食品微生物檢測基礎(chǔ)與常用儀器

食品微生物實驗室基礎(chǔ)與常用儀器目錄食品微生物實驗室概況食品微生物實驗室常用儀器食品微生物實驗室檢測項目[舉例]食品微生物實驗室基礎(chǔ)知識一、食品微生物實驗室概況食品微生物實驗室簡介

食品微生物實驗室主要負責(zé)各類微生物項目的檢測,主要檢測項目有菌落總數(shù)、大腸菌群、霉菌、酵母、乳酸菌、雙歧桿菌、罐頭商業(yè)無菌、致病菌[如沙門氏菌、志賀氏菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌等],

食品微生物實驗室的功能分區(qū).主要分區(qū)主要作用辦公室登記待檢驗樣品;出檢測報告;處理有關(guān)文件資料;放松休息等通用實驗室是進行微生物學(xué)檢驗準(zhǔn)備工作和非無菌操作實驗時使用,也可供理化檢驗及科研工作使用,一般均配備實驗臺、儀器柜、通風(fēng)櫥、凳子等,為方便工作實驗的開展,通常配備常用的儀器[分光光度計、pH計、干燥箱、電爐等]及常用的各種玻璃器皿和常用的各種化學(xué)試劑、藥品等,滅菌室滅菌室主要用于培養(yǎng)基、玻璃器皿、試劑等的滅菌,室內(nèi)應(yīng)備有高壓蒸汽滅菌器、烘箱等滅菌設(shè)備及設(shè)施,準(zhǔn)備室用于培養(yǎng)基的配置和樣品的處理等,室內(nèi)設(shè)有試劑柜、存放器具或材料的專柜、實驗臺、電爐、冰箱、天平和上下水道、電源等,洗滌室用以消毒洗滌待用與已用之玻璃器皿,培養(yǎng)基及污物,室內(nèi)應(yīng)備有器皿柜和試驗臺,加熱器、蒸鍋,洗刷器皿用的盆、桶等,還應(yīng)有各種瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等更衣室是進入無菌室之前工作人員進行更衣、洗手的地方,室內(nèi)設(shè)置無菌室及緩沖室的電源控制開關(guān)和放置無菌操作時穿的工作服、鞋、帽子、口罩等,緩沖室是進入緩沖室之前所經(jīng)過的房間,安裝有鼓風(fēng)機,以減少操作人員進入無菌操作室時的污染,保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,要求比較高的微生物學(xué)檢驗項目如致病菌的檢驗,應(yīng)設(shè)有多個緩沖室,無菌室是微生物學(xué)檢驗過程無菌操作的場所,要求密封、清潔,安裝紫外燈和空調(diào)設(shè)備[帶過濾設(shè)備]及傳遞物品用的傳遞小窗,還應(yīng)配置有超凈工作臺和普通工作臺,恒溫培養(yǎng)室進行微生物培養(yǎng)的房間,通常配備有恒溫培養(yǎng)箱、水浴鍋、厭氧培養(yǎng)箱及振蕩培養(yǎng)箱等,或整個房間安裝保溫、控溫設(shè)備,房間要求保持清潔,有防塵、防噪音等功能,食品微生物實驗室[圖集]培養(yǎng)基制備室培養(yǎng)室滅菌室洗涮間食品微生物實驗室常用儀器超凈工作臺

微生物的培養(yǎng)都是在特定培養(yǎng)基中進行無菌培養(yǎng),那么無菌培養(yǎng)必然需要超凈工作臺提供一個無菌的工作環(huán)境,超凈工作臺的用途是微生物的接種及處理時的無菌操作,生物安全柜微生物實驗中涉及的試劑和樣品微生物有些是有毒的,對于操作人員來說傷害較大,為了防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴散,可以利用生物安全柜對操作人員、樣品及樣品間交叉感染和環(huán)境提供安全保護,培養(yǎng)箱

一、電熱恒溫培養(yǎng)箱：一般控制的溫度范圍為：室溫＋五～六五度,用于一般細菌的培養(yǎng);

二、生化培養(yǎng)箱：一般控制的溫度范圍為：五～五０度,用于細菌、霉菌、微生物的培養(yǎng);

三、厭氧培養(yǎng)箱：用于厭氧微生物的培養(yǎng);

天平天平用于精確稱量各類試劑,實驗室常用的是電子天平,電子天平按照精度不同有不同的級別,移液器用于精密量取各種液體,均質(zhì)器用于從固體樣品中提取細菌,用微生物均質(zhì)器制備微生物檢測樣本具有樣品無污染、無損傷、不升溫、不需要滅菌處理,不需洗刷器皿等特點,是微生物實驗中使用較為方便的儀器,搖床/振蕩器在微生物實驗操作過程中,液體培養(yǎng)基培養(yǎng)細菌時需要在特定溫度下振蕩使用,高壓蒸汽滅菌器用途：培養(yǎng)基、生理鹽水、廢棄物、采樣器、紗布、衣物的滅菌,恒溫干燥箱恒溫干燥箱是用于滅菌和洗滌后的物品烘干,烘箱有不同的控溫范圍,用戶可以根據(jù)實驗需求進行選擇,

恒溫水浴槽

用于培養(yǎng)基等的冷卻保溫

以及某些細菌[如大腸桿菌]

的水浴保溫培養(yǎng),

電爐

用于溶液的快速加熱,微生物固體

培養(yǎng)基的加熱溶化,

顯微鏡生物顯微鏡用于微生物和微小物品結(jié)構(gòu),形態(tài)等的觀察,pH計/酸度計用于配置試劑時精確測量PH值,從而保證配置的溶液的精確性,有時也需要利用pH計測定樣品溶液的酸堿度,菌落計數(shù)器

可協(xié)助操作者計數(shù)菌落數(shù)量,紅外線滅菌器用于接種環(huán)、接種針、剪刀等的滅菌,純水機

實驗中用于試劑、培養(yǎng)基等的配置,冰箱用于實驗室保存試劑和樣品,微生物學(xué)實驗中用到的試劑有些要求是四度保存,有些要求是負二0度保存,實驗人員一定要看清試劑的保存條件,放置在恰當(dāng)?shù)臏囟认卤４?具體來說,不同溫度下保存的物品如下：一、四℃適合儲存某些溶液、試劑、藥品等,二、-二0℃適用于某些試劑、藥品、配好的抗生素等,三、-八0℃適合某些長期低溫保存的樣品、大腸桿菌菌種、感受態(tài)等的保存,常用儀器主要功能天平用于樣品和培養(yǎng)基、試劑等的稱量,一般要求具備精度達到萬分之一的分析天平超凈工作臺為實驗的開展提供一個相對無菌的操作臺,冰箱用于樣品和試劑的存儲高壓蒸汽滅菌器培養(yǎng)基、生理鹽水、廢棄物、采樣器、紗布、衣物的滅菌,紅外線滅菌器進行接種環(huán)、接種針等的滅菌,電熱恒溫干燥箱用于吸管,平皿類玻璃器皿的干熱、滅菌和烘烤,生化培養(yǎng)箱用于微生物的培養(yǎng),電熱恒溫培養(yǎng)箱用于一樣微生物的培養(yǎng),厭氧培養(yǎng)箱用于厭氧微生物的培養(yǎng),水浴鍋用于培養(yǎng)基等的冷卻保溫以及某些細菌[如大腸桿菌]的水浴保溫培養(yǎng),PH計|酸度計用于培養(yǎng)基、試劑等pH的測定和調(diào)整,均質(zhì)器用于固體或半固體樣品的均質(zhì)處理,實驗參考條件：八000~一0000r/min均質(zhì)一~二min,搖床/振蕩器用于試樣的振蕩、混勻,離心機用于收集微生物菌體以及其他沉淀物,離心機有冷凍和常溫之分,有些樣品由于在常溫下不太穩(wěn)定,需要低溫環(huán)境,要視樣品的種類而定,顯微鏡觀察細菌形態(tài)和動力、微生物和微小物品結(jié)構(gòu)的必備儀器,用于微生物的觀察,實驗參考條件：一0×~一00×,菌落計數(shù)器可幫助操作者計數(shù)菌落總數(shù)、大腸菌群等細菌數(shù)量,通過放大,拍照,計數(shù)等方式來準(zhǔn)確的獲取菌落的數(shù)量,紫外燈用于大腸桿菌等的熒光檢查,參考條件：長波紫外光燈,三六六nm,功率≤六W,電爐用于培養(yǎng)基、試劑等的溶解、加熱,常見玻璃儀器及用具一、量器類：移液管：一ml,二ml,五ml,一0ml,二五ml容量瓶：五0ml,一00ml,二五0ml,五00ml,一000ml量筒：容量[ml]一0、二五、五0、一0、二五、五00、一000、二000二、其他常用玻璃器皿培養(yǎng)皿：三.五cm,七cm,八cm,一五cm

燒杯：容量[ml]：三0、五0、一00、一五0、二五0、四00、六00、一000、二000、三000三角瓶：一五0ml,二00ml,二五0ml,五00ml,一L,二L,三L

試管食品微生物實驗室檢測項目[舉例]食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)：儀器配置：天平：感量0.一g;均質(zhì)器;振蕩器;電熱恒溫培養(yǎng)箱;恒溫水浴箱;pH計或pH比色管或精密pH試紙;菌落計數(shù)器;冰箱：二℃~五℃;超凈工作臺,滅菌器,電爐食品微生物實驗室基礎(chǔ)知識一、食品微生物實驗室的分級：

根據(jù)實驗室所處理感染性食品致病微生物的生物危險程度,可把食品微生物實驗室分為與致病微生物的生物危險程度相對應(yīng)的食品微生物實驗室,其中,一級對生物安全隔離的要求最低,四級最高,食品微生物實驗室所檢測微生物的生物危害等級大部分為生物安全二級,少數(shù)為生物安全三級和四級[如霍亂弧菌、鼠疫耶爾森氏菌等],一級感染性微生物：細菌總數(shù)、大腸菌群、糞大腸菌群等;二級感染性微生物：沙門氏菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)毒真菌等;三級感染性微生物：肉毒梭菌、炭疽芽胞桿菌、肝炎病毒等;四級感染性微生物：鼠疫耶爾森氏菌、埃爾托生物型霍亂弧菌等,

二、生物安全柜和超凈工作臺的區(qū)別!

a]生物安全柜是基于層流原理,在操作區(qū)內(nèi)通過高效過濾器送出垂直向下流動的潔凈空氣,在操作區(qū)前后形成負壓區(qū),以防止柜內(nèi)氣溶膠外逸,按其對人員、環(huán)境和受試樣本的保護程度可將其分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級,正面開放的Ⅰ級和Ⅱ級生物安全柜,與規(guī)范的微生物學(xué)技術(shù)一起使用時,可以為實驗室人員及臨近環(huán)境提供相當(dāng)水平的防擴散作用;Ⅱ級生物安全柜還能提供防護,以免柜內(nèi)的微生物擴散至外界環(huán)境;Ⅲ級生物安全柜可以為實驗室人員、公眾和環(huán)境提供最大程度的保護,b]超凈工作臺亦是基于層流原理設(shè)計,通過高效過濾器可在操作臺的局部空間形成無塵無菌狀態(tài),它對操作者沒有保護作用,但所形成的局部凈化環(huán)境可避免操作過程污染雜菌的可能,故其只能應(yīng)用于非危險性微生物的操作,如用于藥品、微生物制劑、組織細胞等的無菌操作,三、菌落總數(shù)：

食品檢樣經(jīng)過處理,在一定條件下[如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等]培養(yǎng)后,所得每g[mL]檢樣中形成的微生物菌落總數(shù),

衛(wèi)生學(xué)意義：

一、作為判定樣品被污染程度的標(biāo)志;

二、用作觀察樣品中細菌的性質(zhì)和繁殖動態(tài);

三、對樣品進行衛(wèi)生學(xué)綜合評價時提供科學(xué)依據(jù),四、大腸菌群：

定義：在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌,衛(wèi)生學(xué)意義：

一、是評價衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo),作為食品中糞便污染指標(biāo)：

二、食品中檢出大腸菌群,表明該食品有糞便污染,即可能有腸道致病菌的存在,因而也就有可能通過污染的食品引起腸道傳染病的流行,大腸菌群數(shù)的高低,表明了糞便污染的程度,也反映對人體健康危害性的大小,五、革蘭氏染色

細菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色,而經(jīng)碘液媒染后,用酒精脫色,在一定條件下有