微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本技能培訓(xùn)

24第一局部 微生物學(xué)試驗(yàn)根本技能培訓(xùn)第一次試驗(yàn)〔4學(xué)時(shí)，2人/組〕緒言介紹本課程的教學(xué)大綱、試驗(yàn)指導(dǎo)書、試驗(yàn)要求和考核方法；介紹本學(xué)期《微生物學(xué)試驗(yàn)》課程的內(nèi)容安排和時(shí)間安排。介紹微生物試驗(yàn)室須知事項(xiàng)，留意生物安全、水電防火安全等。介紹試驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告與試驗(yàn)報(bào)告的統(tǒng)一格式和要求。標(biāo)題原理試驗(yàn)器材〔含留意事項(xiàng)〕預(yù)期結(jié)果標(biāo)題試驗(yàn)器材結(jié)果思考題考核：評(píng)分比例：尋常考核占60%，期末考核占40%。尋常考核內(nèi)容包括預(yù)習(xí)報(bào)告、試驗(yàn)操作及試驗(yàn)報(bào)告〔20%，40%，40〕尋?？己说怯汚+：95，A：90，B+：85，B：80，C+：75，C：70，D+：65，D：60，E：≤50試驗(yàn)一培育基的配制與無(wú)菌器材的預(yù)備〔927〕一、目的要求1、明確培育基的配制原理。2、通過對(duì)根底培育基的配制，把握配制培育基的一般方法和步驟。3、了解滅菌的常用方法及應(yīng)用對(duì)象。4、學(xué)習(xí)高壓蒸汽滅菌鍋的操作方法及留意事項(xiàng)。5、學(xué)習(xí)干熱滅菌的操作技術(shù)。6、了解分別培育微生物前的有關(guān)預(yù)備工作。二、根本原理培育基是人工配制的適合于不同微生物生長(zhǎng)生殖或積存代謝產(chǎn)物的養(yǎng)分基質(zhì)，它是進(jìn)展科學(xué)爭(zhēng)論，生產(chǎn)微生物制品及應(yīng)用等方面的根底。由于各類微生物對(duì)養(yǎng)分的要求不同，培育目的和檢測(cè)需要不同，因而培育基的種類很多，要依據(jù)培育目的和檢測(cè)需要不同，選擇配制不同的培育基。蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)123℃滅20干熱滅菌是利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而到達(dá)滅菌的目的〔16—17℃1—2小時(shí)但干熱滅菌溫度不能超過180℃，否則，包器皿的紙或棉塞就會(huì)烤焦，甚至引起燃燒，因而一般塑料制品不能用干熱滅菌。三、試驗(yàn)器材1、試劑牛肉膏、蛋白胨，氯化鈉，瓊脂，1mol/LNaOH，1mol/LHCl2、儀器和其他用具試管，三角瓶，燒杯，量筒，培育皿，玻棒，涂布棒，培育基分裝器，天平，藥勺，高壓蒸汽滅菌鍋，pHpH四、試驗(yàn)操作步驟〔一、培育基的配制pH-過濾-分裝-加塞-包扎標(biāo)記-滅菌-擱置斜面或倒平板-無(wú)菌檢查配方：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g5.0g1000ml，pH7.4-7.6。15-20g。1、牛肉膏蛋白胨固體培育基的制備〔300ml〕稱量：除瓊脂外，按培育基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取藥品，放入搪瓷杯中。蛋白胨極易吸水，稱量時(shí)動(dòng)作要快。熔化：量取蒸餾水，參加所需水量的一局部至上述搪瓷杯中，用玻璃棒攪拌，待藥品溶解后，加pH：待培育基稍冷卻后，用周密pH試紙測(cè)量培育基的原始pH1mol/LNaOH加邊攪拌，使之到達(dá)pH7.4-7.61mol/LHCl過濾：趁熱過濾。如無(wú)特別要求，可省略。1/5，每組分裝6支試管。余下培育基轉(zhuǎn)入三角瓶中，培育基的量為三角瓶容量的1/3-1/2。在漏斗下口處套有一段透亮膠管，膠管下部用彈簧夾夾緊。分裝時(shí)，一手捏松彈簧夾出，另一只手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培育基。分裝時(shí)，留意不要使培育基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。加塞：試管加棉花塞〔或泡沫塑料塞、試管帽，三角瓶加棉塞或泡沫塑料塞。1過緊過松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落為適宜。棉塞的長(zhǎng)度不小于管口直徑的2倍，棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶?jī)?nèi)，上端露出少許棉花便于拔取。包扎標(biāo)記：6支試管扎成一捆，棉塞外加一層牛皮紙防滅菌時(shí)冷凝水潮濕棉塞，在外用繩扎成活結(jié)。三角瓶棉塞外加蓋牛皮紙，用繩扎成活結(jié)。用記號(hào)筆注明培育基名稱、班級(jí)、組別、配制日期。滅菌：0.1MPa，121℃，20min高壓蒸汽滅菌。見試驗(yàn)流程〔三。擱置斜面：待已滅菌的試管培育基冷卻至50℃左右，將試管口端擱置在有適宜高度的器具上，使培育基斜面長(zhǎng)度不超過試管總長(zhǎng)的一半為宜。倒平板：待三角瓶中培育基冷卻至50℃左右，倒平板。備用。37℃培育箱中24-48小時(shí)，假設(shè)無(wú)細(xì)菌污染則說(shuō)明滅菌徹底。2、牛肉膏蛋白胨液體培育基的制備〔600-800ml/班，由2組同學(xué)或教師完成〕——教師代按培育基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取藥品，除瓊脂外，方法同固體培育基的制備過程。各組需完成：用分裝裝置將培育液分裝到試管中，高度為試管長(zhǎng)度的1/4。每組6支試管，自行分裝、包扎、滅菌?！捕?、預(yù)備無(wú)菌器材1、培育皿：洗凈的培育皿烘干后，每組將10-12套培育皿疊在一起，用結(jié)實(shí)的紙卷成一筒，然后進(jìn)展滅菌。2、移液管：洗凈、烘干后的吸管，在吸口的一頭塞入少許脫脂棉花，以防在使用時(shí)造成污染。塞4~5cm30~50℃的角度螺旋形卷起來(lái)，吸管的尖端在頭部，另一端用剩余的紙條打成一結(jié)，以防散開，標(biāo)上容量，假設(shè)干支吸管包扎成一束進(jìn)展滅菌。1ml5-610ml13、試管和三角瓶：試管和三角瓶都需要做適宜的棉塞。每組捆扎加塞試管4-5支，每組用三角燒1/24、玻璃涂布棒：1上述物品用記號(hào)筆注明班級(jí)、組別、日期?！踩?、滅菌操作步驟1、高壓蒸汽滅菌關(guān)好排水閥門，放入蒸餾水至標(biāo)度。留意水量肯定要加足，否則簡(jiǎn)潔造成事故。將必要滅菌的器材、培育基等裝入滅菌鍋中，加蓋密封。旋緊螺旋時(shí)，先將每個(gè)螺旋旋轉(zhuǎn)到肯定程度〔不要太緊，然后再旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺旋，以到達(dá)平衡旋緊，否則易造成漏氣，達(dá)不到徹底滅菌的目的。通電加溫，翻開排氣閥門，排盡鍋內(nèi)的空氣。全自動(dòng)高壓鍋應(yīng)關(guān)閉排氣閥，恒溫滅菌:0.1MPa15〔120℃～121℃〕20～30降溫：自然降溫，當(dāng)鍋內(nèi)蒸汽完全排盡時(shí)即壓力表指針降到零時(shí)，才能翻開排氣閥。取出滅菌物品：如培育基需制備固體斜面培育基時(shí)，則應(yīng)趁熱將試管斜放在桌上。培育基、無(wú)菌水等：濕熱滅菌。2、干熱滅菌將包扎好的玻璃器皿擺入電熱烘箱中，相互間要留有肯定的空隙，以便空氣流通。關(guān)緊箱門，翻開排氣孔，接上電源。：150～170℃1.5～2h。2待烘箱內(nèi)溫度自然降溫冷卻到60℃以下后，再開門取出玻璃器皿，避開由于溫度突然下降而引起玻璃器皿碎裂。放入烘箱加熱滅菌：150～170℃1.5～2h。玻璃器皿：可選擇干熱滅菌或濕熱滅菌五、留意事項(xiàng)1、培育基的配制水分應(yīng)補(bǔ)足；pH值必需按不同培育基要求準(zhǔn)確測(cè)定；全部器皿要清潔，忌用鋼質(zhì)、鐵質(zhì)器皿；分裝培育需依據(jù)各種培育基的規(guī)定進(jìn)展，以到達(dá)滅菌效果且不損害必要養(yǎng)分成分；滅菌后的培育基須放37℃溫24h，無(wú)菌生長(zhǎng)時(shí)方可使用。2、滅菌使用滅菌鍋應(yīng)嚴(yán)格依據(jù)操作程序進(jìn)展，避開發(fā)生事故，如鍋內(nèi)應(yīng)加足水份，以防干燒；滅菌時(shí)，操作者切勿擅自離開；務(wù)必待壓力下降到零后，才可翻開鍋蓋。烘箱內(nèi)壁的鐵板接觸，以防包裝紙烤焦起火。待烘箱內(nèi)溫度自然降溫冷卻到60℃以下后，再開門取出玻璃器皿，避開由于溫度突然下降而引起玻璃器皿碎裂。六、思考題1、培育基配好后，為什么必需馬上滅菌？如何檢查培育基滅菌是否徹底？2、高壓蒸汽滅菌開頭前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么待壓力降至0時(shí)才能翻開排氣閥，開蓋取物？七、講授重點(diǎn)1、培育基種類、配制培育基的根本原理與方法。2、高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌的原理和標(biāo)準(zhǔn)操作流程。八、試驗(yàn)要求每組需完成制作棉塞、配制培育基、預(yù)備無(wú)菌器材九、考核點(diǎn)操作是否標(biāo)準(zhǔn)、快速其次次試驗(yàn)〔4學(xué)時(shí)，1人/組〕試驗(yàn)二微生物的分別、接種及環(huán)境微生物的檢測(cè)〔928〕一、目的要求1、體會(huì)無(wú)菌操作技術(shù)在微生物爭(zhēng)論中的重要性。2、證明環(huán)境中存在微生物。3、把握倒平板的方法。4、學(xué)習(xí)微生物接種的根本技術(shù)。5、學(xué)習(xí)分別微生物的常用方法。二、根本原理到達(dá)滅菌的目的。作為不同種類微生物的鑒別特征之一。三、試驗(yàn)器材1、菌種：大腸桿菌〔Escherichiacol、枯草芽孢桿菌〔Bacillussubtili，金黃色葡萄球菌〔Saphylococcusaures斜面培育物。2、培育基牛肉膏蛋白胨固體和液體培育基。3、儀器和其他用具接種環(huán)、酒精燈、試管架、記號(hào)筆、培育皿、恒溫培育箱等。四、試驗(yàn)步驟1、微生物接種技術(shù)試管斜面接種法〔用接種環(huán)轉(zhuǎn)接菌種：標(biāo)記：用記號(hào)筆對(duì)待接試管斜面培育基進(jìn)展標(biāo)記，寫上待接菌種名稱、接種日期、組別。面上半部，在管壁冷卻水上或管壁上使接種環(huán)冷后，挑起少許菌苔，再燒一下試管口，塞上棉塞，左手把斜面試管放回試管架。右手持有菌接種環(huán)在酒精燈旁無(wú)菌區(qū)。接種：左手從試管架上取出標(biāo)記好的斜面試管一支，右手掌緣拔出棉塞，試管口在酒精燈上灼燒一下，畢后，燒一下試管口，塞上棉塞，接種環(huán)在火焰上灼燒后放回原處。3724-36液體培育基接種法：〔1散從環(huán)上脫開，進(jìn)入液體培育基中。輕輕搖勻培育液。2、平板分別技術(shù)稀釋涂布平板法：倒平板：滅菌的牛肉膏蛋白胨培育基冷卻到55℃左右，搖勻。解開麻繩，去掉三角瓶口上的牛皮紙和9cm無(wú)菌培育皿并將皿蓋在火焰旁翻開一條縫，快速倒入培育基約15ml，加蓋后輕輕搖動(dòng)培育皿，平置于桌面上，使培育基均勻分布于皿底，待冷凝后即為平板。菌液稀釋：取49ml1ml9ml10涂布：取0.1ml稀釋菌液入平板中，用無(wú)菌涂布棒在培育基外表涂布均勻。3724-36析。假設(shè)不純，需再用平板分別法進(jìn)展純化。平板劃線法：倒平板、培育和挑單菌落同A。環(huán)在火焰上滅菌，左手轉(zhuǎn)動(dòng)平皿約70度，用無(wú)菌接種環(huán)通過第一次劃線的末端作為起點(diǎn)作二次劃線，依次作第三次、第四次劃線〔平行線劃線法?；?qū)⑻羧∮芯慕臃N環(huán)在平板培育基上作連續(xù)劃線。3、環(huán)境微生物的檢驗(yàn)將1個(gè)牛肉膏蛋白胨平板放在當(dāng)時(shí)做試驗(yàn)的試驗(yàn)室，移去皿蓋，使瓊脂培育基暴露在空氣中，將10min后蓋上兩個(gè)皿蓋。五、留意事項(xiàng)1、無(wú)菌技術(shù)手和臺(tái)面要消毒；無(wú)菌操作需在火焰旁進(jìn)展，手不行觸摸試管口端，以防燙傷；接種時(shí)接種環(huán)不要碰觸試管口邊，防止污染；棉塞不行放在桌面上，應(yīng)當(dāng)用右手手緣或右手指間夾住。2、平板分別技術(shù)倒平板時(shí)，培育皿邊緣不要沾染培育基，搖勻培育基時(shí)要輕，以防培育液濺到皿蓋或溢出培育皿；劃線接種時(shí)，動(dòng)作要輕，留意不要?jiǎng)澠婆嘤?；分別、接種時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按無(wú)菌操作要求進(jìn)展；平板培育微生物時(shí)要倒置培育。六、試驗(yàn)結(jié)果1、記錄液體培育基和固體斜面培育基上，細(xì)菌的生長(zhǎng)狀況。2、記錄菌種分別培育的結(jié)果。七、思考題1、平板培育時(shí)為什么要把培育皿倒置？2、在劃線分別時(shí)，為什么每次都需要將接種環(huán)上的剩余物燒掉？八、講授重點(diǎn)1、倒平板2、微生物轉(zhuǎn)接方法3、平板劃線法和涂布平板法九、試驗(yàn)要求每位學(xué)生練習(xí)倒平板、液體試管接種、斜面接種、平板劃線和涂布平板。十、考核點(diǎn)1、無(wú)菌操作是否標(biāo)準(zhǔn)2、平板劃線方法是否正確試驗(yàn)三顯微鏡的根本學(xué)問及使用方法附：數(shù)碼顯微鏡的使用一、目的要求1、把握一般光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造及各局部的功能。2、學(xué)習(xí)并把握油鏡的原理、使用方法、維護(hù)的根本學(xué)問。3、把握利用顯微鏡觀看不同微生物的根本技能。4、學(xué)習(xí)顯微數(shù)碼系統(tǒng)的使用方法。5、了解微生物在顯微鏡下的根本形態(tài)特征。二、根本原理頭之間加滴鏡油，主要是為了增加照光明度和提高顯微鏡的區(qū)分率。物鏡放大倍數(shù)越大，焦距越短，直徑更小，所需光強(qiáng)越大。從承載標(biāo)本的玻片透過來(lái)的光線，因介璃折射率〔1.551.52〕相近的鏡油，使光線不會(huì)造成太大的損失。公式中1.33)，NA三、試驗(yàn)器材1、標(biāo)本片：霉菌標(biāo)本片、細(xì)菌〔枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis等〕的標(biāo)本片〔2/組。2、溶液和試劑：香柏油、乙醇乙醚混合液或二甲苯等〔各一瓶/組。3、儀器或其他用具：一般光學(xué)顯微鏡〔1/組、擦鏡紙。四、試驗(yàn)步驟〔一〕顯微鏡操作演示與錄相1、觀看前預(yù)備：鏡座距試驗(yàn)臺(tái)邊緣約10cm，光源調(diào)整，調(diào)整目鏡、調(diào)整聚光器數(shù)值孔徑值。2、顯微鏡觀看：低倍鏡觀看高倍鏡觀看油鏡觀看，再用細(xì)調(diào)整器使聚焦清楚為止。后一種方法盡量不用，在試驗(yàn)中重點(diǎn)介紹和使用第一種方法。3、顯微鏡用畢后的處理：上升鏡筒，取下載玻片；擦凈鏡油；清潔物鏡及目鏡；復(fù)原各部件，降下聚光鏡?！捕矼otic顯微數(shù)碼系統(tǒng)的使用演示與錄相建文件夾：例如D:\2023-2023\0511圖片要求：格式：JPG05111000五、留意事項(xiàng)1、顯微鏡是周密儀器，在取放時(shí)要一手托住底座，一手握住鏡臂，忌用單手拎提。2、養(yǎng)成雙目觀看的習(xí)慣，忌單眼觀看。3、觀看時(shí)可摘下近視鏡或遠(yuǎn)視鏡，因顯微鏡具有聚焦校正功能。假設(shè)在觀看時(shí)配載眼鏡，應(yīng)防止眼鏡鏡片與目鏡鏡片接觸，以免造成鏡片劃痕。4、顯微鏡照光明度的調(diào)整，可通過升降聚光器或轉(zhuǎn)變光源亮度進(jìn)展調(diào)整，一般狀況下聚光器都是調(diào)到敏捷運(yùn)用。5、使用粗節(jié)器聚焦物像時(shí)，必需養(yǎng)成的習(xí)慣是：先從側(cè)面注視并留神調(diào)整物鏡靠近標(biāo)本，然后用目鏡觀看，漸漸調(diào)整物鏡離開標(biāo)本。否則可能因誤操作而損壞鏡頭及玻片。6、一般狀況下，可利用同焦現(xiàn)象，對(duì)在低倍鏡下看到的物像，可以轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工頭或玻片。7、使用乙醇乙醚混和物或二甲苯等清潔劑時(shí)，不要過量使用或讓其在鏡頭上停留時(shí)間過長(zhǎng)，因清潔劑對(duì)鏡頭會(huì)造成損害。不能用手或?yàn)V紙擦鏡頭，以免污染鏡頭或產(chǎn)生劃痕。8．留意區(qū)分待觀看樣品與使用時(shí)間較長(zhǎng)的顯微鏡鏡頭上的霉點(diǎn)等污物。每人在D盤上建一個(gè)文件夾，文件夾名與文件名的要求。六、試驗(yàn)結(jié)果低倍、高倍、油鏡下觀看微生物形態(tài)圖七、思考題1、用油鏡觀看時(shí)應(yīng)留意哪些問題？2、在載玻片和鏡頭之間滴加香柏油有什么作用？八、講授重點(diǎn)1、顯微鏡構(gòu)造2、油鏡工作原理3、如何使用雙目清楚觀看物像4、聚光器數(shù)值孔徑的調(diào)整5、利用物鏡的同焦現(xiàn)象，如何協(xié)作使用低倍鏡、高倍鏡和油鏡分別在不同物鏡下獲得清楚圖像。6、使用留意事項(xiàng)，特別是油鏡。7、數(shù)碼顯微鏡系統(tǒng)軟件的使用。九、試驗(yàn)要求1、練習(xí)使用顯微鏡，每位同學(xué)至少觀看微生物的2個(gè)標(biāo)本片〔低倍、高倍物鏡下觀看霉菌，在低倍、高倍物鏡、油鏡下觀看細(xì)菌，每一類型的微生物至少觀看一個(gè)標(biāo)本片。2、用數(shù)碼顯微系統(tǒng)分別拍攝所觀看到的微生物形態(tài)圖，提交2張圖片〔高倍物鏡下觀看霉菌和油鏡下觀看細(xì)菌。3、制成圖版打印黑白圖片，并標(biāo)注菌種名稱、觀看物鏡及總放大倍數(shù)。十、考核點(diǎn)操作是否標(biāo)準(zhǔn)嫻熟以及油鏡下的物像清楚度第三次試驗(yàn)〔4學(xué)時(shí)，1人/組〕微生物標(biāo)本的制備與染色一、目的要求1、學(xué)習(xí)并把握微生物制片及簡(jiǎn)潔染色的根本技術(shù)。2、學(xué)習(xí)無(wú)菌操作技術(shù)。3、進(jìn)一步嫻熟把握顯微鏡油鏡的使用技術(shù)。4、初步生疏細(xì)菌的形態(tài)特征。二、根本原理細(xì)菌制片常承受涂片法，通過涂沫能使細(xì)菌細(xì)胞個(gè)體均勻分散在載玻片上，有利于觀看個(gè)體形態(tài)。加熱固定使細(xì)胞質(zhì)凝固，使細(xì)胞固定在載玻片上，能殺死大多數(shù)細(xì)菌但不會(huì)破壞細(xì)胞形態(tài)。在地帶電荷的性質(zhì)分為幾種類型：酸性染料〔如酸性復(fù)紅，剛果紅，伊紅和苯胺黑等、堿性染料〔堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭等，細(xì)菌易被這種染料染色、中性〔復(fù)合〕染性〔伊紅，美蘭，Gimsa。簡(jiǎn)潔染色法是利用單一染料〔如呂氏美藍(lán)、堿性品紅〕對(duì)細(xì)菌進(jìn)展染色的一種方法，適用于菌體一顯比照而易于識(shí)別。三、試驗(yàn)器材1、菌種：大腸桿菌〔Escherichiacol，枯草芽孢桿菌〔Bacillussubtili，金黃色葡萄球菌〔Saphylococcusaures斜面培育物。2、染色劑：堿性美藍(lán)染液，石炭酸復(fù)紅染液。3、儀器或其他用具：顯微鏡，酒精燈，載玻片，鑷子、接種環(huán)、載玻片夾子、濾紙等。四、試驗(yàn)步驟涂片-枯燥-固定–染色–水洗–枯燥-鏡檢1、涂片：取干凈載玻片，用記號(hào)筆做好標(biāo)記，滴一滴生理鹽水于載玻片中心；用接種環(huán)無(wú)菌操作分別〔如1-2環(huán)菌液直接涂沫于載玻片上。2、枯燥：自然風(fēng)干或用電吹風(fēng)枯燥。3、固定：細(xì)菌涂面朝上，通過火焰2-34、染色：載玻片平放于桌面或載玻片支架上，滴加染液使之掩蓋菌膜，一般染色1-25、水洗：傾去染液，用自來(lái)水沖洗，水流宜緩，否則易沖掉細(xì)菌涂膜，至洗出的水無(wú)色為止。6、枯燥：用吸水紙吸去多余水分，自然風(fēng)干。7、鏡檢：制好的樣片在顯微鏡下觀看并記錄。五、留意事項(xiàng)1、涂片時(shí)取菌量要適量，且要求涂布均勻。2、無(wú)菌操作取菌時(shí)肯定要等接種環(huán)冷卻后再取菌，以免高溫使菌體變形。3、涂片需枯燥后再加熱固定，避開加熱時(shí)間過長(zhǎng)引起細(xì)胞易裂開或變形，以至載玻片裂開。加熱固定時(shí)要用載玻片夾子或鑷子，以免燙傷。4、使用染料時(shí)留意避開沾到衣物和試驗(yàn)臺(tái)面上。六、試驗(yàn)結(jié)果低倍、高倍、油鏡下觀看細(xì)菌形態(tài)圖七、思考題在進(jìn)展細(xì)菌涂片時(shí)應(yīng)留意哪些環(huán)節(jié)？為什么要求制片完全枯燥后才能用油鏡觀看？八、講授重點(diǎn)1、細(xì)菌簡(jiǎn)潔染色的原理。2、無(wú)菌操作與細(xì)菌涂片操作要點(diǎn)。3、染色劑的類型與常用種類。4、顯微鏡的使用。九、試驗(yàn)要求1張?jiān)谟顽R下觀看到的細(xì)菌形態(tài)圖，標(biāo)明菌種名稱和總放大倍數(shù)。十、考核點(diǎn)涂片質(zhì)量與油鏡以下圖像的清楚度一、目的要求1、了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性。2、把握革蘭氏染色法操作技術(shù)。二、根本原理成，壁厚、類脂質(zhì)含量低，用乙醇〔或丙酮〕脫色時(shí)細(xì)胞壁脫水、使肽聚糖層的網(wǎng)狀構(gòu)造孔徑縮小，通色。革蘭氏陰性菌則不同，由于其細(xì)胞壁肽聚糖層較薄、類脂含量高，所以當(dāng)脫色處理時(shí)，類脂質(zhì)被乙染劑的紅色。革蘭氏染色是細(xì)菌分類的重要依據(jù)之一。三、試驗(yàn)器材1、菌種：枯草芽孢桿菌〔Bacillussubtili，大腸桿菌〔Escherichiacol，金黃色葡萄球菌〔Saphylococcusaures等細(xì)菌16-18h斜面培育物。2、染色劑：石炭酸復(fù)紅染液，草酸銨結(jié)晶紫染液，盧戈氏碘液，95%乙醇。3、儀器或其他用具：顯微鏡，酒精燈，載玻片，鑷子、接種環(huán)、載玻片夾子、濾紙等。四、試驗(yàn)步驟制片-初染-媒染-脫色-復(fù)染-鏡檢1、制片：與細(xì)菌簡(jiǎn)潔染色法的涂片、枯燥和固定過程一樣。2、初染：滴加結(jié)晶紫染色液于菌膜上1-2分鐘，流水沖洗。3、媒染：盧戈氏碘液沖洗一下菌膜，再滴加該液于菌膜上，靜置14、脫色：95%酒精沖洗至無(wú)色后，再水洗。5、復(fù)染：番紅染色液掩蓋菌膜，靜置26、鏡檢：顯微鏡觀看。7〔或金黃色葡萄球菌〕單獨(dú)涂片及二者的混合涂片，染色、鏡檢比較觀看。五、試驗(yàn)留意事項(xiàng)1、試驗(yàn)三、四中的留意事項(xiàng)同樣適用于本試驗(yàn)。2、選取活潑生長(zhǎng)期菌種、涂片厚度適宜、脫色程度適當(dāng)，能避開產(chǎn)生假性革蘭氏染色結(jié)果。六、試驗(yàn)結(jié)果1、拍攝油鏡下觀看到的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌或枯草芽孢桿菌與大腸桿菌的單菌涂片及混合涂片的革蘭氏染色菌體圖。23-1。3-1革蘭氏染色結(jié)果記錄表菌名 菌體顏色 細(xì)菌形態(tài) 結(jié)果〔G+、G-〕七、思考題1、哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？2、現(xiàn)有一株未知桿菌，個(gè)體明顯大于大腸桿菌，請(qǐng)你鑒定該菌是革蘭氏陽(yáng)性還是陰性，如何確定你的染色結(jié)果的正確性？八、講授重點(diǎn)1、細(xì)菌革蘭氏染色的原理。2、革蘭氏染色操作要點(diǎn)和結(jié)果推斷。九、試驗(yàn)要求每位同學(xué)完成2個(gè)單菌涂片及13張?jiān)谟顽R下觀看到的細(xì)菌形態(tài)圖，標(biāo)明菌種名稱和總放大倍數(shù)。十、考核點(diǎn)1、無(wú)菌操作是否標(biāo)準(zhǔn)2、染色過程操作是否標(biāo)準(zhǔn)3、顯微鏡操作是否嫻熟一、目的要求1、學(xué)習(xí)并把握芽孢染色法的原理和技術(shù)，了解芽孢的形態(tài)特征。2、穩(wěn)固顯微鏡操作方法。二、根本原理孢的外形、在芽孢囊內(nèi)的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一。因芽孢壁厚、透性低、不易著色，但一旦著色也很難脫去。當(dāng)用著色力強(qiáng)的染色劑〔如孔雀綠、石炭酸復(fù)紅〕在加熱條件下染度大的復(fù)染劑染色時(shí)，芽孢保存初染劑的顏色，菌體和芽孢囊呈現(xiàn)復(fù)染劑的顏色。三、試驗(yàn)器材1、菌種：枯草芽孢桿菌〔Bacillussubtilis〕48h2、染色劑：石炭酸復(fù)紅染液，5%孔雀綠水溶液。3、儀器或其他用具：顯微鏡，酒精燈，載玻片，鑷子、接種環(huán)、載玻片夾子、濾紙等。四、試驗(yàn)步驟Schaeffer-Fulton1、制片：涂片、枯燥、固定。2、染色：5%孔雀綠滴在涂片上，夾子夾住玻片一端，在微火上加熱至染料冒蒸氣開頭計(jì)時(shí)53、水洗：待玻片冷卻后用流水沖洗至流出的水為無(wú)色。425、鏡檢五、留意事項(xiàng)1、試驗(yàn)三、四的留意事項(xiàng)適用于本試驗(yàn)。2、選取適當(dāng)菌齡的菌種進(jìn)展芽孢染色，幼齡菌尚未產(chǎn)生芽孢，老齡菌芽孢囊已裂開，不易獲得正確染色結(jié)果。3、加熱時(shí)間和溫度要適宜，否則芽胞不易著色或溫度過高導(dǎo)致菌體或芽孢囊裂開。4、在將孔雀石綠染液加熱時(shí)切不行蒸干。5、脫色時(shí)必需等玻璃片冷卻后再進(jìn)展，否則冷水沖洗易導(dǎo)致玻片裂開。6、留意安全，防范燙傷和使用酒精燈時(shí)可能引發(fā)的火災(zāi)。六、試驗(yàn)結(jié)果觀看、拍攝并說(shuō)明枯草芽孢桿菌的形態(tài)特征。七、思考題為什么芽孢染色需要進(jìn)展加熱？能否用簡(jiǎn)潔染色法觀看到細(xì)菌芽孢？八、講授重點(diǎn)1、芽孢染色原理和Schaeffer-Fulton氏染色方法。2、細(xì)菌芽孢的形態(tài)。九、試驗(yàn)要求11形態(tài)圖，標(biāo)明菌種名稱和總放大倍數(shù)。十、考核點(diǎn)1、染色結(jié)果是否正確2、涂片質(zhì)量3、顯微鏡操作是否嫻熟第四次試驗(yàn)〔4學(xué)時(shí)，1人/組〕微生物個(gè)體形態(tài)和群體形態(tài)觀看〔P69-76〕一、目的要求1、學(xué)習(xí)并把握放線菌幾種制片方法和簡(jiǎn)潔染色的根本技術(shù)。2、把握放線菌個(gè)體細(xì)胞和菌落的形態(tài)特征，并留意與霉菌、酵母菌的相互區(qū)分。二、根本原理貼培育基外表或深入培育基生長(zhǎng)的叫養(yǎng)分菌絲〔基內(nèi)菌絲，較透亮較細(xì)，其生長(zhǎng)到肯定階段能向空氣中生長(zhǎng)，叫氣生菌絲〔較粗，色較暗，由氣生菌絲分化形成孢子絲及孢子。孢子絲成螺旋形、波浪形或分枝狀等，孢子常呈圓形、橢圓形或桿形。氣生菌絲、孢子絲和孢子的形態(tài)、顏色常作為放線菌分類面的孢子絲印在載玻片上，經(jīng)簡(jiǎn)潔染色后觀看。放線菌菌落枯燥、不透亮、外表呈致密的絲絨狀，上有一薄層“干粉”。酵母菌是一類呈單細(xì)胞生長(zhǎng)的真核微生物的總稱，少數(shù)能形成假菌絲。酵母菌的菌落較潮濕，與細(xì)菌菌落較相像，但不透亮。三、試驗(yàn)器材1、菌種：鏈霉菌〔Streptomycessp.)插片平板培育物。2、染色劑：呂氏堿性美藍(lán)染液，石炭酸復(fù)紅染色液。3、儀器和其他用品：顯微鏡、酒精燈、載玻片、蓋玻片、濾紙片、接種環(huán)、接種鏟、鑷子等。四、試驗(yàn)步驟〔一〕插片染色法1、取蓋片：取出放線鏈霉菌插片平板培育物，用鑷子輕取蓋片，擦去反面培育物。2、固定：用酒精燈微熱固定。3、染色：用堿性美藍(lán)染液或石炭酸復(fù)紅染色液染色1-24、水洗、枯燥5、觀看：菌面朝上置于載片上，鏡檢觀看?！捕尘湫螒B(tài)觀看對(duì)放線菌瓊脂平板上的菌落進(jìn)展認(rèn)真觀看，記錄菌落大小、外形、透亮程度、顏色、外表枯燥或潮濕，能否易挑取等特征。五、留意事項(xiàng)1、放線菌插片法操作過程中，在移動(dòng)附著有菌體的蓋玻片時(shí)勿碰動(dòng)菌絲體，菌面需朝上，以免破壞菌絲體的形態(tài)。2、插片法觀看個(gè)體形態(tài)時(shí)，宜用微調(diào)整器分別聚焦，以便清楚觀看處處于不同焦平面上的孢子、孢子絲、氣生菌絲和基內(nèi)菌絲。3、觀看菌落時(shí)，留意正反兩面的顏色和菌落外表的薄層“干粉”，認(rèn)真區(qū)分與霉菌菌落的異同點(diǎn)。不要隨便移動(dòng)開蓋，以免孢子飛散污染試驗(yàn)室。六、試驗(yàn)結(jié)果繪圖并說(shuō)明所觀看到的放線菌的形態(tài)特征。七、思考題鏡檢時(shí)如何區(qū)分基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲？八、講授重點(diǎn)1、放線菌個(gè)體和菌落的一般形態(tài)特征。2、插片法觀看放線菌個(gè)體形態(tài)的方法和操作要點(diǎn)。九、試驗(yàn)要求1放大倍數(shù)。描述菌落特征。十、考核點(diǎn)能否區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲、氣生菌絲、孢子絲和孢子。一、目的要求1、觀看酵母菌的細(xì)胞形態(tài)及出芽生殖方式。2、學(xué)習(xí)把握區(qū)分酵母菌死、活細(xì)胞的原理和染色方法。3、了解酵母菌的個(gè)體和菌落形態(tài)特征，及其與細(xì)菌的區(qū)分。二、根本原理則呈藍(lán)色或淡藍(lán)色。酵母菌的菌落較潮濕，與細(xì)菌菌落較相像，但不透亮，有特別的酒香味。三、試驗(yàn)器材1、菌種：釀酒酵母〔Saccharomycescerevisiae〕的平板培育物〔供給空氣中細(xì)菌培育平板，用于酵母和細(xì)菌菌落形態(tài)的比較觀看。2、染色劑：呂氏堿性美藍(lán)染液，石炭酸復(fù)紅。3、儀器和其他用品：顯微鏡、酒精燈、載玻片、蓋玻片、濾紙片、接種環(huán)、鑷子等。四、試驗(yàn)步驟1、酵母?jìng)€(gè)體形態(tài)及死活細(xì)胞觀看11呂氏堿性美藍(lán)染色液〔0.1%〕混合均勻-蓋上蓋玻片-放置3分鐘-先低倍后高倍鏡下觀看酵母形態(tài)和出芽狀況-30胞。2、菌落形態(tài)觀看認(rèn)真觀看酵母菌菌落，記錄菌落大小、外形、透亮程度、顏色、外表枯燥或潮濕，能否易挑取等特征，留意與細(xì)菌菌落的區(qū)分。五、試驗(yàn)過程中的留意事項(xiàng)1、酵母菌制片時(shí)，當(dāng)菌體與染液混合時(shí)留意不要猛烈涂沫，以免破壞細(xì)胞。2、生理鹽水和染液滴加量均要適中，蓋蓋玻片時(shí)，染液過多易溢出，過少易產(chǎn)生氣泡。蓋玻片緩慢傾斜掩蓋，能避開產(chǎn)生氣泡。3、觀看菌落特點(diǎn)時(shí)，留意其外表是否潮濕、大小和形態(tài)，留意與細(xì)菌菌落的區(qū)分。六、試驗(yàn)結(jié)果1、繪圖說(shuō)明顯微鏡下所觀看到的酵母菌的形態(tài)特征。2、依據(jù)你所觀看到的呂氏美藍(lán)染液作用時(shí)間與釀酒酵母死、活細(xì)胞數(shù)量變化的狀況，填寫表4-1。4-1酵母染色結(jié)果記錄表呂氏美藍(lán)濃度0.1%作用時(shí)間每視野活細(xì)胞數(shù)〔個(gè)〕每視野活細(xì)胞數(shù)〔個(gè)〕3min30min七、思考題在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)分于一般細(xì)菌？八、講授重點(diǎn)1、酵母死活細(xì)胞鑒定原理。2、酵母細(xì)胞的個(gè)體形態(tài)，留意出芽生殖方式是其主要特點(diǎn)。3、怎樣區(qū)分酵母與細(xì)菌菌落。九、試驗(yàn)要求2觀看時(shí)間。描述菌落特征。十、考核點(diǎn)1、無(wú)菌操作是否嫻熟標(biāo)準(zhǔn)2、制片3、顯微鏡操作是否嫻熟標(biāo)準(zhǔn)一、目的要求1、學(xué)習(xí)并把握霉菌的制片技術(shù)。2、了解常見霉菌〔青霉、曲霉、根霉等〕形態(tài)特征和相互區(qū)分。3、了解霉菌菌落形態(tài)特征及其與放線菌、酵母菌和細(xì)菌菌落的相互區(qū)分。二、根本原理殖菌絲，由生殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體〔尤其是生殖菌絲〕及其孢子的形態(tài)特征是分類的重要依行染色，蓋上蓋玻片后直接鏡檢。出假根，上方長(zhǎng)出孢囊梗，頂端膨大成孢子囊，有囊軸、孢囊孢子、囊托。有性生殖產(chǎn)生接合孢子，接枝和輪生組成了簡(jiǎn)單的掃帚狀分枝構(gòu)造。在掃狀枝上，最終一級(jí)分枝為產(chǎn)生串生鏈狀分生孢子的小梗，呈瓶梗狀，著生小梗的細(xì)胞叫?；С止；募?xì)胞叫副枝。分生孢子常為球形、橢圓形，呈藍(lán)綠色?？捎^看?！簿涿咕木涑拭黠@的絲狀體，但與放線菌菌落相比比較疏松，一般呈絨毛狀、顆粒狀、棉絮狀等。三、試驗(yàn)器材1MucorspPenicilliuspAspergillunige的平板培育物。2、染色劑：呂氏堿性美藍(lán)染液或石炭酸復(fù)紅染色液。3、儀器和其他用品：顯微鏡、酒精燈、載玻片、蓋玻片、濾紙片紙、解剖針、鑷子、生理鹽水等。四、試驗(yàn)步驟1、霉菌直接制片及菌體觀看取干靜載玻片，中心滴加一滴染色液，用解剖針從菌落邊緣處挑取少量已產(chǎn)生孢子的霉菌菌絲放在染液中，用解剖針認(rèn)真將菌絲分散開，蓋上蓋玻片。低倍鏡觀看后轉(zhuǎn)高倍鏡觀看。2、透亮膠帶制片法取干靜載玻片，中心滴加一滴染色液，用食指和拇指粘在一段透亮膠帶兩端，使透亮帶呈U形，U上的染液中，并將膠帶兩端固定在載片兩端。低倍鏡觀看后轉(zhuǎn)高倍鏡觀看。3、菌落形態(tài)觀看：認(rèn)真觀看霉菌的瓊脂平板上的菌落，記錄每種霉菌的菌落大小、外形、顏色、外表是否有小黑點(diǎn)名小顆粒，能否易挑取等特征。五、留意事項(xiàng)1、制片時(shí)，取菌和分散菌絲要細(xì)心，要從菌落邊緣取，不要只取大菌落中心的菌絲，否則觀看不到完整菌絲體的構(gòu)造。2、不要攪動(dòng)菌絲體，盡量削減菌絲斷裂及形態(tài)的被破壞，蓋蓋玻片時(shí)避開了產(chǎn)生氣泡。3、假設(shè)視野中只見孢子，不見霉菌的其它局部時(shí)，可對(duì)挑取的霉菌菌絲體，用50%的酒精浸一下，以除去脫落的孢子，再制片、染色和觀看4、觀看菌落特征時(shí)，要選擇分別得很開的單個(gè)較大菌落；5、勿隨便移動(dòng)開蓋，以免孢子飛散污染試驗(yàn)室。六、試驗(yàn)結(jié)果1、拍攝并說(shuō)明所觀看到的四種霉菌的形態(tài)特征。2、依據(jù)你對(duì)瓊脂平板上的放線菌、酵母菌和四種霉菌的的菌落觀看，將結(jié)果記錄在表4-2。菌種菌落大小菌落顏色外表枯燥或潮濕形態(tài)菌種菌落大小菌落顏色外表枯燥或潮濕形態(tài)高度邊緣能否易挑取放線菌酵母菌毛霉根霉曲霉青霉七、思考題1、在進(jìn)展微生物制片時(shí)是否都需要進(jìn)展涂片？為什么？2、黑曲霉和黑根霉在形態(tài)特征上有何區(qū)分？八、講授重點(diǎn)1、四類常見霉菌各自的典型特征2、直接制片觀看法與透亮膠帶法九、試驗(yàn)要求44張?jiān)诟弑剁R下觀看到的霉菌形態(tài)圖，標(biāo)明菌種名稱、總放大倍數(shù)。描述菌落特征。十、考核點(diǎn)1、制片技術(shù)2、顯微鏡操作是否標(biāo)準(zhǔn)嫻熟第六次試驗(yàn)〔4學(xué)時(shí)，1人/組〕微生物的大小和數(shù)量測(cè)定一、目的要求1、學(xué)習(xí)并把握使用顯微測(cè)微尺測(cè)定微生物的大小的方法。2、把握對(duì)不同形態(tài)細(xì)菌細(xì)胞大小測(cè)定的分類學(xué)根本要求，增加對(duì)微生物細(xì)胞大小的感性生疏。二、根本原理12在顯微鏡下來(lái)測(cè)量。用于測(cè)量微生物細(xì)胞大小的工具有目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺。目鏡測(cè)微尺是一塊圓形玻片，在玻片中心把5mm5010mm100物象。由于不同目鏡、物鏡組合的放大倍數(shù)不一樣，目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際表示的長(zhǎng)度也不一樣尺每小格所代表的相對(duì)長(zhǎng)度。鏡臺(tái)測(cè)微尺是中心局部刻有準(zhǔn)確等分線的載玻片，一般將lmm100格，每格長(zhǎng)l0μm〔即0.0lmm〕，是特地用來(lái)校正目鏡測(cè)微尺的。校正時(shí)，將鏡臺(tái)測(cè)微尺放在載物臺(tái)上，由于鏡臺(tái)測(cè)微尺與細(xì)長(zhǎng)度在肯定放大倍數(shù)下校正目鏡測(cè)微尺換上待測(cè)標(biāo)本片，用校正好的目鏡測(cè)微尺在同樣放大倍數(shù)下測(cè)量微生物大小。三、試驗(yàn)器材1、活材料：釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)斜面菌種(菌懸液)2、溶液和試劑香柏油，乙醇乙醚3、儀器和其他用品：顯微鏡、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、蓋玻片、滴管、擦鏡紙。四、試驗(yàn)步驟1、目鏡測(cè)微尺的安裝和校正臺(tái)上，刻度朝上。先用低倍鏡觀看，對(duì)準(zhǔn)焦距，視野中看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度平行，移動(dòng)推動(dòng)器，使兩尺重疊，再使兩尺的“0”刻度完全重合，定位后，為鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度每格長(zhǎng)l0μm，所以由以下公式可以算出目鏡測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度。55l0μm，則目鏡測(cè)微尺上每小格長(zhǎng)度為=5×10μm/5＝10μm用同法分別校正在高倍鏡下和油鏡下目鏡測(cè)微尺每小格所代表的長(zhǎng)度。由于不同顯微鏡及附件的放大倍數(shù)不同〔特定的物鏡、目鏡、鏡筒長(zhǎng)度〕進(jìn)展，而且只能在特定的狀況下重復(fù)使用，當(dāng)更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必需重校正目鏡測(cè)微尺每一格所代表的長(zhǎng)度。2、微生物大小的測(cè)定將酵母菌斜面制成肯定濃度的菌懸液(2)取一滴酵母菌菌懸液制成水浸片。〔缺乏一格的局部估量到小數(shù)點(diǎn)后一位數(shù)〕目鏡測(cè)微尺每格的校正值，即等于該菌的長(zhǎng)和寬。一般測(cè)量菌體的大小要在同一個(gè)標(biāo)本片上測(cè)定10—20同法用油鏡測(cè)定微生物染色標(biāo)本的長(zhǎng)和寬。五、留意事項(xiàng)1、目鏡測(cè)微尺很輕、很薄，在取放時(shí)應(yīng)特別防止使其跌落而損壞；2、觀看時(shí)間線不宜過強(qiáng)，否則難以找到鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度；3、留神進(jìn)展鏡頭的轉(zhuǎn)換，防止接物鏡壓壞測(cè)微尺和損壞鏡頭；4、目鏡測(cè)微尺的安裝方向；5、顯微鏡下鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度線較粗，留意推斷兩線重疊時(shí)承受的標(biāo)準(zhǔn)要全都。六、試驗(yàn)記錄與結(jié)果將試驗(yàn)結(jié)果填入以下表格物鏡目鏡測(cè)微尺格數(shù)鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)物鏡目鏡測(cè)微尺格數(shù)鏡臺(tái)測(cè)微尺格數(shù)目鏡測(cè)微尺每格代表的長(zhǎng)度/〔μm〕10×40×100×目鏡放大倍數(shù)：12345123456789101112131415平均值寬度長(zhǎng)度酵母菌大?。簩挦蘭×長(zhǎng)μm＝結(jié)果計(jì)算 長(zhǎng)μm＝平均格數(shù)×校正值寬μm＝平均格數(shù)×校正值大小表示：寬μm×長(zhǎng)μm七、思考題1、為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必需用鏡臺(tái)測(cè)微尺重對(duì)目鏡測(cè)微尺進(jìn)展校正？2、在不轉(zhuǎn)變目鏡和目鏡測(cè)微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來(lái)測(cè)定同一細(xì)菌的大小時(shí)，其測(cè)定結(jié)果時(shí)候一樣？八、講授重點(diǎn)1、微生物大小是分類鑒定的依據(jù)；2、目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺的工作原理；3、目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺的安裝。九、考核點(diǎn)目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺的安裝和校正試驗(yàn)十一微生物數(shù)量的測(cè)定一、目的要求1、學(xué)習(xí)并把握使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板測(cè)定微生物細(xì)胞或孢子數(shù)量的方法；2、了解光電比濁法的原理；3、學(xué)習(xí)、把握光電比濁法的操作方法。二、根本原理測(cè)定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法很多，顯微直接計(jì)數(shù)法和光電比濁法是較常用的兩種方法。1、顯微計(jì)數(shù)法的使用：顯微計(jì)數(shù)法適用于各種含單細(xì)胞菌體的純培育懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)，常不·霍澤〔PetrofHausser〕細(xì)菌計(jì)數(shù)板。兩種計(jì)數(shù)板的原理和部件一樣，只是細(xì)菌計(jì)數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀看。而血球計(jì)數(shù)板較厚，不能使用油鏡，計(jì)數(shù)板下部的細(xì)菌不易看清。2、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的構(gòu)造和使用原理：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構(gòu)成3區(qū)的刻度有兩種：一種是計(jì)數(shù)區(qū)分為16個(gè)大方格〔大方格用三線隔開〕，而每個(gè)大方格又分成25個(gè)小25〔大方格之間用雙線分開〕，而每個(gè)大方格又分成16方格。但是不管計(jì)數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，即計(jì)數(shù)區(qū)都由4001mm，則計(jì)數(shù)區(qū)的面積為lmm21/400mm2。蓋上蓋玻片后，計(jì)0.1mm0.1mm31/4000mm3?！不蛎靠藰悠贰持形⑸锛?xì)胞的數(shù)量。：1mm3體積=10mm×10mm×10mm=1000mm3所以：1mm31000mm3/1/4000mm3=4×106個(gè)小方格，即系數(shù)K=4×106。ml〔N〕×系數(shù)〔K〕〔d〕。3準(zhǔn)確測(cè)出(圖15-4胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，平板菌落計(jì)數(shù)或細(xì)胞干重測(cè)定等方法。本試驗(yàn)承受血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。光電比濁計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，可以連續(xù)測(cè)定，適合于自動(dòng)掌握。但是，由于光密度或透光擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物承受多少還需要經(jīng)過最大吸取波長(zhǎng)以及穩(wěn)定性試驗(yàn)來(lái)確定。另外，對(duì)于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其