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DB22DB22/T3090—2019綿羊幼畜超排技術(shù)規(guī)程Juvenileinvitroembryotransfertechnologystandardsregulationsonsheep吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)由吉林省畜牧業(yè)管理局提出并歸口。123間隔12h間隔12h栓第14天，手術(shù)法暴露供體卵巢，用含有2mL吸卵緩沖每孔30枚～40枚，培養(yǎng)條件為38.5℃,5%CO2，95%空氣，飽和濕度，成熟時(shí)間為24h。4CO2培養(yǎng)箱中上游孵育獲能處理20min～30min，顯微鏡下觀察精子將成熟培養(yǎng)24h的卵丘—卵母細(xì)胞復(fù)合體移入含0.2%透明質(zhì)酸酶的Hepes-TCM199溶液中?！?05個(gè)/mL。受精條件為38.5℃,5%CO2，95%空氣，飽和濕度，受精時(shí)間20h～24h。件為38.5℃,5%CO2，5%O2，90%N2，飽和濕度。每孔20枚～30枚胚胎，再進(jìn)行胚胎鑒定和分級(jí)，將2～4細(xì)胞期胚胎培養(yǎng)24h，轉(zhuǎn)入預(yù)先在CO2培養(yǎng)箱中平衡2h以上的四孔細(xì)胞培養(yǎng)皿中，每孔培養(yǎng)條件為38.5℃,5%CO2，5%O2，90%N2，飽和濕度。培養(yǎng)48h后間隔6h～8h觀察胚胎發(fā)育56

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