分子免疫學(xué)-之-抗體的制備及應(yīng)用課件

分子免疫學(xué)_之_抗體的制備及應(yīng)用怎樣思想，就有怎樣的生活分子免疫學(xué)_之_抗體的制備及應(yīng)用分子免疫學(xué)_之_抗體的制備及應(yīng)用怎樣思想，就有怎樣的生活抗體的制備及應(yīng)用一、抗體的一些基本概念單克隆抗體(MonoclonalAntibody,McAb)單個B淋巴細(xì)胞克隆所分泌的抗體多克隆抗體(PolyclonalAntibody)多個B淋巴細(xì)胞克隆所分泌的抗體

一、通過轉(zhuǎn)變教育觀念提升學(xué)生的批判性思維在傳統(tǒng)的高中歷史教育觀念中，一直不能有效地突出學(xué)生的主體地位，都是講究教師權(quán)威、教材的唯一性，這不利于培養(yǎng)和提升學(xué)生的批判性思維。高中歷史教師必須要全面轉(zhuǎn)變自己的教育觀念，摒棄那種所謂歷史教科書是最權(quán)威、最精確的知識；教師的知識就是比學(xué)生多；教師的講話就是比學(xué)生重要；學(xué)生需要進(jìn)一步教化等思想。其實任何的知識只不過是對客觀世界的一種解釋，這并不是永恒的，也不是最終的答案和終極真理，而會隨著社會的發(fā)展和科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步被新的知識和新的理論所代替、所超越。由此可見，如果將教科書視作權(quán)威、視作真理，這是一種不正確的理念。以歷史教科書為例，其編寫者、審定者的指導(dǎo)思想以及世界觀、價值觀、個人知識、學(xué)術(shù)修養(yǎng)等諸多主觀因素，都會制約著歷史教材主流導(dǎo)向或者存在不同程度的片面性。但正是因為這個客觀存在的現(xiàn)實為深入開展批判性學(xué)習(xí)拓展了一定的空間，同時也使培養(yǎng)和提升學(xué)生的批判性思維成為不可或缺的教學(xué)任務(wù)。長期以來，在學(xué)生眼里歷史學(xué)科幾乎就是等同于一門記憶和背誦的學(xué)科，這主要是因為傳統(tǒng)的歷史課堂教學(xué)一直都在讓學(xué)生被動地接受歷史知識，而從來不鼓勵和引導(dǎo)學(xué)生主動積極地去探究歷史知識，從而使歷史教學(xué)只能成為一種記憶型教學(xué)，歷史學(xué)科也成為一門記憶型學(xué)科。其實這是一個誤解，同時也證明了在高中歷史教學(xué)中提升學(xué)生批判性思維的重要性。這就要求教師在歷史教學(xué)中不斷轉(zhuǎn)換教育理念，不僅要批判性地分析自己的思想與行為，還要引導(dǎo)學(xué)生批判性地分析自己，教師只有持有這樣的觀念進(jìn)行教學(xué)，才能不斷沖擊學(xué)生思維的局限，從而逐漸培養(yǎng)和提升學(xué)生的批判性思維，這也是學(xué)生提升自己、超越自己的重要渠道。二、通過鼓勵學(xué)生質(zhì)疑問難提升學(xué)生的批判性思維在歷史教學(xué)中要想提升學(xué)生的批判性思維，就要不斷鼓勵學(xué)生勇于質(zhì)疑問難、敢問敢想，敢于對權(quán)威提出質(zhì)疑，并能夠有自己的思維。歷史教師在教學(xué)中要通過鼓勵和激發(fā)的手段，不斷引導(dǎo)高中學(xué)生獨(dú)立思考，通過組織學(xué)生對歷史教材進(jìn)行閱讀、開展歷史基礎(chǔ)知識訓(xùn)練等手段，不斷引導(dǎo)學(xué)生主動積極地去思考、去分析，從而有效誘導(dǎo)學(xué)生以批判性思維來看待問題、思考問題。教師在教學(xué)實踐中，還要想方設(shè)法鼓勵學(xué)生能夠用不同的思維方式來思考，從而不斷突破常規(guī)去探根究底，尋求多種解決問題的辦法。在此過程中，學(xué)生的批判性思維就迸發(fā)了。教師應(yīng)該對學(xué)生的不同看法和不同見解都要尊重，樂于聽取學(xué)生不同的，哪怕是幼稚的意見。教師在教學(xué)中要多多引導(dǎo)那些有批判性思維潛質(zhì)的的學(xué)生，從而確保那些學(xué)生能夠起到以點(diǎn)帶面的作用，通過他們與別人不同的批判性思維來激發(fā)其他學(xué)生的批判性意識。在教學(xué)實踐中，教師要盡可能用熱情的鼓勵和比較恰當(dāng)?shù)脑u價，這樣就可以激發(fā)學(xué)生不斷地迸發(fā)更大的批判性意識，從而促進(jìn)學(xué)生發(fā)揮出更大的聰明才智，不斷另辟蹊徑，大膽地去標(biāo)新立異，大膽質(zhì)疑問難，逐漸培養(yǎng)他們多方面、多角度思考問題，解決問題的習(xí)慣。教師在教學(xué)過程中，也可以引用以下事例：如果沒有李四光對“中國貧油論”的懷疑就沒有大慶油田的發(fā)現(xiàn)；如果愛因斯坦沒有懷疑就不可能沖破牛頓的絕對時空觀，從而提出相對論等。從而不斷優(yōu)化學(xué)生的批判性思維品質(zhì)，真正將邏輯的理性與學(xué)生批判性激情有機(jī)結(jié)合起來。三、通過培育獨(dú)立人格提升學(xué)生的批判性思維教育的本質(zhì)就是對學(xué)生的人格進(jìn)行教育，從而提升學(xué)生的全面素質(zhì)。歷史教育是教育的重要組成部分，所以，歷史教育應(yīng)該注重培養(yǎng)學(xué)生的健全人格。學(xué)生的獨(dú)立人格就是指將學(xué)生作為個體有其自己獨(dú)立自主的地位。所以，要培育學(xué)生的批判性思維就是要破除學(xué)生對教科書、學(xué)者和教師的迷信，讓學(xué)生能夠積極、主動的進(jìn)行批判性思維。當(dāng)然，批判性思維不是為了批判而批判，更不是為了挑戰(zhàn)權(quán)威或個人出風(fēng)頭而批判，而是因為自己的經(jīng)驗和學(xué)識可以重新審視傳統(tǒng)的觀點(diǎn)是否有道理，是否能成立，是否有邏輯，從而能夠去不斷地去探尋真理，去發(fā)現(xiàn)真理，如此地批判性思維才有真正意義和真正價值。求真務(wù)實是歷史教學(xué)的第一位要素。培育學(xué)生的批判性思維需要教師在教學(xué)中不斷引導(dǎo)學(xué)生對事實進(jìn)行冷靜的邏輯分析和客觀的細(xì)致推理。比如：在以往的中學(xué)歷史教學(xué)中由于受傳統(tǒng)觀點(diǎn)的影響，一直都認(rèn)為在古代中國的君主專制是落后的、封建的。學(xué)生如果缺乏批判性思維，就必然對這種在歷史上存在過的政治體制少一種清醒的辨析，必然會導(dǎo)致學(xué)生對中國古代政治制度在認(rèn)識上存在偏頗，從而使中國的古代政治文明長期在學(xué)生的印象中是黑暗的、專制的、封建的、落后的。如何辯證看待中國的古代文明，這就要求學(xué)生具備獨(dú)立思考能力，也要具有獨(dú)立的人格，這樣才能為學(xué)生獨(dú)立思考提供內(nèi)驅(qū)力。教師在教學(xué)中，可以通過“開放型”作業(yè)，為學(xué)生的獨(dú)立思考拓展空間，著眼于幫助學(xué)生形成獨(dú)立的價值觀、學(xué)術(shù)觀，不斷促使高中學(xué)生更加關(guān)注歷史本來面目，從而在追求思想真理的道路上越走越遠(yuǎn)，真正完成從“自然的高中生”向“獨(dú)立的高中生”的華麗過渡。[在傳統(tǒng)的大學(xué)英語聽力課堂上，由于受應(yīng)試教育及英語四六級考試的影響，教師起主導(dǎo)作用，是課堂的管理者和知識的灌輸者。課堂上教師經(jīng)常使用的是“播放錄音一核對答案一重放錄音”這種教學(xué)模式。這種“三部曲”式的聽力模式單調(diào)乏味，無形中把聽力課堂轉(zhuǎn)變?yōu)槁犃y試課，從而導(dǎo)致課堂氣氛緊張、學(xué)生亦倍感壓力。這種聽力訓(xùn)練機(jī)械、被動，難以激發(fā)學(xué)生的興趣和注意力，長此以往，學(xué)生將喪失英語學(xué)習(xí)的主動性和積極性。上述這種單向、線性的聽力課堂模式弊端在于教師只重視聽力練習(xí)，缺乏和學(xué)生間的雙向互動及情感溝通，從而割裂了知識習(xí)得與情感交流間的內(nèi)在聯(lián)系，造成聽力課堂上師生關(guān)系不和諧。為改變這種傳統(tǒng)落后的聽力教學(xué)觀念，就要實施情感教學(xué)策略。情感教學(xué)是指在教學(xué)過程中，教師在認(rèn)知因素的基礎(chǔ)上，運(yùn)用一定的教學(xué)手段，通過語言、態(tài)度、行為等情感因素來激發(fā)、調(diào)動有利于學(xué)生學(xué)習(xí)的積極情感因素，增強(qiáng)學(xué)生學(xué)習(xí)的動機(jī)、自信心、主動性和目的性，促進(jìn)教學(xué)效果的積極化及教學(xué)效率的最大化，最終實現(xiàn)師生關(guān)系和諧發(fā)展，學(xué)生個性及素質(zhì)的提高。情感作為學(xué)生精神生活的主宰，是學(xué)生學(xué)習(xí)的催化劑。尤其在英語聽力課堂中，教師應(yīng)合理調(diào)節(jié)和利用情感，努力調(diào)動學(xué)生的非智力因素。心理學(xué)研究表明，要想聽懂某一聽力材料，除了具備相應(yīng)的專業(yè)知識，還須具備聽的動機(jī)、自然放松的心境、較好的記憶力及意志力。如果學(xué)生處于焦慮、緊張的心態(tài)就會分散注意力，從而嚴(yán)重干擾聽力理解，也就是語言輸入的“情感過濾”問題。所以，從這點(diǎn)出發(fā)，軍校英語教師要樹立“以生為本”的素質(zhì)教育理信念，激發(fā)學(xué)習(xí)動機(jī)、明確學(xué)習(xí)目的，強(qiáng)化學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)合作精神。軍校學(xué)生是個特殊的群體，他們具有學(xué)生和軍人雙重身份。與同齡大學(xué)生相比，他們具有明顯的三個特點(diǎn)：其一，接受正規(guī)化管理，具有嚴(yán)格的紀(jì)律要求，生活作息緊湊緊張；其二，生活空間相對固定，接觸外界的時間和精力非常有限；其三，思維不夠活躍，課堂氣氛緊張而活潑不足。上述三個特點(diǎn)的形成與軍校這個特定環(huán)境是密不可分的，首先，軍校學(xué)生除了上課，課余時間還要參加體能訓(xùn)練、接受思想政治教育、學(xué)習(xí)條令條例，因此自由支配的時間非常有限。除此之外，軍校更強(qiáng)調(diào)嚴(yán)格紀(jì)律的養(yǎng)成，學(xué)生接觸的人和事非常單一，因此學(xué)生認(rèn)知局限大、壓力大，心理容易產(chǎn)生疲倦，易受外界干擾而產(chǎn)生焦慮或情緒波動。所以，根據(jù)軍校學(xué)生生理、心理和認(rèn)知特征，從英語學(xué)科的特點(diǎn)出發(fā)，筆者認(rèn)為在英語聽力課堂上應(yīng)該從以下幾方面實施情感教學(xué)。（一）加強(qiáng)英語聽力策略訓(xùn)練，激發(fā)學(xué)生興趣受應(yīng)試教育影響，很多學(xué)生在高中階段沒有接受正規(guī)聽力訓(xùn)練，所以在大學(xué)英語聽力課堂上聽懂的非常有限，于是就會產(chǎn)生緊張焦慮感。所以教師首先通過向?qū)W生闡釋聽力的特點(diǎn)、過程及方法，加強(qiáng)對學(xué)生的聽力策略訓(xùn)練。任何活動的開展都以動機(jī)為前提，聽力活動的有效進(jìn)行同樣依賴于學(xué)生動機(jī)的激發(fā)。學(xué)習(xí)動機(jī)能維持學(xué)生的學(xué)習(xí)活動，從來源上動機(jī)可以分為兩類：內(nèi)在動機(jī)和外在動機(jī)。內(nèi)在動機(jī)直接與學(xué)習(xí)本身有關(guān)，由于學(xué)習(xí)活動本身能激發(fā)學(xué)生的濃厚興趣，學(xué)習(xí)活動本身就是他們所追求的目的。外在動機(jī)是由外部力量和外部環(huán)境（即誘因）激發(fā)而來，與活動沒有內(nèi)在聯(lián)系。在學(xué)校教育中，有多種多樣的外部條件，可以吸引、激勵學(xué)生，成為他們的動力源泉，如父母的鼓勵、教師的表揚(yáng)、競爭的獎勵等等。（二）合理設(shè)計評價激勵機(jī)制，激發(fā)學(xué)員參與性軍校學(xué)生接受正規(guī)化管理，尤其重視教師對自己的評價。教師的評價直接影響學(xué)生的成就感及參與課堂積極性。所以，教師要采取多種評價、激勵措施滿足學(xué)生的需求。但在現(xiàn)行教育體制下，語言評價更多的是依靠單一的終結(jié)性評價，尤其是依靠試卷，這種評價方式不能全面地評價學(xué)生的進(jìn)步，嚴(yán)重挫傷了學(xué)生學(xué)習(xí)語言的積極性，也對英語教學(xué)形成了負(fù)面影響。我國教育部制定的《大學(xué)英語課程教學(xué)要求》中明確提出教學(xué)評價分形成性評價和終結(jié)性評價兩種：形成性評價是基于對學(xué)生學(xué)習(xí)全過程的持續(xù)觀察、記錄、反思做出的一種全新發(fā)展性評價方式，其目的是培養(yǎng)學(xué)生對自己進(jìn)步過程的意識，使學(xué)生從被動接受評價轉(zhuǎn)變成評價的主體和積極參與者。因此，在聽力課堂中，教師不僅要重視終結(jié)性評價，更要重視學(xué)生在聽力課堂上的表現(xiàn)，跟蹤教學(xué)過程，如：學(xué)生主動發(fā)言、參與課堂小組活動等，更多地采取寬容、多元化的形成性評價方式，使學(xué)生逐漸養(yǎng)成主動獲取知識和反我反思的學(xué)習(xí)習(xí)慣。（三）采取分組等合作方式，科學(xué)設(shè)置各種集體活動軍校大學(xué)生由于受環(huán)境的制約，沒有地方大學(xué)生的鍛煉機(jī)會多，不利于聽力能力的提高，所以教師更要在聽力課堂上開展豐富多彩的活動促進(jìn)對聽力內(nèi)容的理解及吸收。聽力教學(xué)可以圍繞語言目標(biāo)，在學(xué)生對所聽材料有一定理解的基礎(chǔ)上、根據(jù)學(xué)生層次興趣有效組織多種課堂活動，如：雙人對話、小組討論、分角色表演、復(fù)述聽力內(nèi)容等。另外，課堂聽力活動可以結(jié)合網(wǎng)絡(luò)、多媒體等現(xiàn)代化教學(xué)手段，增加活動的趣味性。這些活動一方面能鼓勵學(xué)生參與其中，在真實的交際語境中達(dá)到培養(yǎng)語言交際能力的目的。在此過程中，學(xué)生也會把自身感情當(dāng)作評估自己的標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)感覺自己是群體中不可缺少的一員時，學(xué)生就會對自我價值產(chǎn)生認(rèn)可。另一方面，學(xué)生能通過這些合作活動消除聽力中的思想焦慮、促進(jìn)合作意識，提高合作能力，體驗集體榮譽(yù)感。而合作意識正是當(dāng)代大學(xué)生必備的基本素質(zhì)。當(dāng)然，教師作為聽力課堂活動的設(shè)計者，要充當(dāng)好組織者、鼓勵者和評價者的多重身份。（四）創(chuàng)設(shè)寬松、愉快、和諧的聽力課堂氣氛課堂不僅僅是教師教學(xué)、學(xué)生學(xué)習(xí)的地方交流，更是師生情感相互碰撞交融的地方。好的課堂氣氛是一種隱性教育，指各種教學(xué)要素和關(guān)系達(dá)到一種動態(tài)的平衡與和諧，它對學(xué)生的自主性學(xué)習(xí)具有巨大的潛在影響，因為在這種氛圍中，學(xué)生能輕松地獲取知識，減輕自身學(xué)習(xí)焦慮感，并能激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)英語的熱情，變“厭學(xué)”為“愿學(xué)”。為了達(dá)到良好的互動交際，教師首先要保證課堂內(nèi)外師生關(guān)系的平等，使學(xué)生在心理上覺得安全。鼓勵學(xué)生大膽提出問題，喚起他們的成功欲望；要盡量給焦慮感強(qiáng)的學(xué)生提供感受學(xué)習(xí)成就感的機(jī)會，增強(qiáng)他們的自信心，幫助其形成良好的自我形象及對教師的依賴。對學(xué)生的語言輸出錯誤要采取寬容的態(tài)度，并以委婉的態(tài)度引導(dǎo)他們自己發(fā)現(xiàn)并糾正錯誤，從而使不同層次水平的學(xué)生都能發(fā)揮自身的最大潛力。（五）教師要提高個人魅力及素養(yǎng)，調(diào)控教員自身的情緒狀態(tài)教師除了要關(guān)注學(xué)員心理狀態(tài)，在聽力課堂上自身也要善于表達(dá)積極情感，用信任的目光、贊許的微笑、和藹的語言，多給學(xué)生動口的機(jī)會，盡力做到對學(xué)生不指責(zé)、不呵斥、不急躁，多給予熱情鼓勵和引導(dǎo)，讓他們在語言實踐中主動發(fā)現(xiàn)問題、解決問題。從而表達(dá)出對學(xué)生的關(guān)心和愛護(hù)，消除師生之間的情感障礙，滿足學(xué)生的情意需求。另一方面，在日常生活中要不斷地與學(xué)生進(jìn)行情感交流，以求進(jìn)一步融洽師生感情。教師應(yīng)把對學(xué)生的愛化為一個溫柔的眼神、一個會意的微笑、一句暖心的話語、一個贊許的姿態(tài)、一個體貼入微的動作，公平公正地對待學(xué)生。對他們的點(diǎn)滴進(jìn)步都給以鼓勵，這樣會使學(xué)生感覺到教師的關(guān)心、賞識和可敬，心理上就會產(chǎn)生一種說不出的愉悅與滿足，激發(fā)他們的求知欲，鼓起他們英語聽力的自信。這樣，學(xué)生就會“親其師而信其道”，更加熱愛學(xué)習(xí)?？傊楦胁呗栽诖髮W(xué)英語聽力實踐中的積極作用是不容忽視的。軍校大學(xué)英語教師應(yīng)該關(guān)注學(xué)生在聽力學(xué)習(xí)過程中的各種聽力需求，通過有效的教學(xué)策略，培養(yǎng)他們的學(xué)習(xí)動機(jī)、學(xué)習(xí)興趣。教師一定要結(jié)合實際情況，樹立正確的人文教育觀念，積極調(diào)動學(xué)生的人格因素，有效地利用現(xiàn)用的教學(xué)資源，努力幫助學(xué)生營造和諧、輕松、自然地學(xué)習(xí)氛圍。分子免疫學(xué)_之_抗體的制備及應(yīng)用怎樣思想，就有怎樣的生活分子1抗體的制備及應(yīng)用抗體的制備及應(yīng)用2一、抗體的一些基本概念單克隆抗體

(MonoclonalAntibody,McAb)單個B淋巴細(xì)胞克隆所分泌的抗體多克隆抗體

(PolyclonalAntibody)多個B淋巴細(xì)胞克隆所分泌的抗體

一、抗體的一些基本概念單克隆抗體3抗原（antigen，Ag）表位，抗原結(jié)合位點(diǎn)，抗原決定簇（epitope）Ag1234抗原（antigen，Ag）表位，抗原結(jié)合位點(diǎn)，抗原決定簇4Ag

單克隆抗體

B1B2B3B4B3B3B3B32

多克隆抗體341Ag單克51、單克隆抗體的特點(diǎn)特異性強(qiáng)，具有抗原結(jié)合位點(diǎn)的專一性。（不是抗原的專一性?。┮蚪Y(jié)合位點(diǎn)的單一性，有時不易捕捉抗原，一株單克隆抗體與抗原不易產(chǎn)生凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng)。

抗體的性質(zhì)相同，容易純化、標(biāo)記。1、單克隆抗體的特點(diǎn)特異性強(qiáng)，具有抗原結(jié)合位點(diǎn)的專一性。（不6腦垂體分泌的一些激素：hFSH促卵泡激素hLH促黃體生成素hTSH促甲狀腺激素hCG#絨毛膜促性腺激素βαβαα

β

βα腦垂體分泌的一些激素：hFSH促卵泡激素βαβααβ7

單克隆抗體有交叉反應(yīng)是由于不同的抗原上有完全相同的表位（100%的交叉反應(yīng)）,或有相似的表位（不同程度的交叉反應(yīng)）。單克隆抗體有交叉反應(yīng)是由于不同的抗原上有8產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理113323221111112232322113產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理1133232211111122323229購買抗體時要注意廠商的標(biāo)注適合于做什么實驗,使用濃度多少WB（Westernblotting，免疫印跡)IH(Immunohistochemistry,免疫組織化學(xué))IC(Immunocytochemistry,免疫細(xì)胞化學(xué))IEM(Immunelectronmicroscopy,免疫電鏡)FCM(FlowCytometry,流式細(xì)胞儀)ELISA(enzymelinkedimmunosorbentassey,酶聯(lián)免疫吸附實驗,酶聯(lián)免疫分析)購買抗體時要注意廠商的標(biāo)注適合于做什么實驗,使用濃度多少102、多克隆抗體的特點(diǎn)

多抗是單抗的混合物，因此多抗的性質(zhì)是一個群體綜合的性質(zhì)。特異性一般比單抗差因為由不同性質(zhì)的抗體組成，只要其中含交叉反應(yīng)的抗體，多抗就有交叉反應(yīng)，所以多抗更容易有交叉反應(yīng)。2、多克隆抗體的特點(diǎn)多抗是單抗的混合物，因此多抗的性質(zhì)11

比單抗更容易捕捉抗原。

因為含有抗不同表位的抗體，多種抗

體都可與抗原結(jié)合。

抗體的純化、標(biāo)記比單抗難因為含有各種不同類型、亞類的抗體，提純、標(biāo)記的方法有所差別。同時,血清中含有的雜蛋白比較多.比單抗更容易捕捉抗原。

因為含有抗不同表位的抗體，多12二、抗體的制備1、單克隆抗體的制備無法采用生物化學(xué)的方法從多抗中分離必須采用細(xì)胞雜交的方法來制備能否篩選到理想的單克隆抗體有技術(shù)問題也有機(jī)遇問題

二、抗體的制備1、單克隆抗體的制備13制備單克隆抗體的基本原理：

致敏的B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞（myeloma）

（能夠分泌特異性的抗體，（不能分泌特異性的抗體，不能在體外長期生存）但能在體外長期生存）

陽性雜交瘤細(xì)胞(hybridoma)

（既能分泌特異性抗體，又能夠在體外長期生存）克隆化培養(yǎng)

（產(chǎn)生單克隆的陽性雜交瘤細(xì)胞）生產(chǎn)單克隆抗體

1222212制備單克隆抗體的基本原理：1222212142、多抗的制備常用的免疫動物免疫的基本步驟如何免疫兔子2、多抗的制備151）常用的免疫動物兔子（rabbit）：最常用于自制抗體，抗體量較多。（新西蘭,大耳白）小鼠（mouse）：可用于自制抗體，但抗體量很少。（BALB/C,昆明鼠）大鼠（rat）：可用于自制抗體，免疫過程要麻醉動物。（Wistar大鼠）1）常用的免疫動物兔子（rabbit）：最常用于自制抗體，16羊（sheep、goat）：常用于較大批量地生產(chǎn)抗體（商品）。馬（horse）：常用于大批量生產(chǎn)治療用抗體（商品）。豚鼠（guineapig）：國外實驗室常用。羊（sheep、goat）：常用于較大批量地172）免疫的基本步驟基礎(chǔ)免疫：首次，抗原用量大，用佛式完全佐劑（ComplateFreund’adjuvand,含礦物油,卡介苗等).加強(qiáng)免疫：第2次以后，抗原量減半，多次，間隔2-4周，用佛式不完全佐劑(IncomplateFreund’adjuvand,不含卡介苗).2）免疫的基本步驟基礎(chǔ)免疫：首次，抗原用量大，用佛式完全18取血測效價：加強(qiáng)免疫兩次或三次以后的第7天取血。放血制備血清：最后一次免疫后7-10天放血。(在三角瓶中加一些生理鹽水，放血放置一段時間，凝固，吸取血清，離心，分裝，凍存)取血測效價：193)如何免疫兔子2000g(雌雄均可),健康,無病原（小鼠20g，大鼠200g）基礎(chǔ)免疫0.5ml抗原(含0.25~0.5mg蛋白或108顆?？乖?0.5ml佛式完全佐劑(CFA)（小鼠0.2ml）制備抗原-佐劑乳化液背部、頸部皮下多點(diǎn)注射或腿部肌肉注射（注意：不要剪毛）3)如何免疫兔子2000g(雌雄均可),健康,無病原（小鼠20加強(qiáng)免疫間隔2-4周,可進(jìn)行多次0.5ml抗原(蛋白量減半)0.5ml佛式不完全佐劑(IFA)制備抗原-佐劑乳化液背部、頸部皮下多點(diǎn)注射或腿部肌肉注射加強(qiáng)免疫21免疫3~4次以后從耳靜脈取血檢測效價酶聯(lián)法：1:104以上，能達(dá)到1:106。免疫雙擴(kuò)散：1:16以上，能達(dá)到1:64效價達(dá)到要求的可放血制備血清可一次放血(頸動脈)也可多次取血(耳靜脈)

免疫3~4次以后從耳靜脈取血檢測效價22單抗與多抗的區(qū)別

單抗多抗抗體組成單一復(fù)雜

抗體性質(zhì)個體的屬性群體綜合的性質(zhì)純化標(biāo)記容易，效果好難度高一些種屬來源絕大多數(shù)是小鼠兔子、羊、豚鼠等制備周期長(最短4個月）短（2個月）制備技術(shù)復(fù)雜簡單經(jīng)費(fèi)多少單抗與多抗的區(qū)別23什么情況需要制備單抗目的蛋白有結(jié)構(gòu)類似物抗原不純，無法分開多抗效果不好（已排除非特異性反應(yīng)）希望將抗體用于治療，研制成藥品希望將抗體用于診斷，研制成診斷試劑什么情況需要制備單抗目的蛋白有結(jié)構(gòu)類似物24三、抗體的純化鹽析法（硫酸銨沉淀)辛酸-硫酸銨沉淀法離子交換法親和層析法凝膠過濾法三、抗體的純化鹽析法（硫酸銨沉淀)251、鹽析法（硫酸銨沉淀)原理在高濃度中性鹽存在下,蛋白質(zhì)在水中的溶解度降低而產(chǎn)生沉淀硫酸銨是最常用的中性鹽不同蛋白質(zhì)的鹽析常數(shù)不同硫酸銨的加入量通常以飽和度表示(100%飽和度:767g/L)1、鹽析法（硫酸銨沉淀)原理26主要步驟在血清或腹水中加入硫酸銨使抗體沉淀；4℃高速離心,棄上清,溶解沉淀；

可反復(fù)操作,逐級降低硫酸銨的濃度:50%飽和度:0.313g/ml45%飽和度:0.277g/ml40%飽和度:0.243g/ml最后一次離心后,用少量PBS溶解沉淀,透析，測定濃度。主要步驟27特點(diǎn)成本低，步驟簡單。抗體的回收率比較高。抗體純度比較低，電泳后可見到明顯的雜帶,不適合于做各種標(biāo)記。需要高速離心機(jī)。特點(diǎn)282、正辛酸-硫酸銨沉淀法原理兩步沉淀：先加正辛酸去雜蛋白.正辛酸是一種有機(jī)酸,在酸性條件下(pH4.5)可使大分子的雜蛋白沉淀.后加硫酸銨使抗體沉淀.2、正辛酸-硫酸銨沉淀法原理29主要步驟：調(diào)節(jié)樣品的pH值,加入正辛酸(25ul/ml),攪拌30分；。室溫高速離心(10000g，30分鐘),收集上清液；再加入硫酸銨（40%飽和度）；4℃高速離心(10000g，15分鐘),棄上清；溶解沉淀，透析，測定濃度。主要步驟：30特點(diǎn)成本較低，步驟較復(fù)雜?？贵w回收率很低。抗體純度高，電泳后雜帶很少，適合于各種標(biāo)記。需要高速離心機(jī)，耐高速離心的玻璃離心管。特點(diǎn)313、離子交換法原理利用溶液中各種帶電粒子與離子交換劑之間結(jié)合力的差異進(jìn)行物質(zhì)分離.DEAE是一種陰離子交換劑，自身帶正電荷(Diethylaminoethyl,二乙氨基乙基)將樣品的pH值調(diào)至等電點(diǎn)以上,使樣品帶負(fù)電荷.采用鹽溶液洗脫,通過高濃度的帶同種電荷的離子(Cl-)置換被分離的組分.

3、離子交換法原理32+++++--------

帶負(fù)電荷的被吸附上帶負(fù)電荷少的先被置換帶負(fù)電荷多的后被置換+++++帶負(fù)電荷帶負(fù)電荷少帶負(fù)電荷多33

NaClTris

梯度混合儀

連續(xù)梯度洗脫:NaClTris連續(xù)梯度洗脫:34

階段洗脫:T離子強(qiáng)度蛋白濃度T倒入一定濃度的NaCl溶液通過離心來分離階段洗脫:T離子強(qiáng)度蛋白濃度T倒入一定濃度的Na35主要步驟

先用硫酸銨沉淀抗體，粗提；將樣品過柱；洗去沒有結(jié)合的物質(zhì)；用梯度NaCl溶液洗脫，等量收集洗脫液；紫外分光光度計測量，保留A280值明顯升高的樣品；匯集樣品，濃縮，測定濃度。主要步驟36特點(diǎn)成本較低，步驟較簡單。抗體回收率較高。抗體純度較高，電泳后可見少量雜帶，適合于各種標(biāo)記。純化后抗體體積大，需要濃縮。需要冷柜，自動收集器。特點(diǎn)374、親和層析法原理利用蛋白質(zhì)之間的特異性結(jié)合（抗體-抗原，受體-配體）將一種配基與凝膠顆粒結(jié)合,捕捉與它相配的物質(zhì)。洗脫一般采用改變pH值的方法4、親和層析法原理38使用前樣品結(jié)合(Binding)洗脫(Elution)使用前樣品結(jié)合(Binding)洗脫(Elution)39主要步驟

將ProteinA與活化的柱子相結(jié)合(買商品柱)；將腹水或血清處理后過柱；用結(jié)合緩沖液洗柱子，直到A280值為零；用甘氨酸緩沖液洗脫抗體，等量收集洗脫液；測定洗脫液的A280值，保留A280值明顯升高的樣品；匯集樣品，濃縮，測定濃度。主要步驟40葡萄球菌A蛋白(staphylococcalproteinA,SPA)金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁上的一種蛋白分子量42000,等電點(diǎn)pH5.1可與大多數(shù)動物Ig的Fc段結(jié)合一個SPA分子有4個相似的活性部位與IgG的結(jié)合最強(qiáng),與IgM,IgA的結(jié)合較差

葡萄球菌A蛋白41特點(diǎn)成本高，步驟較簡單?？贵w回收率低。抗體純度高，適合于各種標(biāo)記。純化后抗體體積大，需要濃縮。需要自動收集器。特點(diǎn)425、凝膠過濾法(分子篩)原理將樣品混合物通過一定孔徑的凝膠介質(zhì),由于流經(jīng)路徑的差異,使不同分子質(zhì)量的組分分離.大分子物質(zhì)直接從凝膠顆粒外通過，走得快；小分子物質(zhì)進(jìn)入凝膠顆粒的內(nèi)部再出來，走得慢。適合于IgM類抗體的純化

(五聚體,分子量約800KD)5、凝膠過濾法(分子篩)原理43分子免疫學(xué)_之_抗體的制備及應(yīng)用課件44主要步驟將腹水或血清處理后上柱,樣品要濃；(可用G-200，柱子要長，80-100cm)待樣品入柱后,用緩沖液過柱；等量收集洗脫液,測定洗脫液的A280值。收集第一峰。主要步驟45特點(diǎn)成本高，步驟較簡單?？贵w回收率較高，分離條件緩和，抗體活性不受影響。抗體純度較高。需要自動收集器。特點(diǎn)4641、學(xué)問是異常珍貴的東西，從任何源泉吸收都不可恥?！⒉贰と铡しɡ?/p>

42、只有在人群中間，才能認(rèn)識自己?！聡?/p>

43、重復(fù)別人所說的話，只需要教育；而要挑戰(zhàn)別人所說的話，則需要頭腦?！旣悺づ宓俨┒鳌て諣?/p>

44、卓越的人一大優(yōu)點(diǎn)是：在不利與艱難的遭遇里百折不饒。——貝多芬

45、自己的飯量自己知道?！K聯(lián)41、學(xué)問是異常珍貴的東西，從任何源泉吸收都不可恥?！⒉?7分子免疫學(xué)_之_抗體的制備及應(yīng)用怎樣思想，就有怎樣的生活分子免疫學(xué)_之_抗體的制備及應(yīng)用分子免疫學(xué)_之_抗體的制備及應(yīng)用怎樣思想，就有怎樣的生活抗體的制備及應(yīng)用一、抗體的一些基本概念單克隆抗體(MonoclonalAntibody,McAb)單個B淋巴細(xì)胞克隆所分泌的抗體多克隆抗體(PolyclonalAntibody)多個B淋巴細(xì)胞克隆所分泌的抗體

一、通過轉(zhuǎn)變教育觀念提升學(xué)生的批判性思維在傳統(tǒng)的高中歷史教育觀念中，一直不能有效地突出學(xué)生的主體地位，都是講究教師權(quán)威、教材的唯一性，這不利于培養(yǎng)和提升學(xué)生的批判性思維。高中歷史教師必須要全面轉(zhuǎn)變自己的教育觀念，摒棄那種所謂歷史教科書是最權(quán)威、最精確的知識；教師的知識就是比學(xué)生多；教師的講話就是比學(xué)生重要；學(xué)生需要進(jìn)一步教化等思想。其實任何的知識只不過是對客觀世界的一種解釋，這并不是永恒的，也不是最終的答案和終極真理，而會隨著社會的發(fā)展和科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步被新的知識和新的理論所代替、所超越。由此可見，如果將教科書視作權(quán)威、視作真理，這是一種不正確的理念。以歷史教科書為例，其編寫者、審定者的指導(dǎo)思想以及世界觀、價值觀、個人知識、學(xué)術(shù)修養(yǎng)等諸多主觀因素，都會制約著歷史教材主流導(dǎo)向或者存在不同程度的片面性。但正是因為這個客觀存在的現(xiàn)實為深入開展批判性學(xué)習(xí)拓展了一定的空間，同時也使培養(yǎng)和提升學(xué)生的批判性思維成為不可或缺的教學(xué)任務(wù)。長期以來，在學(xué)生眼里歷史學(xué)科幾乎就是等同于一門記憶和背誦的學(xué)科，這主要是因為傳統(tǒng)的歷史課堂教學(xué)一直都在讓學(xué)生被動地接受歷史知識，而從來不鼓勵和引導(dǎo)學(xué)生主動積極地去探究歷史知識，從而使歷史教學(xué)只能成為一種記憶型教學(xué)，歷史學(xué)科也成為一門記憶型學(xué)科。其實這是一個誤解，同時也證明了在高中歷史教學(xué)中提升學(xué)生批判性思維的重要性。這就要求教師在歷史教學(xué)中不斷轉(zhuǎn)換教育理念，不僅要批判性地分析自己的思想與行為，還要引導(dǎo)學(xué)生批判性地分析自己，教師只有持有這樣的觀念進(jìn)行教學(xué)，才能不斷沖擊學(xué)生思維的局限，從而逐漸培養(yǎng)和提升學(xué)生的批判性思維，這也是學(xué)生提升自己、超越自己的重要渠道。二、通過鼓勵學(xué)生質(zhì)疑問難提升學(xué)生的批判性思維在歷史教學(xué)中要想提升學(xué)生的批判性思維，就要不斷鼓勵學(xué)生勇于質(zhì)疑問難、敢問敢想，敢于對權(quán)威提出質(zhì)疑，并能夠有自己的思維。歷史教師在教學(xué)中要通過鼓勵和激發(fā)的手段，不斷引導(dǎo)高中學(xué)生獨(dú)立思考，通過組織學(xué)生對歷史教材進(jìn)行閱讀、開展歷史基礎(chǔ)知識訓(xùn)練等手段，不斷引導(dǎo)學(xué)生主動積極地去思考、去分析，從而有效誘導(dǎo)學(xué)生以批判性思維來看待問題、思考問題。教師在教學(xué)實踐中，還要想方設(shè)法鼓勵學(xué)生能夠用不同的思維方式來思考，從而不斷突破常規(guī)去探根究底，尋求多種解決問題的辦法。在此過程中，學(xué)生的批判性思維就迸發(fā)了。教師應(yīng)該對學(xué)生的不同看法和不同見解都要尊重，樂于聽取學(xué)生不同的，哪怕是幼稚的意見。教師在教學(xué)中要多多引導(dǎo)那些有批判性思維潛質(zhì)的的學(xué)生，從而確保那些學(xué)生能夠起到以點(diǎn)帶面的作用，通過他們與別人不同的批判性思維來激發(fā)其他學(xué)生的批判性意識。在教學(xué)實踐中，教師要盡可能用熱情的鼓勵和比較恰當(dāng)?shù)脑u價，這樣就可以激發(fā)學(xué)生不斷地迸發(fā)更大的批判性意識，從而促進(jìn)學(xué)生發(fā)揮出更大的聰明才智，不斷另辟蹊徑，大膽地去標(biāo)新立異，大膽質(zhì)疑問難，逐漸培養(yǎng)他們多方面、多角度思考問題，解決問題的習(xí)慣。教師在教學(xué)過程中，也可以引用以下事例：如果沒有李四光對“中國貧油論”的懷疑就沒有大慶油田的發(fā)現(xiàn)；如果愛因斯坦沒有懷疑就不可能沖破牛頓的絕對時空觀，從而提出相對論等。從而不斷優(yōu)化學(xué)生的批判性思維品質(zhì)，真正將邏輯的理性與學(xué)生批判性激情有機(jī)結(jié)合起來。三、通過培育獨(dú)立人格提升學(xué)生的批判性思維教育的本質(zhì)就是對學(xué)生的人格進(jìn)行教育，從而提升學(xué)生的全面素質(zhì)。歷史教育是教育的重要組成部分，所以，歷史教育應(yīng)該注重培養(yǎng)學(xué)生的健全人格。學(xué)生的獨(dú)立人格就是指將學(xué)生作為個體有其自己獨(dú)立自主的地位。所以，要培育學(xué)生的批判性思維就是要破除學(xué)生對教科書、學(xué)者和教師的迷信，讓學(xué)生能夠積極、主動的進(jìn)行批判性思維。當(dāng)然，批判性思維不是為了批判而批判，更不是為了挑戰(zhàn)權(quán)威或個人出風(fēng)頭而批判，而是因為自己的經(jīng)驗和學(xué)識可以重新審視傳統(tǒng)的觀點(diǎn)是否有道理，是否能成立，是否有邏輯，從而能夠去不斷地去探尋真理，去發(fā)現(xiàn)真理，如此地批判性思維才有真正意義和真正價值。求真務(wù)實是歷史教學(xué)的第一位要素。培育學(xué)生的批判性思維需要教師在教學(xué)中不斷引導(dǎo)學(xué)生對事實進(jìn)行冷靜的邏輯分析和客觀的細(xì)致推理。比如：在以往的中學(xué)歷史教學(xué)中由于受傳統(tǒng)觀點(diǎn)的影響，一直都認(rèn)為在古代中國的君主專制是落后的、封建的。學(xué)生如果缺乏批判性思維，就必然對這種在歷史上存在過的政治體制少一種清醒的辨析，必然會導(dǎo)致學(xué)生對中國古代政治制度在認(rèn)識上存在偏頗，從而使中國的古代政治文明長期在學(xué)生的印象中是黑暗的、專制的、封建的、落后的。如何辯證看待中國的古代文明，這就要求學(xué)生具備獨(dú)立思考能力，也要具有獨(dú)立的人格，這樣才能為學(xué)生獨(dú)立思考提供內(nèi)驅(qū)力。教師在教學(xué)中，可以通過“開放型”作業(yè)，為學(xué)生的獨(dú)立思考拓展空間，著眼于幫助學(xué)生形成獨(dú)立的價值觀、學(xué)術(shù)觀，不斷促使高中學(xué)生更加關(guān)注歷史本來面目，從而在追求思想真理的道路上越走越遠(yuǎn)，真正完成從“自然的高中生”向“獨(dú)立的高中生”的華麗過渡。[在傳統(tǒng)的大學(xué)英語聽力課堂上，由于受應(yīng)試教育及英語四六級考試的影響，教師起主導(dǎo)作用，是課堂的管理者和知識的灌輸者。課堂上教師經(jīng)常使用的是“播放錄音一核對答案一重放錄音”這種教學(xué)模式。這種“三部曲”式的聽力模式單調(diào)乏味，無形中把聽力課堂轉(zhuǎn)變?yōu)槁犃y試課，從而導(dǎo)致課堂氣氛緊張、學(xué)生亦倍感壓力。這種聽力訓(xùn)練機(jī)械、被動，難以激發(fā)學(xué)生的興趣和注意力，長此以往，學(xué)生將喪失英語學(xué)習(xí)的主動性和積極性。上述這種單向、線性的聽力課堂模式弊端在于教師只重視聽力練習(xí)，缺乏和學(xué)生間的雙向互動及情感溝通，從而割裂了知識習(xí)得與情感交流間的內(nèi)在聯(lián)系，造成聽力課堂上師生關(guān)系不和諧。為改變這種傳統(tǒng)落后的聽力教學(xué)觀念，就要實施情感教學(xué)策略。情感教學(xué)是指在教學(xué)過程中，教師在認(rèn)知因素的基礎(chǔ)上，運(yùn)用一定的教學(xué)手段，通過語言、態(tài)度、行為等情感因素來激發(fā)、調(diào)動有利于學(xué)生學(xué)習(xí)的積極情感因素，增強(qiáng)學(xué)生學(xué)習(xí)的動機(jī)、自信心、主動性和目的性，促進(jìn)教學(xué)效果的積極化及教學(xué)效率的最大化，最終實現(xiàn)師生關(guān)系和諧發(fā)展，學(xué)生個性及素質(zhì)的提高。情感作為學(xué)生精神生活的主宰，是學(xué)生學(xué)習(xí)的催化劑。尤其在英語聽力課堂中，教師應(yīng)合理調(diào)節(jié)和利用情感，努力調(diào)動學(xué)生的非智力因素。心理學(xué)研究表明，要想聽懂某一聽力材料，除了具備相應(yīng)的專業(yè)知識，還須具備聽的動機(jī)、自然放松的心境、較好的記憶力及意志力。如果學(xué)生處于焦慮、緊張的心態(tài)就會分散注意力，從而嚴(yán)重干擾聽力理解，也就是語言輸入的“情感過濾”問題。所以，從這點(diǎn)出發(fā)，軍校英語教師要樹立“以生為本”的素質(zhì)教育理信念，激發(fā)學(xué)習(xí)動機(jī)、明確學(xué)習(xí)目的，強(qiáng)化學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)合作精神。軍校學(xué)生是個特殊的群體，他們具有學(xué)生和軍人雙重身份。與同齡大學(xué)生相比，他們具有明顯的三個特點(diǎn)：其一，接受正規(guī)化管理，具有嚴(yán)格的紀(jì)律要求，生活作息緊湊緊張；其二，生活空間相對固定，接觸外界的時間和精力非常有限；其三，思維不夠活躍，課堂氣氛緊張而活潑不足。上述三個特點(diǎn)的形成與軍校這個特定環(huán)境是密不可分的，首先，軍校學(xué)生除了上課，課余時間還要參加體能訓(xùn)練、接受思想政治教育、學(xué)習(xí)條令條例，因此自由支配的時間非常有限。除此之外，軍校更強(qiáng)調(diào)嚴(yán)格紀(jì)律的養(yǎng)成，學(xué)生接觸的人和事非常單一，因此學(xué)生認(rèn)知局限大、壓力大，心理容易產(chǎn)生疲倦，易受外界干擾而產(chǎn)生焦慮或情緒波動。所以，根據(jù)軍校學(xué)生生理、心理和認(rèn)知特征，從英語學(xué)科的特點(diǎn)出發(fā)，筆者認(rèn)為在英語聽力課堂上應(yīng)該從以下幾方面實施情感教學(xué)。（一）加強(qiáng)英語聽力策略訓(xùn)練，激發(fā)學(xué)生興趣受應(yīng)試教育影響，很多學(xué)生在高中階段沒有接受正規(guī)聽力訓(xùn)練，所以在大學(xué)英語聽力課堂上聽懂的非常有限，于是就會產(chǎn)生緊張焦慮感。所以教師首先通過向?qū)W生闡釋聽力的特點(diǎn)、過程及方法，加強(qiáng)對學(xué)生的聽力策略訓(xùn)練。任何活動的開展都以動機(jī)為前提，聽力活動的有效進(jìn)行同樣依賴于學(xué)生動機(jī)的激發(fā)。學(xué)習(xí)動機(jī)能維持學(xué)生的學(xué)習(xí)活動，從來源上動機(jī)可以分為兩類：內(nèi)在動機(jī)和外在動機(jī)。內(nèi)在動機(jī)直接與學(xué)習(xí)本身有關(guān)，由于學(xué)習(xí)活動本身能激發(fā)學(xué)生的濃厚興趣，學(xué)習(xí)活動本身就是他們所追求的目的。外在動機(jī)是由外部力量和外部環(huán)境（即誘因）激發(fā)而來，與活動沒有內(nèi)在聯(lián)系。在學(xué)校教育中，有多種多樣的外部條件，可以吸引、激勵學(xué)生，成為他們的動力源泉，如父母的鼓勵、教師的表揚(yáng)、競爭的獎勵等等。（二）合理設(shè)計評價激勵機(jī)制，激發(fā)學(xué)員參與性軍校學(xué)生接受正規(guī)化管理，尤其重視教師對自己的評價。教師的評價直接影響學(xué)生的成就感及參與課堂積極性。所以，教師要采取多種評價、激勵措施滿足學(xué)生的需求。但在現(xiàn)行教育體制下，語言評價更多的是依靠單一的終結(jié)性評價，尤其是依靠試卷，這種評價方式不能全面地評價學(xué)生的進(jìn)步，嚴(yán)重挫傷了學(xué)生學(xué)習(xí)語言的積極性，也對英語教學(xué)形成了負(fù)面影響。我國教育部制定的《大學(xué)英語課程教學(xué)要求》中明確提出教學(xué)評價分形成性評價和終結(jié)性評價兩種：形成性評價是基于對學(xué)生學(xué)習(xí)全過程的持續(xù)觀察、記錄、反思做出的一種全新發(fā)展性評價方式，其目的是培養(yǎng)學(xué)生對自己進(jìn)步過程的意識，使學(xué)生從被動接受評價轉(zhuǎn)變成評價的主體和積極參與者。因此，在聽力課堂中，教師不僅要重視終結(jié)性評價，更要重視學(xué)生在聽力課堂上的表現(xiàn)，跟蹤教學(xué)過程，如：學(xué)生主動發(fā)言、參與課堂小組活動等，更多地采取寬容、多元化的形成性評價方式，使學(xué)生逐漸養(yǎng)成主動獲取知識和反我反思的學(xué)習(xí)習(xí)慣。（三）采取分組等合作方式，科學(xué)設(shè)置各種集體活動軍校大學(xué)生由于受環(huán)境的制約，沒有地方大學(xué)生的鍛煉機(jī)會多，不利于聽力能力的提高，所以教師更要在聽力課堂上開展豐富多彩的活動促進(jìn)對聽力內(nèi)容的理解及吸收。聽力教學(xué)可以圍繞語言目標(biāo)，在學(xué)生對所聽材料有一定理解的基礎(chǔ)上、根據(jù)學(xué)生層次興趣有效組織多種課堂活動，如：雙人對話、小組討論、分角色表演、復(fù)述聽力內(nèi)容等。另外，課堂聽力活動可以結(jié)合網(wǎng)絡(luò)、多媒體等現(xiàn)代化教學(xué)手段，增加活動的趣味性。這些活動一方面能鼓勵學(xué)生參與其中，在真實的交際語境中達(dá)到培養(yǎng)語言交際能力的目的。在此過程中，學(xué)生也會把自身感情當(dāng)作評估自己的標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)感覺自己是群體中不可缺少的一員時，學(xué)生就會對自我價值產(chǎn)生認(rèn)可。另一方面，學(xué)生能通過這些合作活動消除聽力中的思想焦慮、促進(jìn)合作意識，提高合作能力，體驗集體榮譽(yù)感。而合作意識正是當(dāng)代大學(xué)生必備的基本素質(zhì)。當(dāng)然，教師作為聽力課堂活動的設(shè)計者，要充當(dāng)好組織者、鼓勵者和評價者的多重身份。（四）創(chuàng)設(shè)寬松、愉快、和諧的聽力課堂氣氛課堂不僅僅是教師教學(xué)、學(xué)生學(xué)習(xí)的地方交流，更是師生情感相互碰撞交融的地方。好的課堂氣氛是一種隱性教育，指各種教學(xué)要素和關(guān)系達(dá)到一種動態(tài)的平衡與和諧，它對學(xué)生的自主性學(xué)習(xí)具有巨大的潛在影響，因為在這種氛圍中，學(xué)生能輕松地獲取知識，減輕自身學(xué)習(xí)焦慮感，并能激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)英語的熱情，變“厭學(xué)”為“愿學(xué)”。為了達(dá)到良好的互動交際，教師首先要保證課堂內(nèi)外師生關(guān)系的平等，使學(xué)生在心理上覺得安全。鼓勵學(xué)生大膽提出問題，喚起他們的成功欲望；要盡量給焦慮感強(qiáng)的學(xué)生提供感受學(xué)習(xí)成就感的機(jī)會，增強(qiáng)他們的自信心，幫助其形成良好的自我形象及對教師的依賴。對學(xué)生的語言輸出錯誤要采取寬容的態(tài)度，并以委婉的態(tài)度引導(dǎo)他們自己發(fā)現(xiàn)并糾正錯誤，從而使不同層次水平的學(xué)生都能發(fā)揮自身的最大潛力。（五）教師要提高個人魅力及素養(yǎng)，調(diào)控教員自身的情緒狀態(tài)教師除了要關(guān)注學(xué)員心理狀態(tài)，在聽力課堂上自身也要善于表達(dá)積極情感，用信任的目光、贊許的微笑、和藹的語言，多給學(xué)生動口的機(jī)會，盡力做到對學(xué)生不指責(zé)、不呵斥、不急躁，多給予熱情鼓勵和引導(dǎo)，讓他們在語言實踐中主動發(fā)現(xiàn)問題、解決問題。從而表達(dá)出對學(xué)生的關(guān)心和愛護(hù)，消除師生之間的情感障礙，滿足學(xué)生的情意需求。另一方面，在日常生活中要不斷地與學(xué)生進(jìn)行情感交流，以求進(jìn)一步融洽師生感情。教師應(yīng)把對學(xué)生的愛化為一個溫柔的眼神、一個會意的微笑、一句暖心的話語、一個贊許的姿態(tài)、一個體貼入微的動作，公平公正地對待學(xué)生。對他們的點(diǎn)滴進(jìn)步都給以鼓勵，這樣會使學(xué)生感覺到教師的關(guān)心、賞識和可敬，心理上就會產(chǎn)生一種說不出的愉悅與滿足，激發(fā)他們的求知欲，鼓起他們英語聽力的自信。這樣，學(xué)生就會“親其師而信其道”，更加熱愛學(xué)習(xí)?？傊楦胁呗栽诖髮W(xué)英語聽力實踐中的積極作用是不容忽視的。軍校大學(xué)英語教師應(yīng)該關(guān)注學(xué)生在聽力學(xué)習(xí)過程中的各種聽力需求，通過有效的教學(xué)策略，培養(yǎng)他們的學(xué)習(xí)動機(jī)、學(xué)習(xí)興趣。教師一定要結(jié)合實際情況，樹立正確的人文教育觀念，積極調(diào)動學(xué)生的人格因素，有效地利用現(xiàn)用的教學(xué)資源，努力幫助學(xué)生營造和諧、輕松、自然地學(xué)習(xí)氛圍。分子免疫學(xué)_之_抗體的制備及應(yīng)用怎樣思想，就有怎樣的生活分子48抗體的制備及應(yīng)用抗體的制備及應(yīng)用49一、抗體的一些基本概念單克隆抗體

(MonoclonalAntibody,McAb)單個B淋巴細(xì)胞克隆所分泌的抗體多克隆抗體

(PolyclonalAntibody)多個B淋巴細(xì)胞克隆所分泌的抗體

一、抗體的一些基本概念單克隆抗體50抗原（antigen，Ag）表位，抗原結(jié)合位點(diǎn)，抗原決定簇（epitope）Ag1234抗原（antigen，Ag）表位，抗原結(jié)合位點(diǎn)，抗原決定簇51Ag

單克隆抗體

B1B2B3B4B3B3B3B32

多克隆抗體341Ag單克521、單克隆抗體的特點(diǎn)特異性強(qiáng)，具有抗原結(jié)合位點(diǎn)的專一性。（不是抗原的專一性?。┮蚪Y(jié)合位點(diǎn)的單一性，有時不易捕捉抗原，一株單克隆抗體與抗原不易產(chǎn)生凝集反應(yīng)或沉淀反應(yīng)。

抗體的性質(zhì)相同，容易純化、標(biāo)記。1、單克隆抗體的特點(diǎn)特異性強(qiáng)，具有抗原結(jié)合位點(diǎn)的專一性。（不53腦垂體分泌的一些激素：hFSH促卵泡激素hLH促黃體生成素hTSH促甲狀腺激素hCG#絨毛膜促性腺激素βαβαα

β

βα腦垂體分泌的一些激素：hFSH促卵泡激素βαβααβ54

單克隆抗體有交叉反應(yīng)是由于不同的抗原上有完全相同的表位（100%的交叉反應(yīng)）,或有相似的表位（不同程度的交叉反應(yīng)）。單克隆抗體有交叉反應(yīng)是由于不同的抗原上有55產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理113323221111112232322113產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理11332322111111223232256購買抗體時要注意廠商的標(biāo)注適合于做什么實驗,使用濃度多少WB（Westernblotting，免疫印跡)IH(Immunohistochemistry,免疫組織化學(xué))IC(Immunocytochemistry,免疫細(xì)胞化學(xué))IEM(Immunelectronmicroscopy,免疫電鏡)FCM(FlowCytometry,流式細(xì)胞儀)ELISA(enzymelinkedimmunosorbentassey,酶聯(lián)免疫吸附實驗,酶聯(lián)免疫分析)購買抗體時要注意廠商的標(biāo)注適合于做什么實驗,使用濃度多少572、多克隆抗體的特點(diǎn)

多抗是單抗的混合物，因此多抗的性質(zhì)是一個群體綜合的性質(zhì)。特異性一般比單抗差因為由不同性質(zhì)的抗體組成，只要其中含交叉反應(yīng)的抗體，多抗就有交叉反應(yīng)，所以多抗更容易有交叉反應(yīng)。2、多克隆抗體的特點(diǎn)多抗是單抗的混合物，因此多抗的性質(zhì)58

比單抗更容易捕捉抗原。

因為含有抗不同表位的抗體，多種抗

體都可與抗原結(jié)合。

抗體的純化、標(biāo)記比單抗難因為含有各種不同類型、亞類的抗體，提純、標(biāo)記的方法有所差別。同時,血清中含有的雜蛋白比較多.比單抗更容易捕捉抗原。

因為含有抗不同表位的抗體，多59二、抗體的制備1、單克隆抗體的制備無法采用生物化學(xué)的方法從多抗中分離必須采用細(xì)胞雜交的方法來制備能否篩選到理想的單克隆抗體有技術(shù)問題也有機(jī)遇問題

二、抗體的制備1、單克隆抗體的制備60制備單克隆抗體的基本原理：

致敏的B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞（myeloma）

（能夠分泌特異性的抗體，（不能分泌特異性的抗體，不能在體外長期生存）但能在體外長期生存）

陽性雜交瘤細(xì)胞(hybridoma)

（既能分泌特異性抗體，又能夠在體外長期生存）克隆化培養(yǎng)

（產(chǎn)生單克隆的陽性雜交瘤細(xì)胞）生產(chǎn)單克隆抗體

1222212制備單克隆抗體的基本原理：1222212612、多抗的制備常用的免疫動物免疫的基本步驟如何免疫兔子2、多抗的制備621）常用的免疫動物兔子（rabbit）：最常用于自制抗體，抗體量較多。（新西蘭,大耳白）小鼠（mouse）：可用于自制抗體，但抗體量很少。（BALB/C,昆明鼠）大鼠（rat）：可用于自制抗體，免疫過程要麻醉動物。（Wistar大鼠）1）常用的免疫動物兔子（rabbit）：最常用于自制抗體，63羊（sheep、goat）：常用于較大批量地生產(chǎn)抗體（商品）。馬（horse）：常用于大批量生產(chǎn)治療用抗體（商品）。豚鼠（guineapig）：國外實驗室常用。羊（sheep、goat）：常用于較大批量地642）免疫的基本步驟基礎(chǔ)免疫：首次，抗原用量大，用佛式完全佐劑（ComplateFreund’adjuvand,含礦物油,卡介苗等).加強(qiáng)免疫：第2次以后，抗原量減半，多次，間隔2-4周，用佛式不完全佐劑(IncomplateFreund’adjuvand,不含卡介苗).2）免疫的基本步驟基礎(chǔ)免疫：首次，抗原用量大，用佛式完全65取血測效價：加強(qiáng)免疫兩次或三次以后的第7天取血。放血制備血清：最后一次免疫后7-10天放血。(在三角瓶中加一些生理鹽水，放血放置一段時間，凝固，吸取血清，離心，分裝，凍存)取血測效價：663)如何免疫兔子2000g(雌雄均可),健康,無病原（小鼠20g，大鼠200g）基礎(chǔ)免疫0.5ml抗原(含0.25~0.5mg蛋白或108顆?？乖?0.5ml佛式完全佐劑(CFA)（小鼠0.2ml）制備抗原-佐劑乳化液背部、頸部皮下多點(diǎn)注射或腿部肌肉注射（注意：不要剪毛）3)如何免疫兔子2000g(雌雄均可),健康,無病原（小鼠67加強(qiáng)免疫間隔2-4周,可進(jìn)行多次0.5ml抗原(蛋白量減半)0.5ml佛式不完全佐劑(IFA)制備抗原-佐劑乳化液背部、頸部皮下多點(diǎn)注射或腿部肌肉注射加強(qiáng)免疫68免疫3~4次以后從耳靜脈取血檢測效價酶聯(lián)法：1:104以上，能達(dá)到1:106。免疫雙擴(kuò)散：1:16以上，能達(dá)到1:64效價達(dá)到要求的可放血制備血清可一次放血(頸動脈)也可多次取血(耳靜脈)

免疫3~4次以后從耳靜脈取血檢測效價69單抗與多抗的區(qū)別

單抗多抗抗體組成單一復(fù)雜

抗體性質(zhì)個體的屬性群體綜合的性質(zhì)純化標(biāo)記容易，效果好難度高一些種屬來源絕大多數(shù)是小鼠兔子、羊、豚鼠等制備周期長(最短4個月）短（2個月）制備技術(shù)復(fù)雜簡單經(jīng)費(fèi)多少單抗與多抗的區(qū)別70什么情況需要制備單抗目的蛋白有結(jié)構(gòu)類似物抗原不純，無法分開多抗效果不好（已排除非特異性反應(yīng)）希望將抗體用于治療，研制成藥品希望將抗體用于診斷，研制成診斷試劑什么情況需要制備單抗目的蛋白有結(jié)構(gòu)類似物71三、抗體的純化鹽析法（硫酸銨沉淀)辛酸-硫酸銨沉淀法離子交換法親和層析法凝膠過濾法三、抗體的純化鹽析法（硫酸銨沉淀)721、鹽析法（硫酸銨沉淀)原理在高濃度中性鹽存在下,蛋白質(zhì)在水中的溶解度降低而產(chǎn)生沉淀硫酸銨是最常用的中性鹽不同蛋白質(zhì)的鹽析常數(shù)不同硫酸銨的加入量通常以飽和度表示(100%飽和度:767g/L)1、鹽析法（硫酸銨沉淀)原理73主要步驟在血清或腹水中加入硫酸銨使抗體沉淀；4℃高速離心,棄上清,溶解沉淀；

可反復(fù)操作,逐級降低硫酸銨的濃度:5