSD唯一提供兩種操作模式的ELSD，在任何流動(dòng)相及樣品分析條件下均達(dá)到最佳結(jié)果GRACE一臺(tái)儀器，兩種操作模式：撞擊器(Impactor)關(guān)-所有液滴進(jìn)入漂移管及流動(dòng)池(A型ELSD-無分流)撞擊器(Impactor)開-部分液滴被排除，只有一部分進(jìn)入漂移管及流動(dòng)池(B型ELSD-氣溶膠分流)采用新型專利“氣溶膠分流技術(shù)” US Patent #6229605 GRACE撞擊器關(guān)模式撞擊器

7、與氣溶膠流向平行所有樣品流過漂移管到達(dá)流通池最適用于非揮發(fā)性樣品及揮發(fā)性溶劑(大部分為有機(jī))Drive ShaftNebulizerOpticsImpactor OffGRACENebulizerDrive ShaftImpactor OffOpticsExhaustDrift TubeNebulizerImpactorDrain撞擊器開模式撞擊器垂直于氣溶膠流向，部分液滴碰上撞擊器從廢液管排掉;其余穿過撞擊器，經(jīng)過漂移管到達(dá)流動(dòng)池最適用于半揮發(fā)性樣品及低揮發(fā)性溶劑(大部分為水溶液)Drive ShaftNebulizerImpactor OnOpticsGRACENebulizerDrive

8、 ShaftImpactor OnNebulizerDrainImpactorDrift TubeExhaustOptics撞擊器關(guān)-最適合非揮發(fā)性樣品Column: Alltech 700CH Carbohydrate Column 10m, 300 x6.5mmMobile Phase: 100% WaterFlowrate:0.5mL/min1. 蜜三糖 (50g/mL)2. 乳糖(50g/mL)3. 葡萄糖 (50g/mL)4. 甘露糖 (50g/mL)Column: Alltech 700CH Carbohydrate Column 10m, 300 x6.5mmMobile Pha

9、se: 100% WaterFlowrate:0.5mL/min# 9206# 9205Impactor OnImpactor Off碳水化合物非揮發(fā)性樣品在撞擊器“關(guān)”的情況下也不揮發(fā)，全部進(jìn)入流動(dòng)池，得到最高靈敏度 GRACE撞擊器關(guān)-最適合揮發(fā)性溶劑有機(jī)溶劑在較低溫度蒸發(fā)，在撞擊器“關(guān)”的情況下，也會(huì)完全蒸發(fā)，B型ELSD 任何條件下均分流，造成樣品損失，降低檢測(cè)靈敏度Column: Alltech Econosphere, C18, 5m, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/minColumn:

10、 Alltech Econosphere, C18, 5m, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/min1. n-癸基-b-D-吡喃糖苷 (5g/mL)2. n-辛基-b-D-吡喃糖苷 (5g/mL)3. n-十二烷基-b-D-吡喃糖苷(5g/mL)葡萄糖苷分析Impactor OnImpactor Off# 9180# 9179GRACE撞擊器開-最適合半揮發(fā)性樣品在撞擊器開情況下，可以較低溫蒸發(fā)溶劑，防止半揮發(fā)性樣品蒸發(fā)防腐劑分析Column: Alltech Econosphere, C18, 5m

11、, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/minColumn: Alltech Econosphere, C18, 5m, 150 x 4.6 mmMobile Phase: Methanol:Water (90:10)Flowrate:0.8mL/min1. 羥基苯甲酸甲酯 2. 羥基苯甲酸乙酯3. 羥基苯甲酸丙酯4. 羥基苯甲酸丁酯# 9202Impactor OffImpactor On# 9201GRACE撞擊器開-在幾乎室溫下檢測(cè)半揮發(fā)樣品Column:Prevail Carbohydrate E

12、S, 5m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: Acetonitrile: 0.04% Ammonium Hydroxide (80:20)Flowrate: 1.0mL/min 1.Glycerol甘油GRACEELSD的局限性1. 只能使用揮發(fā)性的流動(dòng)相2. 樣品的揮發(fā)性必須要小于流動(dòng)相3. 檢測(cè)器響應(yīng)是非線性的GRACE揮發(fā)性的流動(dòng)相改性劑#1Volatile Mobile Phase ModifierspKapKbpH RangeBPMPAcidsTrifluoroacetic Acid三氟乙酸0.313.7072.4CFormic Acid甲酸3.7510.2510

13、0.7CAcetic Acid醋酸4.759.25116.0CCarbonic Acid碳酸6.377.63BasesAmmonia氨水9.254.75-33.35CMethylamine甲胺10.813.1916.6CEthylamine二乙胺10.663.34-6.3CTriethylamine三乙胺11.012.9989.3CBuffersAmmonium Formate甲酸胺3.0-5.0120CPyridinium Formate甲酸吡啶翁3.0-5.0Ammonium Acetate乙酸胺3.8-5.8111CPyridinium Acetate乙酸吡啶翁4.0-6.0Ammoni

14、um Carbonate (for reverse phase)碳酸胺(用于反相)8.0 (adjusted)Ammonium Carbonate碳酸胺5.5-7.5 and 9.3-11.3GRACE揮發(fā)性的流動(dòng)相改性劑#2Volatile Mobile Phase ModifierspKapKbpH RangeBPMPIon-Pair ReagentsPentafluoropropionic Acid五氟丙酸0.696-97CHeptafluorobutyric Acid七氟丁酸0.6120CNonafluoropentanoic Acid九氟戊酸140CPentadecafluorooc

15、atanoic Acid十五氟辛酸0.6189CTridecafluoroheptanoic Acid十三氟庚酸0.6175CGRACE載氣流速與漂移管溫度GRACE載氣流速和漂移管溫度是ELSD中可以調(diào)節(jié)的兩個(gè)重要參數(shù)，建立適當(dāng)?shù)腍PLC-ELSD分析方法需要對(duì)這兩個(gè)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化的原則是降低噪聲到可以接受的程度，并盡量提高信噪比。載氣流速與漂移管溫度GRACE漂移管溫度對(duì)基線水平和噪音的影響并無明顯的規(guī)律性。低于某一溫度，基線水平較高，因?yàn)榈陀谶@一溫度，流動(dòng)相得不到充分揮發(fā)，而鹽的加入將會(huì)提高這一溫度，因?yàn)辂}的揮發(fā)需要更高的溫度，但并不是漂移管溫度越高越好，因?yàn)闇囟忍邥?huì)使流動(dòng)相沸騰，

16、反而會(huì)增加背景噪音，同時(shí)還有可能導(dǎo)致溶質(zhì)的部分揮發(fā)，降低信噪比。故最優(yōu)溫度應(yīng)為在流動(dòng)相（包括其中所含的鹽）基本揮發(fā)的基礎(chǔ)上，產(chǎn)生可接受噪音的最低溫度載氣流速與漂移管溫度GRACE一般來說，在其它條件不變的情況下，載氣流速越小，形成的物質(zhì)粒子半徑越大，對(duì)激光的散射能力越強(qiáng)，相應(yīng)的響應(yīng)信號(hào)越大。但并不是載氣流速越小越好，因?yàn)楫?dāng)載氣流速太小時(shí)，流動(dòng)相不能完全揮發(fā)，背景噪音會(huì)增加，信噪比也會(huì)降低。最優(yōu)載氣流速應(yīng)是在可接受噪音的基礎(chǔ)上，產(chǎn)生最大檢測(cè)響應(yīng)值時(shí)的最低流速。如何應(yīng)對(duì)非線性響應(yīng)的檢測(cè)器？選擇2階方程或者冪指曲線方程使用曲線的僅僅線性部分使用log/log 雙對(duì)數(shù)方法產(chǎn)生線性曲線 即:對(duì)照品的濃度

17、和面積同時(shí)取對(duì)數(shù),至少兩個(gè)點(diǎn)得到直線方程在中國(guó)藥典2005版中，中藥計(jì)算采用兩點(diǎn)雙對(duì) 數(shù)方法,抗生素計(jì)算采用三點(diǎn)雙對(duì)數(shù)方法GRACE散射光的響應(yīng)值與粒子質(zhì)量的關(guān)系： Ikmb取對(duì)數(shù)： lgIblgmlgk m：待測(cè)組分的粒子質(zhì)量和 I： 待測(cè)組分所產(chǎn)生的散射光光強(qiáng) k,b：常數(shù)Log-Log線性方程GRACEELSD-功能強(qiáng)大的HPLC檢測(cè)器通用性高-可檢測(cè)任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相 的化合物靈敏度好-比示差及低波長(zhǎng)紫外靈敏一致的響應(yīng)-給出準(zhǔn)確的樣品濃度用途廣泛-梯度相容，改善分離及縮短分析時(shí)間GRACEELSD響應(yīng)因子的一致性GRACE不同的物質(zhì)在蒸發(fā)光散射檢測(cè)器中幾乎具有相同的響應(yīng)因子，這種響應(yīng)

18、因子的一致性，使純度分析結(jié)果和多組分物質(zhì)的相對(duì)比例測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確。在無合適對(duì)照品的情況下，采用另外一種含量已知的物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)，測(cè)定未知物含量成為可能。這一點(diǎn)對(duì)組合分子庫(kù)、無紫外發(fā)色團(tuán)物質(zhì)的新藥基準(zhǔn)品的建立尤為有用。ELSD比較其它幾種檢測(cè)器的優(yōu)勢(shì)示差 RI紫外可見 UV/Vis熒光Fluorescence 質(zhì)譜MSGRACEELSD相比示差的優(yōu)勢(shì):示差檢測(cè)器的限制ELSD優(yōu)點(diǎn)溫度變化會(huì)引起基線不穩(wěn)定不受環(huán)境溫度影響可能出現(xiàn)負(fù)峰均是正峰不可以用梯度洗脫梯度洗脫兼容受溶劑峰干擾溶劑無響應(yīng)，無溶劑峰靈敏度差ng級(jí)的檢測(cè)限GRACEELSD不會(huì)出負(fù)峰五糖, 1.5mg/mLELSDRIRI (反轉(zhuǎn)極性)

19、GRACEELSD相對(duì)RI，提高了檢測(cè)靈敏度和基線穩(wěn)定性RIELSD10277102781.Fructose 果糖2.Glucose 葡萄糖3. Sucrose 蔗糖Column: Prevail Carbohydrate ES, 5m, 53 x 7mm (Part No. 35104) Mobile Phase: Acetonitrile:Water (75:25) Flowrate: 2.0mL/min Column Temp: 30CGRACE碳水化合物的梯度洗脫# 7576 (Isocratic)1. 核糖2. 木糖3. 果糖4. 葡萄糖5. 蔗糖6. 麥芽糖7. 乳糖8. 棉子糖1

20、. 果糖2. 葡萄糖3. 蔗糖4. 麥芽糖5. 乳糖# 7570 (Gradient)CarbohydratesGRACEELSD相比紫外檢測(cè)器的優(yōu)勢(shì): UV的局限性 ELSD的優(yōu)點(diǎn)只能檢測(cè)吸收紫外或可見光 檢測(cè)揮發(fā)性低于溶劑的任的化合物何化合物檢測(cè)基于樣品的消光系數(shù) 檢測(cè)基于樣品濃度低波長(zhǎng)紫外檢測(cè)作梯度洗脫時(shí)梯度洗脫時(shí)基線穩(wěn)定 出現(xiàn)基線漂移溶劑峰會(huì)干擾 溶劑沒有響應(yīng)，無溶劑峰 溶劑選擇受其紫外末端吸收限制可用任何揮發(fā)性的溶劑GRACE甾體化合物# 79411. 雌酮-3-硫酸鈉, 100ng2. b-雌二醇-17- b -D-葡萄糖苷酸鈉, 100ng3. 5b -孕烷-3a,20a-二醇-

21、葡萄糖酸苷, 220ng # 7940 Column: Alltima C18, 5m, 150 x 2.1mm(Part No. 88370)Mobile Phase:A: 0.1% TFA in WaterB: 0.1% TFA in MethanolGradient: Time:01018%B:60100100 Flow Rate: 0.2mL/minGRACE10446ELSD顯示在UV譜圖中未檢測(cè)到的成分 Lotrimim AF Topical Solution1. PEG2. ClotrimazoleColumn: Alltima C18, 5m, 150 x 4.6mm (Par

22、t No. 88302)Mobile Phase:A: Water B: MethanolGradient: Time:081020 25%B:305010010030Flow Rate: 1.0mL/minColumn Temp.:40C#10446 #10447GRACEELSD比UV更能準(zhǔn)確反映樣品實(shí)際的量1:1 混合物1. Ephedrine 麻黃素2. Caffeine 咖啡因1045010449Column: Alltima HP EPS C18, 5m, 150 x 4.6mm (Part No. 87715) Mobile Phase: 1% Acetic Acid:Metha

23、nol:Acetonitrile (70:20:10) Flow Rate: 1.0mL/minGRACEELSD檢測(cè)沒有發(fā)光團(tuán)的化合物不需要衍生1. lauric Acid2. Myristic Acid3. Palmitic Acid4. Stearic Acid5. Arachidic Acid6. Behenic Acid9539Column: Prevail Organic Acid, 5m, 150 x 4.6mm (Part No. 88640) Mobile Phase: (75:25) Acetonitrile:Methanol Flow Rate: 1.0mL/min脂肪酸

24、GRACEELSD在分離使用的溶劑選擇上有特點(diǎn)1. LGG2. LGL3. LLL4. OGL5. PGL6. OLL7. OGO + PLL8. OOO10047Column: Alltima C18, 5m, 250 x 4.6mm (Part No. 88056) Mobile Phase: A: Acetonitrile B: Dichloromethane Gradient: Time:040%B:3050 Flow Rate: 1.0mL/minTriglycerides in Evening Primose Oil 月見草油中的甘油三酯GRACE二氯甲烷對(duì)于高分子量的甘油三酯溶解

25、度高.熒光檢測(cè)器的局限性大多需要柱前或柱後衍生無需衍生熒光檢測(cè)器的限制 ELSD的優(yōu)點(diǎn)GRACE柱前衍生法分析氨基酸紫外&熒光1. 天門冬氨酸2. 谷氨酸3. 絲氨酸4. 甘氨酸5. 組氨酸6. 蘇氨酸7. 丙氨酸8. 精氨酸9. 脯氨酸10. 酪氨酸11. 蛋氨酸12. 纈氨酸13. 半胱氨酸14. 異亮氨酸15. 亮氨酸16. 苯丙氨酸17. 賴氨酸#7596#5164GRACE 1. Gly2. Ser/Asn3. Asp4. Gln5. Ala/Thr6. Glu7. Cys/Lys8. His9. Pro10. Arg11. Val12. Met13. Tyr14. Ile15. L

26、eu16. Phe17. TrpColumn: Prevail C18, 5m, 250 x 4.6mm (Part No. 99210)Mobile Phase: A: 5mM Heptafluorobutyric Acid, pH1.0 w/0.7% TFA B: AcetonitrileGradient: Time:06825%B:001535Flow Rate: 1.0mL/minGRACEELSD對(duì)無衍生氨基酸分析雖然MS是通用性的檢測(cè)器，ELSD也有自己的優(yōu)勢(shì)投入和操作的成本低操作容易維護(hù)簡(jiǎn)單定量相比更準(zhǔn)確 對(duì)于色譜條件的要求在ELSD和MS上是相似的，所以ELSD方法能夠方便的應(yīng)

27、用在MS上不需要修改。 在ELSD上進(jìn)行MS的方法研究，能夠節(jié)省MS用于實(shí)際樣品的分析GRACE并聯(lián)使用UV/ELSD/MS能夠得到最多的結(jié)構(gòu)和濃度信息1. Aspartame2. Hydrocortisone 3. Reserpine4. Terfenadine Column: ZORBAX StableBond C18, 3.5m, 50 x 4.6mm (Part No. 835975-902)Mobile Phase: A: 0.025% Formic Acid in Water B: 0.025% Formic Acid in AcetonitrileGradient: Time:0

28、155.1%B:250025Flow Rate: 1.0mL/minColumn Temp: 30C Chrom#10456 #10458 #10457GRACE總結(jié):用ELSD替代或補(bǔ)充現(xiàn)有檢測(cè)器的益處消除衍生簡(jiǎn)化方法比RI有更好的靈敏度和穩(wěn)定性給其它檢測(cè)器作補(bǔ)充，能夠看到哪些物質(zhì)沒有檢測(cè)到能夠比UV&MS得到更準(zhǔn)確的樣品量的信息GRACEELSD更多的優(yōu)點(diǎn)：通用性的檢測(cè)器:- 可以使用微徑柱來提高靈敏度- 條件方便放大到制備- 在極端的梯度條件下進(jìn)行快速分離檢測(cè)沒有發(fā)光團(tuán)的化合物的理想選擇:- Lipids磷脂- Polymers聚合物- Surfactants表面活性劑- Carbohy

29、drates碳水化合物GRACE在ELSD上用微徑柱檢測(cè)1.Vitamin A(100ng on-column)2.Vitamin E(160ng on-column)3.Vitamin K1(130ng on-column)Column:Alltima C18, 3m, 150 x 1mm (Part No. 88384) Mobile Phase: Methanol:Chloroform (90:10)Flow Rate: 50L/min #10279GRACE制備時(shí)通過ELSD控制餾分收集器，過濾UV無吸收化合物Column: Alltima C18, 5m, 150 x 10mm (P

30、art No. 81102)Mobile Phase: Water:Acetonitrile (55:45)Flow Rate: 5.0mL/minColumn Temp.: 25C1. Ethinamate (5.0mg/mL)#10438GRACEELSD對(duì)流動(dòng)相的組成改變不響應(yīng)，允許在極端梯度條件下的快速分離1.Ephedrine2.Acetylsalicylic acid3.Diphenhydramine4.Trimipramine Column:Alltech Alltima HP C18, 3m, 33 x 7.0mm (Part No. 87671)Mobile Phase: A

31、: 0.1% TFA in Water B: 0.1% TFA in Acetonitrile Gradient: Time:03%B:1090 Flow Rate:2.5mL/min Column Temp:30C #10451GRACE主要的應(yīng)用領(lǐng)域GRACEPharmaceuticals 藥物Non-chromophoric drugs 沒有發(fā)光團(tuán)的藥品Excipients 賦性劑Impurities 雜質(zhì)Amino acids氨基酸Aminoglycoside antibiotics 氨基糖甙類Nutraceuticals 天然產(chǎn)物Ginseng 人參Astragaloside IV

32、黃芪甲苷Ginkgolides 銀杏Glucosamine氨基葡萄糖Polymers/Surfactants聚合物/表面活性劑PEGs Polysorbate聚山梨酸酯Tween PVA聚乙烯醇GPECDimethiconeLipids 脂類Phospholipids磷脂Triglycerides 甘油三酸酯Fatty acids 脂肪酸Carbohydrates碳水化合物Simple sugars單糖Oligomers 寡糖Sugar alcohols糖醇2005版中國(guó)藥典中用ELSD檢測(cè)的藥品名稱 序號(hào)產(chǎn)品名稱檢測(cè)化合物色譜條件藥典頁(yè)碼1地膚子地膚子皂苷甲醇水冰醋酸=85:15:0.2一部

33、P812路路通路路通酸甲醇水冰醋酸=87:13:0.1一部P2053黃芪 黃芪甲苷 C18柱，乙腈：水=32：68 一部P212 4炙黃芪 黃芪甲苷C18柱，乙腈：水=32：68 一部P213 5銀杏葉 萜類內(nèi)酯 白果內(nèi)酯 C18柱，甲醇:四氫呋喃：水=25：10：65 一部P220 6銀杏葉提取物 萜類內(nèi)酯 白果內(nèi)酯C18柱， 正丙醇：四氫呋喃：水=1：15：84一部P282 7知母 拔契皂苷元 C18柱，甲醇：水=95：5 一部P1 48 8意苡仁 甘油三油酸酯 C18柱，乙腈：二氯甲烷=65：35 一部P260 9浙貝母 貝母素 C18柱，乙腈：水：二乙胺=70：30：0.3 一部P20

34、5 10乙肝寧顆粒黃芪甲苷甲醇水=75:25一部P29011玉屏風(fēng)口服液黃芪甲苷乙腈水=35:65一部P40912補(bǔ)中益氣丸（水丸）黃芪甲苷C18柱，乙腈：水=35：65 一部P48013銀杏葉片萜類內(nèi)酯 白果內(nèi)酯C18柱， 正丙醇：四氫呋喃：水=1：15：84一部P597GRACE2005版中國(guó)藥典中用ELSD檢測(cè)的藥品名稱 序號(hào)產(chǎn)品名稱檢測(cè)化合物色譜條件藥典頁(yè)碼13硫酸卡那霉素卡那霉素 C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=95：5 二部P724 14硫酸慶大霉素 慶大霉素 小諾霉素 C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=92：8二部P730 15硫酸依替米星 依替米星 奈

35、替米星 C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=84：16 二部P740 16硫酸小諾霉素 小諾霉素/慶大霉素C1a C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=94：6 二部P718GRACEELSD對(duì)氨基葡萄糖有比RI和UV更好的響應(yīng)Column: Prevail Carbohydrate ES, 5m, 150 x 4.6mm (Part No. 35102)Mobile Phase: Acetonitrile:Water (65:35) Flow Rate: 1.0mL/min1. Glucosamine (1mg/mL)# 10412# 10413# 10411GRACE使用

36、ELSD可以梯度洗脫完全分離多種磷脂,靈敏度高GRACE1. Cholesterol 膽固醇2. Palmitic acid 棕櫚酸3. Phosphatidylethanolamine 磷脂酰乙醇胺4. Phosphatidylserine 磷脂酰絲氨酸5. Phosphatidylcholine 卵磷脂6. Sphingomyelin 神經(jīng)鞘磷脂Column: Alltech Allsphere Silica, 3m, 100 x 4.6mm (Part No. 778382)Mobile Phase: A: IPA B: Hexane C: WaterGradient:Time:0715

37、%B:404040%C:288Flow Rate: 1.25mL/minELSD檢測(cè)糖醇-高靈敏度和穩(wěn)定的基線Column: Prevail Carbohydrate ES, 5m, 250 x 4.6mm (Part No. 35101)Mobile Phase: Acetonitrile:Water (70:30) Flow Rate: 1.0mL/min1. iso-Erythritol異赤藻糖醇2. Xylitol 木糖醇3. Mannitol甘露醇4. Maltitol麥芽糖醇# 9352糖醇GRACEELSD輕松檢測(cè)困難化合物-Tween 80GRACE5% Tween 80Col

38、umn: Alltech Alltima C18, 5m, 250 x 4.6mm (Part No. 88056)Mobile Phase: Water:Methanol (60:40)Flow Rate: 1.0mL/minELSD梯度洗脫分離玉米糖漿低聚糖GRACE 1. Dextrose 2. Maltose 3. Maltotriose 4. Maltotetraose 5. Maltopentaose 6. Maltohexaose 7. Maltoheptaose 8. Maltooctaose 9. Maltononaose10. Maltodecaose11. Maltoun

39、decaose12. Maltododecaose13. Maltotridecaose14. Maltotetradecaose15. MaltopentadecaoseColumn: Alltech Prevail Carbohydrates ES 300A, 5m, 250 x 4.6mm (Part No. 35101) Mobile Phase: A: Acetonitrile B: WaterGradient:Time:015%B:3550Flow Rate: 1.0mL/min無需衍生檢測(cè)橄欖油中的甘油三酯GRACE1. 1,2-Dilinoleyl-3-Oleyl-rac-gl

40、ycerol (LLO)2. 1,2-Dilinoleyl-3-Palmityl-rac-glycerol (LLP)3. 1,2-Dioleyl-3-linolein-rac-glycerol (OOL)4. 1-Palmityl-2-Olein-3-linolein-rac-glycerol (POL)5. 1,2-Dipalmityl-3-linolein-rac-glycerol (PPL)6. Triolein (OOO)7. 1,2-Dioleyl-3-palmityl-rac-glycerol (OOP)8. 1,2-Dipalmityl-3-oleyl-rac-glycerol

41、 (PPO)9. 1,2-Dioleyl-3-stearyl-rac-glycerol (OOS) Column: Alltech Alltima C18, 3m, 150 x 4.6mm (Part No. 91387)Mobile Phase: A: Dichloromethane B: AcetonitrileGradient:Time:0101820%B:70557070Flow Rate: 1.5mL/min脂肪和油一般含有特征性的甘油三酯,分析甘油三酯可以鑒定脂肪和油的品種.摻有植物油的橄欖油的鑒定分析GRACE1. LLL2. LLO3. LLP4. OOL5. POL6. OO

42、O7. OOP8. PPO9. OOSColumn:Alltima C18, 3m, 150 x 4.6mmMobile Phase:A: Dichloromethane B: AcetonitrileGradient:Time:010 18 20%B:7055 7070Flowrate:1.5mL/minDetector:ELSD 2000橄欖油含有大量的油酸甘油三酯,而不含亞麻酸甘油三酯.后者卻存在于菜油中,顯示于摻有菜油的橄欖油譜圖中.生物柴油(Biodiesel Poster)生產(chǎn)中的反應(yīng)和質(zhì)量監(jiān)控GRACE生物柴油是一種可再生、生物可降解和無毒燃料,它可以通過動(dòng)植物油的轉(zhuǎn)酯反應(yīng)來制備

43、.作為天然柴油的替代物.目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者廣泛采用的轉(zhuǎn)酯法,即三甘油酯在酸、堿或酶等催化劑作用下經(jīng)轉(zhuǎn)酯反應(yīng)制備生物柴油MAGs, DAGs和未反應(yīng)的TAGs會(huì)造成污染影響生物柴油的品質(zhì)GRACEBiodiesel Contaminated with Mono-, Di- and TriacylglycerolsUnreacted Tryacylglycerols (豆油Soy Oil) Column:Alltima HP C18-HL, 5m, 250 X 4.6mmMobile Phase: A: Acetonitrile B: DichloromethaneGradient:Time05303

44、235% B01570700Flow rate:1.0 ml/min氨基糖苷類抗生素的ELSD分析(中國(guó)藥典2005)Column: Apollo C18, 5m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: 0.2M Trifluoroacetic Acid:Methanol (94:6)Flow Rate: 0.6mL/min1. Sulfate2. Gentamicin C1a3. Gentamicin C24. Gentamicin C2b5. Gentamicin C2a6. Gentamicin C1# 10425慶大霉素 C組分 *中檢所抗生素室GRACE銀杏葉提出物中內(nèi)

45、酯含量的ELSD測(cè)定(中國(guó)藥典2005)銀杏葉提出物的內(nèi)酯類成份決定了其藥理作用，HPLC-RI法靈敏度與穩(wěn)定性均不理想；若采用紫外分析因?yàn)閮?nèi)酯類成份吸收差，最大吸收波長(zhǎng)在219nm，受試劑末端吸收影響很大。1. 銀杏苦內(nèi)酯C2. 白果內(nèi)酯3. 銀杏苦內(nèi)酯A4. 銀杏苦內(nèi)酯BGRACEColumn: Platinum C18, 5m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: H2O:MeOH:THF=75:20:10Flow Rate: 1.0mL/min黃芪中黃芪甲苷的ELSD分析(CHP2005)黃芪甲苷常作為指標(biāo)性成份用于黃芪藥材的質(zhì)量監(jiān)控，因?yàn)橹辉?20nm有弱的末端吸收，

46、過去未能使用HPLC法定量，ELSD有通用響應(yīng)，使用HPLC-ELSD法干擾少，分離度高.1. 黃芪甲苷GRACEColumn: Apollo C18, 5m, 250 x 4.6mm Mobile Phase: CAN:H2O= (32:68)Flow Rate: 1.0mL/min三七藥材及其制劑中三七皂苷R1,人參皂苷Rg1及Rb1的含量 GRACE圖 三七藥材及血塞通注射液HPLC色譜圖a.對(duì)照品b.三七藥材c.血塞通注射液 1.三七皂苷R1 2.人參皂苷Rg13. 人參皂苷Rb1Column: Alltech Alltima C18, 5m, 150 x 4.6mm Mobile P

47、hase: A: Water B: AcetonitrileGradient:Time:021%B:3060Flow Rate: 0.6 mL/minAlltech ELSD 2000ES光路和電子元件進(jìn)行更新布儒斯特角光阱,增加光阱尾吹30mW的激光光源光池涂四氟乙烯的抗腐蝕涂層降低背景噪音，比2000ELSD提高一個(gè)數(shù)量級(jí)的靈敏度GRACE關(guān)于布儒斯特角當(dāng)反射光線和折射光線的傳播方向互相垂直時(shí),入射光線的偏振角稱為布儒斯特角.當(dāng)透鏡只能通過垂直方向的偏振光時(shí),便可擋住部分散射的光線.自然光在兩種各向同性媒質(zhì)分界面上反射、折射時(shí)，反射光和折射光都是部分偏振光。反射光中垂直振動(dòng)多于平行振動(dòng)，折

48、射光中平行振動(dòng)多于垂直振動(dòng)。 GRACEELSD 2000ES性能更新靈敏度的挑戰(zhàn)一種措施是僅僅增加光強(qiáng)，但是同時(shí)會(huì)增加基線的噪音，導(dǎo)致LOD和信噪比沒有變化。ELSD 2000ES 克服這種障礙，專利設(shè)計(jì)的布儒斯特角光阱，當(dāng)光強(qiáng)增加時(shí)，信號(hào)的增強(qiáng)遠(yuǎn)大于噪音的增加。2000ES結(jié)合布儒斯特角光阱和30mW的光源為一體。GRACEELSD 2000ES靈敏度更新對(duì)相同的濃度的樣品有多于10倍的信噪比(S/N)增長(zhǎng)增強(qiáng)最小檢出限 (LOD)GRACE靈敏度比較 2000ES vs 20002000ES對(duì)相同量的氫化可的松增加靈敏度1. Hydrocortisone (100ng on column)Column: Alltima C18, 5m, 4.6 x 250mm (Part No. 88056)Mobile Phase: Water:Acetonitrile (55:45)Flow Rate:1.0mL/minGRACE靈敏度比較表 與其它品牌的ELSDGRACEAlltech 2000(ES)ELSD具有專利保護(hù)