乙醇回流法提取姜香臍貼中木香藥材的工藝研究

乙醇回流法提取姜香臍貼中木香藥材的工藝研究

姜香肚臍貼是一種經典的方形“平安丹”制成的抗頭暈運動處方。木香是姜香臍貼中重要組分,善行脾胃之氣滯,“治心腹一切氣,嘔逆反胃”(《日華子本草》)。本實驗以木香烴內酯和去氫木香內酯含量為指標,運用正交設計實驗進行木香醇提工藝的優(yōu)化研究,以縮小劑量、提高質量,為經皮控釋給藥系統(tǒng)的制備提供質量保證。1實驗材料1.1藥品、制劑及儀器木香藥材取于本院中藥房;木香烴內酯(CT)和去氫木香內酯(DL)化學對照品(中國藥品生物制品檢定所,木香烴內酯批號:111524-200503;去氫木香內酯批號:111525-200706)純度>98%;乙醇(本院制劑中心);甲醇(美國fisher公司,色譜純);重蒸水。1.2儀器和檢測方法1050series高效液相色譜儀(美國惠普公司),包括Agilent1050四元泵,G79853A紫外檢測器,Agilent1050色譜工作站;UV2100紫外檢測器(日本島津公司);真空旋轉蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司);SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿有限公司);BS-110S型電子天平(北京賽多利斯天平有限公司);BHS-A006超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)。2方法和結果2.1hplc-pgi-u高效液相色譜法中香烴酯和脫羥基棕櫚樹酯的測定hplc2.1.1色譜柱及流動相采用HPLC法測定。色譜柱:AgilentZORBAXEclipseDBC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),柱溫35℃;流動相:甲醇-水(68∶32);流速:1.0ml/min;檢測波長:225nm;進樣量10μl。2.1.2對照溶液的制備精密稱取木香烴內酯和去氫木香內酯對照品分別為3.8mg和4.8mg,置于10ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻備用。2.1.3微孔濾膜的制備分別精密量取1.0ml木香醇提濃縮液,置50ml容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,超聲30min,甲醇補足至刻度,過0.45μm微孔濾膜,待測。2.1.4回歸方程的測定精密移取上述對照品溶液各4、2、1、0.4、0.2ml,分別置于10ml容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,進樣10μl,木香烴內酯(1)和去氫木香內酯(2)的回歸方程分別為:(1)A1=1.1308C1-1.7289(2)A2=0.9849C2-1.9114木香烴內酯和去氫木香內酯分別在7.6~380μg/ml;9.6~480μg/ml范圍內線性良好。2.1.5方法的精密度試驗分別取木香烴內酯152、76、38μg/ml去氫木香內酯192、96、48μg/ml低、中、高3個濃度的標準溶液,每天分別測定5次,連續(xù)5天,計算日內精密度及日間精密度。結果表明相對標準偏差(RSD)<5%。2.1.6外標法計算含量及回收率取已知含量的木香醇提濃縮樣品溶液1ml9份,按上述“2.1”項下色譜條件測定其含量作為“原有量”,分別加入木香烴內酯和去氫木香內酯標準品各4mg、5mg、6mg,各劑量平行3份,利用外標法計算含量及回收率,回收率在96.86%~103.11%。2.1.7樣品溶液的穩(wěn)定性樣品溶液8小時內穩(wěn)定性良好,RSD<5%。2.2醇提取工藝的優(yōu)化2.2.1正交設計對乙醇濃度、料液比(質量:體積)、提取時間和提取次數進行了4因素3水平的正交實驗,見表1。2.2.2提取實驗方法分別稱取粉碎后的木香藥材18g,按L9(34)正交設計表條件分別進行9次提取。本實驗采用水浴回流,溫度控制在85℃。過濾后分別收集1~9號提取液,減壓回收至近干,1~3號、4~6號、7~9號分別用60%的乙醇、40%的乙醇、80%的乙醇復溶至24ml,待測。2.2.3提取工藝的確定直觀分析表明因素A對結果有極顯著影響,因素D有顯著影響,其水平優(yōu)勢為A3>A1>A2,D2>D1>D3,即最佳乙醇濃度為80%,最佳提取次數為3次;為節(jié)省溶劑用量,選擇溶劑體積的倍數為6倍;為提高提取效率,選擇提取時間為1h/次。故最后確定回流提取最佳工藝為:6倍量80%乙醇,回流提取3次,1h/次。按最佳工藝重復提取,每克木香藥材提取木香烴內酯和去氫木香內酯的含量總和為27.224mg,工藝穩(wěn)定,結果可靠,參見表2。3評價指標的確定木香始載于《神農本草經》,列為上品,主要成分為揮發(fā)油、木香堿、菊糖三類物質。揮發(fā)油是木香的主要有效部位,芳香祛穢、疏通氣機,能有效發(fā)揮抗暈動作用,以木香烴內酯和去氫木香內酯含量最高,為木香的主要活性成分,也是木香質量控制的主要指標。因此本實驗選用木香烴內酯和去氫木香內酯含量作為評價指標較合理。目前中藥新藥