知識(shí)總結(jié)：基因探針及其應(yīng)用

1、PAGE3基因探針及其應(yīng)用當(dāng)前人類(lèi)基因組研究方興未艾，許多基因的結(jié)構(gòu)、功能相繼得到闡明。人類(lèi)基因組有3109個(gè)堿基對(duì)，約有10萬(wàn)個(gè)基因在不停地工作，我們?cè)撊绾螐倪@龐大的基因組中找到自已感興趣的目的基因，尤其是單拷貝基因這里就需要用到核酸雜交技術(shù)。所謂核酸雜交，是根據(jù)堿基配對(duì)原理，以已知DNA片斷（基因片斷）作為探針與待測(cè)樣品DNA片斷進(jìn)行雜交，從而判斷兩者的一致性或同源性程度。其中，選擇、制備合適的基因探針至關(guān)重要。1基因探針的概念基因探針，即核酸探針，是一段帶有檢測(cè)標(biāo)記，且順序已知的，與目的基因互補(bǔ)的核酸序列（DNA或RNA）?；蛱结樛ㄟ^(guò)分子雜交與目的基因結(jié)合，產(chǎn)生雜交信號(hào)，能從浩翰的基因

2、組中把目的基因顯示出來(lái)。根據(jù)雜交原理，作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個(gè)條件：應(yīng)是單鏈，若為雙鏈，必須先行變性處理。應(yīng)帶有容易被檢測(cè)的標(biāo)記。探查不同的目的基因和不同種類(lèi)的基因缺陷，應(yīng)當(dāng)選擇使用不同種類(lèi)和長(zhǎng)度的探針。2基因探針的種類(lèi)總體上，基因探針可以分為人工合成的DNA探針和天然的克隆探針兩鐘。人工合成的DNA探針（主要是指寡核苷醚探針）用磷酸三酯法或亞磷酸三酯法等化學(xué)法人工合成，目前均由DNA合成儀合成。最常見(jiàn)的寡核苷酸探針長(zhǎng)度在1830個(gè)堿基之間。其特異性可以根據(jù)需要加以改變，以識(shí)別靶序列中單堿基變化。如果被測(cè)基因的序列已知，基因缺陷主要是點(diǎn)突變，可以人工合成一段與被測(cè)序列互補(bǔ)的寡苷酸

3、探針。通常是兩種寡核苷酸探針同時(shí)使用，一個(gè)與正常序列互補(bǔ)，一個(gè)與缺陷序列互補(bǔ)，通過(guò)分子雜交，將缺陷基因與正?；騾^(qū)別開(kāi)來(lái)。天然的克隆探針是對(duì)天然核酸序列進(jìn)行克隆得到，大致包括cDNA探針、基因組探針、RNA探針、內(nèi)含子序列探針和小衛(wèi)星DNA探針等。最常見(jiàn)的有三種：cDNA探針：經(jīng)典方法是先從細(xì)胞總RNA中分離出mRNA，再由逆轉(zhuǎn)錄途徑從mRNA合成cDNA，構(gòu)建cDNA文庫(kù)，并用適當(dāng)方法從文庫(kù)中篩選出所需的cDNA克隆。也可應(yīng)用2，這種驚人的密度大大提高了基因探針的檢測(cè)效率。由于基因芯片技術(shù)的迅速發(fā)展，將使基因探針的應(yīng)用更為廣泛?？梢灶A(yù)見(jiàn)，今后基因探針技術(shù)的發(fā)展必將日益突出地體現(xiàn)出“規(guī)?；?、“自動(dòng)化”、“程序化”、