MRM定量技術(shù)單頁

MRM目標(biāo)小分子定量華大采用世界先進(jìn)的MRM質(zhì)譜平臺(tái)QTRAP5500系統(tǒng)，可同時(shí)快速、精確測定樣本中多種目標(biāo)小分子的含量。1.應(yīng)用臨床研究一一大量血樣尿樣中多種生物分子指標(biāo)測定，適于biomarker篩選，致病機(jī)理研究藥代動(dòng)力學(xué)研究——定量測定臨床人體血漿樣本/臨床前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血液樣本中藥物及其代謝產(chǎn)物濃度檢驗(yàn)檢疫——大量樣本中待測分子的流水線式檢測生物小分子定量分析——?jiǎng)又参?，人類樣本中多種感興趣分子(及蛋白)的同時(shí)測定2.技術(shù)優(yōu)勢靈敏度高：通過兩級(jí)離子選擇，排除大量干擾離子，使質(zhì)譜的化學(xué)背景降低，目標(biāo)檢測物的信噪比顯著提高，從而實(shí)現(xiàn)檢測的高靈敏度；低至amol。重現(xiàn)性好：質(zhì)譜信號(hào)重現(xiàn)性差在一定程度上是因?yàn)閺?fù)雜生物樣本基體和共流出組分對(duì)待測分子離子化、質(zhì)譜信號(hào)的抑制及源內(nèi)碰撞碎裂過程的影響導(dǎo)致，而在MRM技術(shù)質(zhì)譜信號(hào)采集中，后兩者的影響被大大降低，因此重現(xiàn)性也相應(yīng)提高；準(zhǔn)確度高：利用MRM技術(shù)的特異性，進(jìn)行連續(xù)增強(qiáng)的離子掃描分析(EPI),得到高分辨的串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)碎片數(shù)據(jù)，與全掃描和中性丟失質(zhì)譜掃描模式相比降低了分析過程中定性結(jié)果的假陽性率，保證了分析的準(zhǔn)確度；通量高：MRM技術(shù)每個(gè)工作循環(huán)能處理多達(dá)300對(duì)母離子-子離子對(duì)。特異性高：利用SelexION技術(shù)(離子淌度差分質(zhì)譜分離技術(shù))，可為高靈敏度的定量與定性分析提供更多一維的選擇性，適合分離同分異構(gòu)體、色譜分離流出雜質(zhì)以及消除高背景噪音的多種應(yīng)用。3.原理MRM技術(shù)基于三重四級(jí)桿質(zhì)譜原理，通過第一重四級(jí)桿(Quadrupole,Q1)檢測到具有特異性的母離子，然后第二重四級(jí)桿(Q2)只將選定的特異性母離子進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)(collision-induced)，最后去除其他子離子的干擾，通過第三重四級(jí)桿(Q3)對(duì)選定的特異子離子進(jìn)行質(zhì)譜信號(hào)的采集。通過母子離子對(duì)的選擇，去除干擾離子，對(duì)目標(biāo)小分子進(jìn)行定性定量分析。原理圖：>七芒出匸一TimePeptide

SelectionFra^mcntaxicnFragmentSelection>七芒出匸一TimePeptide

SelectionFra^mcntaxicnFragmentSelection4.技術(shù)路線方法建立方法建立成功方法建立方法建立成功5.送樣要求標(biāo)準(zhǔn)品要求：客戶自行提供標(biāo)準(zhǔn)品，請(qǐng)注明所用的溶劑、濃度、體積等信息；建議1-10ug/ml.若不能提供純度大于98%的標(biāo)準(zhǔn)品，需要提供目標(biāo)分子的有效含量大于10ug的樣品.樣品要求：生物體液（血漿、血清、尿液等）血漿為采用肝素類抗凝劑抗凝后，除去血細(xì)胞的液體。血清為血液凝固后的上清液。尿液需新鮮，未作任何處理。樣本均需采集后，立即置入-80°C低溫冷凍保存。每個(gè)樣品總體積不低于200卩L,尿液建議5-10mL。組織（植物、動(dòng)物以及昆蟲等）樣品均需新鮮采集后，立即置入液氮中低溫冷凍保存；每個(gè)樣品總重量不低于100mg。微生物樣品必須為經(jīng)過淬滅，即將微生物迅速用液氮或者有機(jī)溶劑（-40°C）滅活，使其代謝瞬間停止，具體操作可進(jìn)一步溝通。每個(gè)樣品在淬滅前樣品總量需保持一致（參考濃度:OD600不低于1.0）。

6.Democase1.25-OHVitaminD檢測IKirff4~kniJ ■■-::!17■--i■■dr二匚丫1怦■嚴(yán)i二wp"t6.Democase1.25-OHVitaminD檢測IKirff4~kniJ ■■-::!17■--i■■dr二匚丫1怦■嚴(yán)i二wp"t：3q.rr 曲|、匚餡白=、戡、”*曾mr，WTWHtwoU￡O-11CDIW*Ttt-wa-w4NHo-

rnI4?-5?InternalstandardIJ^25-OH-Vitamin6:-沖_^25-OH-VitaminD?川廠9ufl ±1 >jOiTi耐，，han2.44種氨基酸democase需求：檢測44種氨基酸的含量

解決方案分別配制氨基酸標(biāo)準(zhǔn)液(1-10ug/ml)Q1Scan確定母離子并優(yōu)化質(zhì)譜的源氣參數(shù)ProductIonScan確定子離子以選定好的母離子、子離子組成母子離子對(duì)并優(yōu)化質(zhì)譜的化合物參數(shù)，提高檢測靈敏度將MRM方法轉(zhuǎn)化為液質(zhì)聯(lián)用方法色譜條件優(yōu)化樣品上機(jī)檢驗(yàn)XICof+MRM(74pairs):326.100/113.100aDD:Pser_ISfromSample1(20121017_Sindard_Test_03)of20121017_Test_03fWTurboS..7.4e67.0e6Max.8.2e4cps6.5e66.0e65.5e65.0e64.5e64.0e63.5e63.0e62.5e62.0e61.5e61.0e69.389.825.0e500XICof+MRM(74pairs):326.100/113.100aDD:Pser_ISfromSample1(20121017_Sindard_Test_03)of20121017_Test_03fWTurboS..7.4e67.0e6Max.8.2e4cps6.5e66.0e65.5e65.0e64.5e64.0e63.5e63.0e62.5e62.0e61.5e61.0e69.389.825.0e500*0.460.621.00 1.70 2.202.492.963.323.723.854.374.504.81 5.565.98 6.526.91Time,min7.FAQQ1：—個(gè)子離子是否會(huì)對(duì)應(yīng)多個(gè)母離子，如何排除假陽性結(jié)果？A1：一個(gè)子離子可能對(duì)應(yīng)多個(gè)母離子，可以通過MRM的全譜掃描分析出子離子唯一對(duì)應(yīng)的母離子；最好要有相關(guān)的數(shù)據(jù)庫支持，若沒有，可以自行篩選，但是工作量可能較大。Q2：如何選擇母子離子對(duì)？A2：—個(gè)母離子可能對(duì)對(duì)應(yīng)多個(gè)子離子，在實(shí)驗(yàn)方法建立過程中，每個(gè)目標(biāo)化合物會(huì)提供兩個(gè)最佳母子離子對(duì)，其中一個(gè)用于定性，同時(shí)會(huì)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的色譜保留時(shí)間排除假陽性結(jié)果。Q3：標(biāo)準(zhǔn)曲線如何制作？A3：選取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液（默認(rèn)8個(gè)），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和標(biāo)準(zhǔn)品MRM信號(hào)響應(yīng)峰面積擬合直線方程。得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。Q4：MRM技術(shù)進(jìn)行質(zhì)譜時(shí)，可以一次監(jiān)測多少個(gè)母子離子對(duì)？是只能對(duì)一個(gè)特定分子監(jiān)測，還是多個(gè)特定分子同時(shí)監(jiān)測？A4：MRM檢測可實(shí)現(xiàn)多個(gè)目標(biāo)分子的同時(shí)檢測，最大限度節(jié)省時(shí)間，提高檢測效率，每個(gè)工作循環(huán)最多能處理300對(duì)母子離子對(duì)，使用ScheduleMRM可達(dá)700對(duì)母子離子對(duì)。Q5：MRM在做定量方面有哪些優(yōu)勢？A5：高通量：能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模樣本的定量分析；高靈敏度：定向分析，排除背景噪音干擾；準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好。Q6：華