hplc法測定獨(dú)一則顆粒中木草素的含量

hplc法測定獨(dú)一則顆粒中木草素的含量

單味針（無糖）是在提取和其他過程中由獨(dú)裁者phollomathe產(chǎn)品的提取而成的中藥產(chǎn)品。具有活血、鎮(zhèn)痛、活血化瘀、止血于血液抑制等功效。獨(dú)一味中的主要化學(xué)成分為黃酮類化合物:木樨草素,有木樨草素?-7-?O?-?葡萄糖苷、芹菜素?-7-?O?-?新橙皮糖苷、槲皮素和槲皮素?-3-?O?-?阿拉伯糖苷。本品水解后的主要黃酮苷元為木樨草素,是獨(dú)一味中的主要化學(xué)成分。為了控制獨(dú)一味顆粒的內(nèi)在質(zhì)量,我們采用HPLC法,對(duì)其制劑中所含的主要成分木樨草素進(jìn)行了含量測定研究,取得了較為滿意的結(jié)果,可作為獨(dú)一味顆粒的主要質(zhì)量控制指標(biāo)之一。1儀器和試劑盒1.1儀器Waters高效液相色譜儀:1525泵,2487雙通道紫外檢測器,Waters柱溫箱,Empower液相色譜工作站。1.2含量測定木樨草素對(duì)照品(批號(hào):111520-200201),供含量測定用,購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇為美國Tedia色譜純,水為超純水,其它試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1流動(dòng)相及柱溫度參照銀杏黃酮含量測定的色譜條件。色譜柱:PhenomenexLunaC18,4.6mm×250mm,5μm;柱溫:30℃;流動(dòng)相:甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50);檢測波長為350nm;流速:1.0mL/min。2.2檢測波長的選擇取木樨草素對(duì)照品溶液,在200~400nm范圍內(nèi)掃描,結(jié)果在350nm處有最大吸收,故選擇350nm作為檢測波長。2.3供試品溶液的制備取本品,研細(xì),稱取1.0020g,置錐形瓶中,加甲醇25.0mL,稱定重量,超聲提取30min,取出,放冷,甲醇補(bǔ)足失重,濾過,取續(xù)濾液10.0mL,置燒瓶中,加鹽酸2.9mL,90℃水浴回流30min,取出,放冷,轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取濾液為供試品溶液。2.4對(duì)照溶液的制備取木樨草素適量,加甲醇制成每1mL含10μg的溶液,作為對(duì)照品溶液。2.5空白溶液測定按處方中輔料的比例,制備不含獨(dú)一味的空白制劑,按正文方法制成空白溶液,依法測定,結(jié)果空白溶液在與木樨草素對(duì)照品相同保留時(shí)間處未見色譜峰,表明其它成分及輔料無干擾。2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性回歸分析精密吸取上述對(duì)照品溶液(0.01058mg/mL)4,8,12,16,20μL,注入液相色譜儀,測定峰面積,以對(duì)照品的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程(n=5):Y=4.106×106X-16281.947,r=0.99997。線性范圍0.04232~0.2116μg。2.7進(jìn)樣穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液10μL,分別在0,2,4,8,24h進(jìn)樣,測定木樨草素的峰面積,結(jié)果表明24小時(shí)內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。2.8精密度測試精密吸取上述對(duì)照品溶液10μL,注入液相色譜儀,測定木樨草素的峰面積,重復(fù)進(jìn)樣5次,RSD為0.56%。2.9平均含量和rsd照含量測定項(xiàng)下操作,對(duì)同一批號(hào)(批號(hào)020504)樣品5份進(jìn)行測定,結(jié)果平均含量為0.369mg/g,RSD為1.94%。2.10加樣回收及加標(biāo)回收率用加樣回收,精密稱取已知木樨草素含量的同一批號(hào)(批號(hào)020504)的樣品約0.6g,共6份,分別精密加入木樨草素對(duì)照品溶液(0.2002mg/mL)一定量,照含量測定項(xiàng)下操作,平均回收率98.23%,RSD為1.33%。2.11樣品中木草素的含量測定測