木虱傳試驗(yàn)初報(bào)

木虱傳試驗(yàn)初報(bào)

龍眼病是福建省龍眼產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個(gè)重要問(wèn)題。其病因是一個(gè)多形態(tài)的原核微生物（稱(chēng)為立克次體或細(xì)菌）。木虱(Daphorinacitri)傳播柑桔黃龍病的問(wèn)題,國(guó)內(nèi)已有報(bào)道。廣西柑桔黃龍病研究組、華南農(nóng)學(xué)院植保系植病教研組柯沖、戴月明和Huang,C.H.等的研究結(jié)果,均指出木虱是柑桔黃龍病的傳病媒介。但對(duì)木虱的傳病力問(wèn)題尚有不同的看法。戴月明等在傳毒的木虱唾液腺內(nèi)發(fā)現(xiàn)黃龍病病原體,但木虱的其他內(nèi)部器官是否存在病原體尚未見(jiàn)報(bào)道。進(jìn)一步闡明木虱的傳病力和病原體在其內(nèi)部器官的分布,對(duì)研究本病的流行與防治是十分重要的。為此,1978年以來(lái),在福建省福州市,1982年后又在廣東省饒平縣進(jìn)行木虱傳染黃龍病試驗(yàn),并用電子顯微鏡和超薄切片技術(shù),對(duì)木虱的內(nèi)部器官進(jìn)行檢驗(yàn),現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下;試驗(yàn)2:木合成木病大發(fā)生苗在防蟲(chóng)網(wǎng)室內(nèi)接種木關(guān)于毒一、材料.1.毒源樹(shù):在福州市和饒平縣分別從田間選挖具有典型黃龍病狀(黃梢及葉片斑駁)的3年生福桔和蕉柑病樹(shù),種在2×2×2米50目尼龍紗防蟲(chóng)網(wǎng)室內(nèi),每室種1～2株。2.木虱:分別從福州市和饒平縣柑桔樹(shù)上采集木虱成蟲(chóng),飼養(yǎng)在養(yǎng)蟲(chóng)室內(nèi)的九里香(Murrayapaniculata)或柑桔苗上繁殖的后代。3.指示植物:主要用椪柑實(shí)生苗,少量用其它柑桔苗,種子經(jīng)56℃熱處理50分鐘后,在防蟲(chóng)網(wǎng)室內(nèi)播種育苗。二、試驗(yàn)方法1.直接傳病:從田間黃龍病樹(shù)上采集木虱成蟲(chóng)直接接種在防蟲(chóng)網(wǎng)室里的指示苗或有罩的(玻璃筒罩12×27厘米,紗筒罩14×25厘米)盆裁苗上傳病。2.飼“毒”傳病:木虱成蟲(chóng)經(jīng)毒源樹(shù)飼“毒”2～3周后,接種有罩的盆栽指示苗上傳病。3.自然傳病:把無(wú)罩的盆栽指示苗排列在防蟲(chóng)網(wǎng)室內(nèi)的毒源樹(shù)周?chē)?然后接種木虱傳病。以上試驗(yàn)的指示柑桔苗均帶嫩芽,試驗(yàn)后所有指示苗都經(jīng)噴藥殺蟲(chóng),放置在防蟲(chóng)網(wǎng)室內(nèi)觀察。對(duì)照是不接種木虱的指示柑桔苗。4.電鏡檢驗(yàn):解剖獲“毒”木虱,取出唾脂腺和消化道。在毒源樹(shù)和木虱傳染病苗上取葉片側(cè)脈。按常規(guī)方法進(jìn)行戍二醛及餓酸溶液雙固定,系列酒精和環(huán)氧丙烷脫水,環(huán)氧樹(shù)脂Epon-812滲透和包埋。樣本包埋塊用LKB-V型超薄切片機(jī)切片,經(jīng)鈾鹽和鉛鹽雙染色后,在JEM-100C×Ⅱ型電子顯微鏡下觀察。在光學(xué)顯微鏡下觀察的木虱唾液腺,采用瑞氏染色液染色。傳病試驗(yàn)和樣品采集一、木虱傳病試驗(yàn)1978年以來(lái),在福建省福州市進(jìn)行5次木虱傳病試驗(yàn)<結(jié)果見(jiàn)表1>。共試驗(yàn)329株指示苗,發(fā)病40株,總發(fā)病率12.2%。1978～1979年的第1次試驗(yàn),毒源樹(shù)是蕉柑病樹(shù),指示苗有椪柑、雪柑和福桔。以“直接傳病”方法,試驗(yàn)103株,每株指示苗接種20～30只木虱,到1983年秋,發(fā)病12株,發(fā)病率11.6%,潛育期4～5年。其中,椪柑13株、發(fā)病4株;福桔38株、發(fā)病6株;雪柑62株、發(fā)病2株。1980年的第2次試驗(yàn)毒源樹(shù)是福桔病樹(shù),指示苗有椪柑、尤力克檸檬和墨西哥來(lái)檬。以飼“毒”傳病方法,每株指示苗隔1個(gè)月接種20只木虱,共接5次。每苗累計(jì)接種100只木虱,試驗(yàn)30株。到1983年9月,發(fā)病2株、發(fā)病率6.6%,潛育期為3年。其中,椪柑15株,發(fā)病2株;尤力克檸檬和墨西哥來(lái)檬分別是13株和3株,均未見(jiàn)發(fā)病。1981～1982年的第3次試驗(yàn),毒源樹(shù)是新會(huì)橙病樹(shù),指示苗有椪柑、福桔和興國(guó)甜橙。以“飼毒傳病”方法,每株指示苗接種20～30只木虱,共試驗(yàn)98株,發(fā)病12株,發(fā)病率12.2%,潛育期為1年。其中,椪柑49株,發(fā)病6株;興國(guó)甜橙36株,發(fā)病4株;福桔13株;發(fā)病2株。1983年的第4次試驗(yàn),毒源樹(shù)用福桔病樹(shù),指示苗有椪柑實(shí)生苗和雪柑嫁接苗。以“自然傳病”方法,當(dāng)木虱繁殖高峰時(shí),停在每株指示苗上吸食的木虱成蟲(chóng)多達(dá)200～300只。共試驗(yàn)58株,發(fā)病12株,發(fā)病率20.6%,潛育期為半年。其中,椪柑實(shí)生苗27株、發(fā)病4株,雪柑嫁接苗31株,發(fā)病8株。1984年的第5次試驗(yàn),毒源樹(shù)是福桔和蕉柑病樹(shù),指示苗為椪柑實(shí)生苗。以“自然傳病”方法,當(dāng)木虱繁殖高峰時(shí),停在每株指示苗上吸食的木虱成蟲(chóng)約30只,共試驗(yàn)40株,發(fā)病2株,發(fā)病率0.5%,潛育期為半年以上對(duì)照苗共72株,包括椪柑26株,福桔20株,雪柑15株,興國(guó)甜橙11株,均未見(jiàn)發(fā)病。1982年后,在饒平縣進(jìn)行2次傳病試驗(yàn)(結(jié)果見(jiàn)表2),共試驗(yàn)70株指示苗,發(fā)病33株,總發(fā)病率47.1%。第1次試驗(yàn)時(shí)間是1982年11月到1983年,毒源樹(shù)是蕉柑病樹(shù),指示苗是椪柑。以“直接傳病”方法,每苗接種25只木虱,試驗(yàn)14株,到1983年5月發(fā)病1株,發(fā)病率7.1%,潛育期為7個(gè)月。1983年1月以“自然傳病”方法,木虱繁殖高峰時(shí),停在每株指示苗上吸食的木虱有20～30只,試驗(yàn)6株,當(dāng)年6月發(fā)病4株,發(fā)病率66.6%,潛育期為半年。1983年5月,以“飼毒傳病”方法,每株指示苗接種10只木虱,試驗(yàn)10株,當(dāng)年7～9月發(fā)病5株,發(fā)病率50%,潛育期為2～4個(gè)月。第2次試驗(yàn)時(shí)間是1984年3月,以“自然傳病”方法,試驗(yàn)40株,當(dāng)年9～10月發(fā)病23株,發(fā)病率57.5%,潛育期為8個(gè)月。對(duì)照苗19株,均未見(jiàn)發(fā)病。福州市或饒平縣進(jìn)行傳病試驗(yàn)的發(fā)病苗,均表現(xiàn)與毒源樹(shù)相同的黃梢及葉片斑駁病狀。二、電鏡檢驗(yàn)供檢驗(yàn)的切片標(biāo)本,包括福州和饒平兩地木虱的唾液腺及其周?chē)倔w,消化道的中腸、后腸和馬氏管,及毒源樹(shù)和木虱傳染病苗的葉脈。結(jié)果表明,在采自福州或饒平的傳毒木虱的中腸,后腸和馬氏管的樣本切片上,均未發(fā)現(xiàn)病原體。在傳毒木虱的唾液腺及其周?chē)倔w的切片上(圖1),均發(fā)現(xiàn)病原體。但饒平傳毒木虱唾液腺樣本上的病原體數(shù)量比福州樣本的多,主要分布在外皮層細(xì)胞,內(nèi)皮層細(xì)胞和腺腔內(nèi)(圖2),以外皮層細(xì)胞內(nèi)病原體的數(shù)量最多。傳毒木虱體內(nèi)的病原體的形態(tài)和大小(50～600×170×1600毫微米)與毒源樹(shù)及木虱傳染病苗的葉脈篩管細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)的病原體相同。在饒平的木虱傳染病苗葉脈切片上觀察到的病原體含量也比福州樣本的高。不同地區(qū)、不同組織、hd患者對(duì)木銻傳病力的影響1.1978～1984年在福州市對(duì)329株指示苗進(jìn)行木虱傳病試驗(yàn),發(fā)病40株,發(fā)病率為12.2%,潛育期為半年至5年。而1982～1984年在饒平縣對(duì)70株指示苗進(jìn)行木虱傳病試驗(yàn),發(fā)病33株,其發(fā)病率為47.1%,潛育期為2～8個(gè)月。上述結(jié)果表明,在饒平和福州兩地試驗(yàn)的木虱傳病力的高低和病害潛育期的長(zhǎng)短差別很大。這與國(guó)內(nèi)報(bào)道的研究結(jié)果相符(木虱傳病率為1.3～40%),其潛育期為1個(gè)月至4年。不同地區(qū)木虱的傳病力高低可能與不同地區(qū)的木虱唾液腺內(nèi)病原含量有關(guān)。饒平傳毒木虱唾液腺內(nèi)含病原體的數(shù)量多于福州。這可能是饒平縣的木虱傳病試驗(yàn)的發(fā)病率比福州高的原因。是否還有其他因素影響木虱的傳病力,仍需進(jìn)一步研究。2.毒源樹(shù)葉脈,木虱傳染病苗葉脈以及獲毒木虱唾液腺等標(biāo)本超薄切片鏡檢,均觀察到原核微生物,其菌體形態(tài),大小和膜壁結(jié)構(gòu)等特征均相同。這與過(guò)去報(bào)道的結(jié)果一致。3.用電鏡檢驗(yàn)?zāi)臼膬?nèi)部器官,發(fā)現(xiàn)原核微生物主要分布在唾液腺及其周?chē)闹倔w細(xì)胞內(nèi)。而在唾液腺的外皮層細(xì)胞、內(nèi)皮層細(xì)胞和腺腔內(nèi),都觀察到原核微生物。其中,在外皮層細(xì)胞內(nèi)原