cf7l2基因多態(tài)性與2型糖尿病遺傳易感性的關系

cf7l2基因多態(tài)性與2型糖尿病遺傳易感性的關系

t2dm是一種異質(zhì)性遺傳疾病。在國外的許多研究中，tf7l2基因與t2d的發(fā)生密切相關，但尚不清楚中國漢族是否能夠成為主要的2型糖尿病候選人。本研究探討該基因SNPrs7903146、rs12255372在我國漢族人群中的分布情況及與T2DM遺傳易感性的關系。對象和方法一、ho診斷標準1535例無血緣關系江蘇地區(qū)漢族人中,根據(jù)1999年WHO診斷標準確診為T2DM的患者682例,平均年齡63±13歲;糖耐量減低(IGT)者302例,平均年齡53±11歲;正常糖耐量(NGT)者551例,平均年齡46±11歲。二、pcr和fpg檢測參數(shù)1.外周血白細胞DNA抽提:取EDTA抗凝血5ml,常規(guī)酚-氯仿法抽提基因組DNA。2.TCF7L2基因單核苷酸多態(tài)性分析:采用高溫連接酶反應(LDR)技術,引物及探針序列見表1。多重PCR反應條件:20μl反應體系中含10×Buffer2.0μl,Mg2+1.2mmol/L,dNTPs200μmol/L,熱啟動Taq酶1U,上下游引物各0.5μmol/L,模板DNA約100ng。擴增條件:95℃預變性15min;94℃變性30s,59℃退火1min,72℃延伸1min,共35個循環(huán);72℃7min。LDR反應條件:5μl反應體系中含探針各0.1rnmol/L10×Buffer0.5μl,熱啟動Taq酶0.05U,多重PCR產(chǎn)物1μl。循環(huán)條件:94℃2min;94℃40s,60℃2min,共35個循環(huán)。采用ABIPRISM377DNASequencer進行測序反應,Genemapper軟件進行數(shù)據(jù)分析。3.臨床檢測及計算指標:所有受試者測量身高、體重,計算BMI;葡萄糖氧化酶法測定FPG;發(fā)光免疫法測定FIns。三、統(tǒng)計學處理方法計算TCF7L2基因型頻率及等位基因頻率,并確認其符合Hardy-Weinberg平衡。應用SPSS10.0統(tǒng)計軟件,基因型及等位基因頻率比較采用卡方檢驗,Logitic回歸分析風險等位基因參與疾病發(fā)生的相對風險(OR),臨床指標比較用one-wayANOVA方差分析或卡方檢驗。人群歸因危險度(PAR)=[p(OR+1)]/[1+p(OR-1)],其中p為風險等位基因頻率。結(jié)果一、各組的臨床特點各組一般情況及FPG、FIns水平見表2。二、tp/cc結(jié)構(gòu)SNPrs7903146為C/T多態(tài),本研究所有樣本均未發(fā)現(xiàn)TT型突變純合子,故LDR反應產(chǎn)物長度(LDRlength)為82/82bp(CC純合子)或82/85bp(CT雜合子)。SNPrs12255372為G/T多態(tài),本研究所有樣本也沒有發(fā)現(xiàn)TT型突變純合子,故LDR反應產(chǎn)物長度為88/88bp(GG純合子)或88/91bp(GT雜合子)(圖1)。本研究中應用LDR法rs7903146位點基因分型成功率為98.1%(1535/1565),rs12255372位點基因分型成功率為97.8%(1530/1565)。三、糖代謝異常組3.4基因型及等位基因頻率分布1.在1535例漢族人中,共檢測到CT基因型95例,C等位基因頻率為96.9%,T等位基因頻率為3.1%。2.T2DM組與IGT組CT基因型頻率分別為7.2%和7.0%,均高于NGT組的4.5%,組間差異無統(tǒng)計學意義(與NGT組比較,P值分別為0.052和0.135)表3)。3.T2DM組及IGT組T等位基因頻率分別為3.6%和3.5%,均高于NGT組(2.3%),但差異無統(tǒng)計學意義(與NGT組比較,P值分別為0.055和0.141)(表3)。4.糖代謝異常組rs7903146基因型及等位基因頻率分布情況:將T2DM組與IGT組合并為糖代謝異常組,其CT基因型頻率顯著高于NGT組(P=0.044),T等位基因頻率亦顯著高于NGT組(P=0.048),差異有統(tǒng)計學意義(表4);T等位基因參與糖代謝異常發(fā)生的相對風險(OR)為1.589(95%CI=1.000～2.524),人群歸因危險度(PAR)為2.1%。四、t等位基因頻率本研究中共檢測到17個GT突變雜合子,T等位基因頻率僅為0.55%,遠遠低于歐美白種人及日本黃種人,且不構(gòu)成SNP,未進行進一步分析。中國少數(shù)民族糖代謝異常人群的tcf7l2基因TCF7L2基因位于人類染色體10q25,其編碼的蛋白質(zhì)為β連環(huán)素的核受體,是介導WNT信號通路的關鍵蛋白,作為細胞內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控胰升糖素原基因的轉(zhuǎn)錄,從而調(diào)節(jié)腸道L細胞合成胰升糖素樣肽1。2006年Grant等首先報道TCF7L2基因與2型糖尿病的發(fā)生強烈相關,這一結(jié)果隨后在多個人群中得到證實,研究發(fā)現(xiàn)TCF7L2基因參與白種人2型糖尿病發(fā)生的相對風險為1.5～1.6,遠高于PPARγ、KCNJ11、Calpain10等既往較公認的T2DM易感基因(約1.15～1.30)。因此,TCF7L2基因一度被認為是目前繼HLA后糖尿病遺傳學研究領域最重大的發(fā)現(xiàn)。然而,在日本人群中TCF7L2基因盡管也與2型糖尿病的發(fā)生相關,但風險等位基因頻率極低,同時在一些非洲人的研究中并未證實TCF7L2基因參與2型糖尿病的發(fā)生。SNPrs7903146為C/T多態(tài),T為風險等位基因,本研究結(jié)果顯示中國漢族糖耐量正常人群及2型糖尿病人群T等位基因頻率分別為2.3%和3.6%,均顯著低于白種人(分別約為30%和40%),與日本人非常接近,與北京大學、香港及中國臺灣報道的結(jié)果一致。SNPrs12255372為G/T多態(tài),T為風險等位基因,本研究人群T等位基因頻率僅為0.55%,也遠遠低于白種人和日本人。以上結(jié)果提示TCF7L2基因該兩個多態(tài)具有明顯的種族特異性。在本研究中,T2DM人群TCF7L2基因rs7903146位點T等位基因頻率明顯高于NGT人群,但差異無統(tǒng)計學意義(P=0.052),但尚不能完全肯定TCF7L2基因與中國漢族T2DM無關。因為在本研究T2DM人群中T等位基因頻率僅達3.6%,據(jù)此推算需要近千例的樣本量才能達到80%的統(tǒng)計效力,因此如果進一步擴大樣本量可能會得到陽性結(jié)果。同時,香港與中國臺灣的研究發(fā)現(xiàn)TCF7L2基因rs11196218、rs290487與中國漢族人群T2DM相關。本研究在統(tǒng)計上將T2DM人群與IGT人群合并為糖代謝異常組,主要依據(jù)以下兩個理由:其一,本研究中IGT人群與T2DM人群臨床特征相似,T等位基因頻率幾乎一致(分別為3.5%和3.6%);其二,在DM的自然病程中IGT是公認的T2DM前期病變,若不加干預,多數(shù)患者會轉(zhuǎn)歸為T2DM,可近似認為兩者是同一疾病的不同發(fā)展階段,具有同質(zhì)性。合并后結(jié)果發(fā)現(xiàn)糖代謝異常人群TCF7L2基因rs7903146位點CT基因型頻率及T等位基因頻率均顯著高于NGT人群,統(tǒng)計學差異具有顯著性,T等位基因參與疾病發(fā)生的相對危險度達1.589,由于風險等位基因頻率較低,其人群歸因危險度僅達2.1%,也明顯低于歐美白種人。據(jù)此,本研究謹慎地認為TCF7L2基因rs7903146位點T突