DB11T 1804-2025 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 繁育與遺傳監(jiān)測(cè)

ICS65.020.30CCSB44

DB11北 京 市 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB11/T1804—2025代替DB11/T1804—2020實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育與遺傳監(jiān)測(cè)Laboratoryanimal—Breedingandgeneticmonitoring2025-04-01發(fā)布 2025-07-01實(shí)施北京市市場(chǎng)監(jiān)督管理局 發(fā)布DB11/T1804—2025目 次前言 II1范引文件 1語(yǔ)定義 1略語(yǔ) 2傳類命原則 2殖4傳5附錄A（范） 實(shí)動(dòng)物星DNA標(biāo)遺檢測(cè)8附錄B（范） 實(shí)斑魚SNP遺標(biāo)的測(cè)方法 27附錄C（范） MHC倍型驗(yàn)和驗(yàn)直測(cè)序測(cè)30參考35IDB11/T1804—2025前 言本文按GB/T《準(zhǔn)工導(dǎo)則 第部分標(biāo)化件結(jié)起草規(guī)草。本文件代替DB11/T1804—2020《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育與遺傳監(jiān)測(cè)》，主要技術(shù)變化如下：見(jiàn)5、67A；（見(jiàn).2.本文件由北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)、中關(guān)村科技園區(qū)管理委員會(huì)提出并歸口。本文件由北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)、中關(guān)村科技園區(qū)管理委員會(huì)組織實(shí)施。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：DB11/T828.3—2011、DB11/T1053.3—2013、DB11/T1461.1—2017DB11/T1461.2—2017DB11/T1461.3—2017、DB11/T1461.4—2018DB11/T1461.5—2018；——2020年發(fā)布為DB11/T1804—2020；——本次為第二次修訂。IIDB11/T1804—2025實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育與遺傳監(jiān)測(cè)范圍本文件規(guī)定了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳分類及命名原則、繁殖方法和遺傳檢測(cè)。）（GB14923 GB/T2416東北細(xì)毛羊GB/T3157中國(guó)荷斯坦牛GB/T19166中國(guó)西門塔爾牛GB/T19376波爾ft羊種羊GB/T22283長(zhǎng)白豬種豬GB/T22284大約克夏豬種豬GB/T22285杜洛克豬種豬GB/T22909小尾寒羊GB/Z34792驗(yàn)物 引種術(shù)程N(yùn)Y/T14 NY625 NY/T1339肉牛育肥良好管理規(guī)范NY/T1446種公牛飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1673畜禽微衛(wèi)星DNA遺傳多樣性檢測(cè)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1901雞遺傳資源保種場(chǎng)保種技術(shù)規(guī)范NY/T2662準(zhǔn)養(yǎng)場(chǎng) 奶牛NY/T2665準(zhǔn)養(yǎng)場(chǎng) 肉羊下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1實(shí)驗(yàn)物 laboratoryanimal經(jīng)人工飼育，對(duì)其攜帶的微生物和寄生蟲實(shí)行控制，遺傳背景明確或者來(lái)源清楚，用于科學(xué)研究、1DB11/T1804—2025教學(xué)、生產(chǎn)和檢定以及其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物。3.2實(shí)驗(yàn)群 experimentalpopulation以遠(yuǎn)交方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體。3.3封閉群 closedcolony不引進(jìn)外部動(dòng)物、在群體內(nèi)隨機(jī)選擇種動(dòng)物進(jìn)行繁殖，以維持有限雜合度的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群。3.4近交系 inbredstrain一個(gè)動(dòng)物群體中,任何個(gè)體基因組中98.6%以上的座位為純合的品系。注:經(jīng)典近交系經(jīng)至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成。品系內(nèi)所有個(gè)體都可追湖到起源于第20代或以后代數(shù)的一對(duì)共同祖先。經(jīng)連續(xù)20代以上親子交配與全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系數(shù)(inbreedingcoefficient)大于98.6%。3.5單倍群體 haplotypepopulation通過(guò)近親交配繁殖方式培育出的單倍體基因型一致的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體。3.6雜交群 hybrids由兩個(gè)不同近交系雜交產(chǎn)生的后代群體。注：子一代簡(jiǎn)稱F1?？s略語(yǔ)下列縮略語(yǔ)適用于本文件。PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction）SNP:單核苷酸多態(tài)性(SingleNucleotidePolymorphism)STR:短串聯(lián)重復(fù)序列（ShortTandemRepeat）根據(jù)不同品種品系動(dòng)物及個(gè)體間遺傳差異將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為實(shí)驗(yàn)種群、封閉群、近交系、單倍型群體和雜交群，具體符合表1的要求。2DB11/T1804—2025表1 實(shí)驗(yàn)物傳類表實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體遺傳分類實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)白豬實(shí)驗(yàn)種群實(shí)驗(yàn)大約克夏豬實(shí)驗(yàn)杜洛克豬實(shí)驗(yàn)種群實(shí)驗(yàn)中國(guó)荷斯坦牛實(shí)驗(yàn)西門塔爾牛實(shí)驗(yàn)波爾ft羊?qū)嶒?yàn)小尾寒羊?qū)嶒?yàn)東北細(xì)毛羊?qū)嶒?yàn)狨猴實(shí)驗(yàn)貓實(shí)驗(yàn)雪貂實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪沙鼠封閉群實(shí)驗(yàn)雞實(shí)驗(yàn)鴨實(shí)驗(yàn)鵝實(shí)驗(yàn)鴿實(shí)驗(yàn)小型豬實(shí)驗(yàn)斑馬魚實(shí)驗(yàn)劍尾魚實(shí)驗(yàn)樹(shù)鼩實(shí)驗(yàn)小型豬近交系實(shí)驗(yàn)斑馬魚實(shí)驗(yàn)劍尾魚實(shí)驗(yàn)雞單倍型群體實(shí)驗(yàn)鴨在原有的品種品系名稱前面加上實(shí)驗(yàn)，如實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)白豬。封閉群由2～4近交系以大寫英文字母或大寫英文字母加阿拉伯?dāng)?shù)字命名，符號(hào)應(yīng)簡(jiǎn)短。以單倍體基因型英文名稱（或縮寫）加英文字母和阿拉伯?dāng)?shù)字命名，符號(hào)應(yīng)簡(jiǎn)短。3DB11/T1804—2025雜交群“×”（如、F2等引種選擇雙親健康、無(wú)遺傳疾病、繁殖性能好、體貌符合品種特征的動(dòng)物作為種用動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)豬按照NY625的規(guī)定進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)西門塔爾牛按照NY/T1339和NY/T1446規(guī)定執(zhí)行，實(shí)驗(yàn)中國(guó)荷斯坦牛按照NY/T14和NY/T2662的規(guī)定進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)羊應(yīng)按照GB14923和NY/T2665的規(guī)定進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)狨猴和雪貂應(yīng)按GB14923的規(guī)定進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)貓按照雌雄5:1以上比例進(jìn)行繁殖。封閉群引種作為繁殖用種子的封閉群動(dòng)物應(yīng)三代以內(nèi)無(wú)共同親代并符合GB/Z34792對(duì)封閉群種用動(dòng)物的要求。封閉群實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪沙鼠、實(shí)驗(yàn)鴿和實(shí)驗(yàn)樹(shù)鼩引種數(shù)量不少于25對(duì)。封閉群實(shí)驗(yàn)小型豬引種數(shù)量不少于13對(duì)（循環(huán)交配方式繁殖）或25對(duì)（隨機(jī)交配方式繁殖）。封閉群實(shí)驗(yàn)魚（斑馬魚和劍尾魚）引種數(shù)目不少于100尾。實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨和實(shí)驗(yàn)鵝引種規(guī)模按照NY/T1901執(zhí)行。其他封閉群實(shí)驗(yàn)動(dòng)物引種規(guī)模按照GB14923規(guī)定執(zhí)行。封閉群實(shí)驗(yàn)小型豬、實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪沙鼠、實(shí)驗(yàn)鴿和實(shí)驗(yàn)樹(shù)鼩繁殖方法按照GB14923的規(guī)定執(zhí)行。實(shí)驗(yàn)雞、實(shí)驗(yàn)鴨、實(shí)驗(yàn)鵝應(yīng)按照NY/T1901的規(guī)定進(jìn)行。近交系引種作為繁殖用種子的近交系動(dòng)物應(yīng)符合GB/Z34792對(duì)近交系種用動(dòng)物的要求。（foundationstock）（pedigreeexpansionstock）（productionGB149234DB11/T1804—2025引種作為繁殖用種子的單倍型群體動(dòng)物按照GB/Z34792的規(guī)定執(zhí)行。以全同胞或半同胞兄妹交配方式進(jìn)行。雜交群將不同品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的親代雌性與親代雄性雜交，即可得到F1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。遺傳滿足以下要求：——體貌符合品種特征；——群體遺傳符合品種特征；——遺傳質(zhì)量檢測(cè)合格。每12個(gè)月至少進(jìn)行一次檢測(cè)。抽樣從每個(gè)種群中隨機(jī)抽取非同窩成年實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血液或其他組織，雌雄各半。抽樣數(shù)量按照表2規(guī)定執(zhí)行。表2 實(shí)驗(yàn)群封群傳測(cè)抽數(shù)量群體大?。ㄖ?頭/羽）抽樣數(shù)量（只/頭/羽）＜100≥15≥100≥3030只。表3 近交實(shí)動(dòng)遺檢抽樣群體大?。ㄖ?頭/羽/尾）抽樣數(shù)量（只/頭/羽/尾）＜100≥6≥100≥群體數(shù)量×6%5DB11/T1804—2025DNASNP表4 遺傳測(cè)法用驗(yàn)物群體實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體遺傳分類檢測(cè)方法執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)或方法實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)白豬實(shí)驗(yàn)種群群體遺傳結(jié)構(gòu)評(píng)估按照GB/T22283的規(guī)定執(zhí)行實(shí)驗(yàn)大約克夏豬按照GB/T22284的規(guī)定執(zhí)行實(shí)驗(yàn)杜洛克豬按照GB/T22285的規(guī)定執(zhí)行實(shí)驗(yàn)中國(guó)荷斯坦牛按照GB/T3157的規(guī)定執(zhí)行實(shí)驗(yàn)西門塔爾牛按照GB/T19166的規(guī)定執(zhí)行實(shí)驗(yàn)波爾ft羊按照GB/T19376的規(guī)定執(zhí)行實(shí)驗(yàn)小尾寒羊按照GB/T22909的規(guī)定執(zhí)行實(shí)驗(yàn)東北細(xì)毛羊按照GB/T2416的規(guī)定執(zhí)行實(shí)驗(yàn)狨猴微衛(wèi)星DNA標(biāo)記檢測(cè)法按照附錄A的規(guī)定執(zhí)行實(shí)驗(yàn)貓實(shí)驗(yàn)雪貂實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)爪沙鼠封閉群實(shí)驗(yàn)雞實(shí)驗(yàn)鴨實(shí)驗(yàn)鵝實(shí)驗(yàn)鴿實(shí)驗(yàn)小型豬實(shí)驗(yàn)斑馬魚實(shí)驗(yàn)劍尾魚實(shí)驗(yàn)樹(shù)鼩實(shí)驗(yàn)小型豬近交系實(shí)驗(yàn)斑馬魚SNP分子標(biāo)記檢測(cè)法按照附錄B的規(guī)定執(zhí)行實(shí)驗(yàn)劍尾魚實(shí)驗(yàn)雞單倍型群體直接測(cè)序檢測(cè)法按照附錄C的規(guī)定執(zhí)行實(shí)驗(yàn)鴨當(dāng)實(shí)驗(yàn)豬、實(shí)驗(yàn)牛、實(shí)驗(yàn)羊體貌特征與品種品系特征相符合時(shí)，判定合格，否則判定不合格。DNA實(shí)驗(yàn)狨猴、實(shí)驗(yàn)貓和實(shí)驗(yàn)雪貂適用于微衛(wèi)星DNA標(biāo)記檢測(cè)法，具體按照附錄A規(guī)定執(zhí)行。6DB11/T1804—2025（DNAA單倍型實(shí)驗(yàn)雞和實(shí)驗(yàn)鴨采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）產(chǎn)物直接測(cè)序法，具體按照附錄C規(guī)定執(zhí)行。DNA近交系實(shí)驗(yàn)小型豬采用微衛(wèi)星DNA標(biāo)記檢測(cè)法，具體按照附錄A規(guī)定執(zhí)行。SNP近交系實(shí)驗(yàn)魚采用SNP分子標(biāo)記檢測(cè)法，具體按照附錄B規(guī)定執(zhí)行。7DB11/T1804—2025附 錄 A（規(guī)范性）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微衛(wèi)星DNA標(biāo)記遺傳檢測(cè)方法DNA基因組DNA提取方法按照NY/T1673的規(guī)定執(zhí)行。25個(gè)和10A.1表A.1 實(shí)驗(yàn)型微星點(diǎn)引物列退溫、位基數(shù)等基分范圍位點(diǎn)引物序列(5′～3′)所在染色體Mg2+濃度（mM）退火溫度(℃)等位基因數(shù)等位基因范圍適用群體SW974GGTGAAGTTTTTGCTTTGAACCGAAAGAAATCCAAATCCAAACC12.05817129～175封閉群S0091TCTACTCCAGGAGATAAGCCAGATCAGTGACTCCATGCACAGTTATGA21.5551496～174封閉群SW240AGAAATTAGTGCCTCAAATTGGAAACCATTAAGTCCCTAGCAAA21.5581192～114封閉群SW1066GCAGGATGAACCACCCTGCTCTTGAGGCAACCTGCTG32.06019166～214封閉群SW1089TTTTCCCCTTCACTCACCCGATCAAAGTCCCTTACTCCGG41.55810142～190封閉群S0005TCCTTCCCTCCTGGTAACTAGCACTTCCTGATTCTGGGTA52.05411204～244封閉群SW1057TCCCCTGTTGTACAGATTGATGTCCAATTCCAAGTTCCACTAGC62.05814142～191封閉群SW632TGGGTTGAAAGATTTCCCAAGGAGTCAGTACTTTGGCA72.0549148～173封閉群OPNCCAATCCTATTCACGAAAAAGCCAACCCACTTGCTCCCAC82.05912138～170封閉群SW29AGGGTGGCTAAAAAAGAAAAGGATCAAATCCTTACCTCTGCAGC82.06112133～187封閉群SW911CTCAGTTCTTTGGGACTGAACCCATCTGTGGAAAAAAAAAGCC92.06014151～178封閉群SW511AAGCAGGAATCCCTGCATCCCCAGCCACCAGTCTGAC91.56212161～196封閉群8DB11/T1804—2025表A.1 驗(yàn)型微星位的物列退溫度等基數(shù)等基因布圍續(xù)）位點(diǎn)引物序列(5′～3′)所在染色體Mg2+濃度（mM）退火溫度(℃)等位基因數(shù)等位基因范圍適用群體SWr158TCCAATTCAACTCCTGGCTCGAATGTGCACATACCACATGC102.06018158～200封閉群SW951TTTCACAACTCTGGCACCAGGATCGTGCCCAAATGGAC101.55814108～142封閉群SW271TTCCAGTGGCTTTCTGTGCCATTCATTCCCAGTGAAACTTG111.55813111～144封閉群S0386TCCTGGGTCTTATTTTCTATTTTTATCTCCAACAGTAT112.04812155～178封閉群S0068CCTTCAACCTTTGAGCAAGAACAGTGGTCTCTCTCCCTCTTGCT132.06210210～256封閉群SWr1008ACAGCCACCAACAGTGTTTGGAACTTCCATATGCTGCAAGTG132.0621698～256封閉群S0007TTACTTCTTGGATCATGTCGTCCCTCCTCATAATTTCTG142.05415142～192封閉群SW857TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACCGATCCTCCTCCAAATCCCAT142.05816129～173封閉群SWr312ATCCGTGCGTGTGTGCATCTGGTGGCTACAGTTCCGAT151.56411116～136封閉群SW81GATCTGGTCCTGCACAGGGGGGGCTCTCAGGAAGGAG161.5608128～144封閉群SWr1120CAAATGGAACCCATTACAGTCCACTCCTAGCCCAGGAGCTTC171.56011147～178封閉群S0062AAGATCATTTAGTCAAGGTCACAGTCTGATAGGGAACATAGGATAAAT182.05612144～204封閉群S0218GTGTAGGCTGGCGGTTGTCCCTGAAACCTAAAGCAAAGX1.55411158～196封閉群CGAATAGACATTATGTAAGTTGCTGATGAACTTTCACATCCCTAAGGTCGT1q2.55512250～320近交系SW240AGAAATTAGTGCCTCAAATTGGAAACCATTAAGTCCCTAGCAAA2P1.555896～115近交系SW72ATCAGAACAGTGCGCCGTGTTTGAAAATGGGGTGTTTCC3P1.5558100～116近交系S0005TCCTTCCCTCCTGGTAACTAGCACTTCCTGATTCTGGGTA5q3.05510205～248近交系S0090CCAAGACTGCCTTGTAGGTGAATAGCTATCAAGTATTGTACCATTAGG12q1.5554244～251近交系SW769GGTATGACCAAAAGTCCTGGGTCTGCTATGTGGGAAGAATGC133.0557106～140近交系9DB11/T1804—2025表A.1 驗(yàn)型微星位的物列退溫度等基數(shù)等基因布圍續(xù)）位點(diǎn)引物序列(5′～3′)所在染色體Mg2+濃度（mM）退火溫度(℃)等位基因數(shù)等位基因范圍適用群體SW857TGAGAGGTCAGTTACAGAAGACCGATCCTCCTCCAAATCCCAT141.5556144～160近交系S0355TCTGGCTCCTACACTCCTTCTTGATGGTTTGGGTGGGTGCTGAAAAATAGGA153.05514243～277近交系SW24CTTTGGGTGGAGTGTGTGCATCCAAATGCTGCAAGCG171.555896～121近交系S0218GTGTAGGCTGGCGGTTGTCCCTGAACCCTAAAGCAAAGX1.5558164～184近交系20數(shù)、等位基因范圍和退火溫度按照表A.2的規(guī)定執(zhí)行。表A.2 實(shí)驗(yàn)猴衛(wèi)位的物序、火度等基因及位因布位點(diǎn)引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍CAJA1GAAGACGGGGGCGTAAATATGTGGTGGCTCATACCTGAA609386～402CAJA6GAGCACCAAGATTGGCATTTCCAATACACATCGGCTTTGA606235～243CAJA10ACCCTACATTGCCAAATTGCGCCTCTTCTGAGGGAAGTGA606198～208CAJA11CGAAAGTGTGCTCAACAGGAAAGGTGGGATTCTGAAAGCA605254～262CAJA13AGCACATGAACACCCAGGTTAGTGAAAACAGGCTGGGAGA606378～390CAJA14AGCACATGAACACCCAGGTTAGTGAAAACAGGCTGGGAGA606216～232CAJA17GGGCACTCCAAGGTCAGTAATTGCCCCCTGCTTATTGTAG6010382～400CAJA18ACTTGCAGGCCAGTGTTCTTTGGACAGCTGAGGTTTCCTT638315～329D10qham51CGGGAATTCAAAGGCGTTCTAGGAGGATTTCGCATTTGGG606103～117Ham157CAGCCAACATGCTTCTCAGTGGTGGAATAAATCAGGCTACCAG606193～205Ham60TGCTCTAGAGGTTCCACTCTGGGCATGTTACCTAACCTCTCTG588139～165Ham65TGAGAACGACTGCTCTAGGTTGGAAGTGGCTTCATTCCTG5810177～20110DB11/T1804—2025表A.2 驗(yàn)猴衛(wèi)位點(diǎn)引序、火度、位因及位因分范（）位點(diǎn)引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍Ham181CAATGAGATGTGTCCAAGTGAGCCAAACACCCAATATGCAGT587213～239Ham184GGCGCAGCTCATCTCTTCACCCTCCCCAGCATCTTCAAGAC637150～172Ham125GTGGGTAAATGCTGCCATCTGTTTCAACTCCTGCGTCTAGTC598187～201Ham101AGACCAAGCATCTTCTTGGACCACCTTTAAACTGCTGTGGTTG596281～297Ham61CAAAGATGCTTGGGGATGGAAAGATCTTGCAGGGCGTAAG6110263～287Ham32GCCCAAATCCTGTTTGACACCCACCTAGATCATCGAGAGTAG587183～199Ham100GACCAACTCCAAAGCTAGCAGGTAACATGCTCTCGACCTT588244～262Ham26GCAAATTCGTGAAGCATTCCAACAGTTGGATGAGTTCCAG598182～20628基因數(shù)、等位基因范圍和退火溫度按照表A.3的規(guī)定執(zhí)行。表A.3 實(shí)驗(yàn)爪鼠衛(wèi)位的引序、火度等位因及位因布范圍位點(diǎn)引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍AF200942CAGGCACCCCCAGTTTGTCTACACAGGCTGAGGATGT5415180～215AF200943GGCTCCTGATTCTACATTTCTCAACCATTGGCAACTCTC5717154～181AF200944GCTGGGCTTTAATGTTTATTTGGTGGCTCACACTTTCTGT5419113～134AF200946TTTCTGGGGTCTCTTTCTCTCCCATTCTGCAAGACTCCTCT5728195～242AF200945AGTCCCTATTACATCCACAAGTTATCCTGCAAAGCCTAAG5712166～186AF200941TGGGTCCTTTGGAAGATGGCTTAAAATGAATCACTTA5524115～153AF200947GACAGAGTGGGAGGGGTATGTTGGCAAGTTTGGTTTGTTTGA5517188～212D16Mit7CTGCCACCCCTGAACCATTACTACAAGATGTGGGGCATGA52.615480～529D16Mit26CAGGAATAAAGTATAATGGGGTGCCCCATGATCAGTTGGGTTTT49.19207～26611DB11/T1804—2025表A.3 驗(yàn)爪鼠衛(wèi)星點(diǎn)引序、火溫、位因及位基分范（）位點(diǎn)引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍D1Mit362TGTGTGACTGCTTGGAAGATGCTGAGTCCCTAAAGTTGTCCTTG50.016476～504D8Mit184GTTTTTCTCAGAAGAATGCAATATACCTGAGAAGAATGAGGAATTTGTCC48.111196～229D7Mit33TCTGAAGTTTGAATGGTTGTGGTTTCAAAATCGTGTCATTTTGC47.315376～394D6Mit37AAAGAATTGCACATCCACTGGTGCCCAGGATGTTTAAGAGG47.014246～265D5Mit31TCAGGGCTCTCTAAGGGACAACTATGCAGCCACCAAATCC53.19318～350D12Mit201CCACTGGATGGCAACAGACTATGTGTTTCAAAACCACACTCG53.118245～283D2Mit22GCTCCCTTTCCTCTTGAACCGGGCCCTTATTCTATCTCCC49.19173～192D15Mit124AGGAGAGAACCAACTGCTGCGGCCAGTGATGACTTTATAATGC59.817232～258D11Mit36CCAGAACTTTTGCTGCTTCCGTGAGCCCTAGGTCCAGTGA58.715234～256D7Mit71CCACCTGGAATACATGTAACCCTAAGATCCAAGAGATGGGTTAAGC49.111165～200D2Mit76CTCAAGTCTCACTTCTCTGCACAACACCCAAGGTTGACCTCTG47.319281～328D3Mit130AACACATGAAACGTGTGCGTTGATAGGCATGCTTAAGCCC50.611213～251D19Mit1AATCCTTGTTCACTCTATCAAGGCCATGAAGAGTCCAGTAGAAACCTC49.115133～165D11Mit35AGTAACATGGAACATCGACGGTGCTCAGCTCTGGAGTGCTA48.113287～307D17Mit38CCTCTGAGGAGTAACCAAGCCCACAGAGTTCTACCTCCAACCC52.614195～251DXMit17CCTGTTTGGGCACCTAGATTTAATAACCCATGTTTTCTGTGGG48.19234～251D8Mit56ACACTCAGAGACCATGAGTACACCGAGTTCACTACCCACAAGTCTCC50.69100～126D10Mit66TCTCCTTGGAATTCACAGCCGACATTCCTTAAGAGAGACAGTCC54.714272～298D13Mit1TCATTCAACATTCTGTCAATCGCACAACAAGGTTAACCTCTAGACA49.014104～13212DB11/T1804—202521A.4表A.4 實(shí)驗(yàn)貂衛(wèi)位的物序、位因及位基分范圍位點(diǎn)引物序列（5′～3′）等位基因分布范圍重復(fù)等位基因數(shù)MpuA4w1CACTTCCTCCCATGGACACTCAAAGTCTCCCACCCTATGC152～174(AC)23MpuA10w4TGGCCTATATGTGCAGATGACTGTTTGTCTTGTACCCTCTGACC154～158(AC)13(AC)7MpuA121w7ACTGCCATCAGGTCATCTAGGGGGTAGACACCTGGCTCAAG105～129(CA)14MpuA129w7GGCCTCTGAACACATAGTTGAAGTACAGAATGGAAGGATCTG197～205(CA)13MpuA212w1CCCTATGAGGGCATGTTTGTCTGCCATGTTTCCACTGGT137～153(TG)13MpuA223w3GAAGACAGCACCCCAGAGTCTGGTTGCCAAGAACTAGCAG213～239(GT)19MpuA229w4GGGTAGGACGTGCTTAAAGATGAGCCCTCAAAGCCTCTTCTC107～139(GT)11(TG)7MpuA231w6CCTCTGGTAACCATCTGTTTGTCTTCAAGATGTTCAGTGTGGA182～224(GT)15MpuB1w4TCCACTACCTGGCCTCATTCACCTCAGGCTCCACTCTCAG178～190(CT)15(CA)8(AC)5(AC)11MpuB6w2TGGGTGTAGAGCATGTTTGGTGCCTATTCCAGGTACCTCAT156～164(TC)18MpuB9w7CGTTACCAACTGTGGCTGTGTGCCTGGGCCTGTGATTA180～192(GA)18MpuB12w3AGTCGACAGATGAGTCCACGAAGTGTCACACATGGCAGGATCT175～179(AG)11(AC)8(AC)7MpuB112w5CCATTACAAGTGCTTGGAGACATGGAACATGCTGGAAATTGT161～165(AG)14MpuB202w3TCTCCTCCTCCTCCTCCTTCATGAGATTGACCGTGCATCA164～168(CTC)5(GA)14MpuB209w2TGCTTCTCCCTCTGACTGCTCCGCCCAAGTATCCCTAAAT119～125(CT)16MpuB217w3TTCCCTGCTTGTGCTCTCTTTGGGGTAAGGGTAGGTATGC126～144(TC)5(TC)17MpuC4w7CTGGCCCTATCACATACATATTCAGGAAGTATACTCATGCCTGCAA147～163(TCCA)9MpuC102w3GGGTGGATGGGTGAGTAGGTACCTTCCCACATTCCATCCTT119～135(TGGA)713DB11/T1804—2025表A.4 驗(yàn)貂衛(wèi)位點(diǎn)引序、位因數(shù)等基分范（續(xù)）位點(diǎn)引物序列（5′～3′）等位基因分布范圍重復(fù)等位基因數(shù)MpuD207w5CAGGTGAAGAAGTCCCTCTGTCTTGGTTCTGACCATTTGGA188～214(CT)10(ATAG)7MpuD209w4GAACAGCAAGTAGTCCAACTCTCAGTTGGATCCTTTCCATCACC165～185(TATC)7MpuD231w2TTTGGGTTCCACAGTAGGTGATGCTCTCAATCCATGCTCA132～160(GATA)937退火溫度按照表A.5的規(guī)定執(zhí)行。表A.5 實(shí)驗(yàn)微星點(diǎn)擴(kuò)條件染體位點(diǎn)引物序列(5′～3′)染色體Mg2+濃度（mM）退火溫度(℃)FCA123CTTCACACTGCGAGAGGACTTCTGACAGGCTCCAGGTTACTA11.557FCA1062CTTCACACTGCGAGAGGACTTCTGACAGGCTCCAGGTTACTA11.558FCA522GTTTGAAATTATGGCTTCCCAACTTCTGGAGAACAAGAGGGAAAAGTB11.554FCA275TCACTCCTGGACTTAACCATCAGTGCTATTGACGAAGGGGCAGB21.557FCA848CTCCTTCACCAAAGGCTGGATGGACATTCTGGAAATGCGGAGB31.557FCA664AGAAAAATGACTACCGACATGGTTGAGTGCGGCTACTATCTGGGC11.556FCA346AATGCCTAGGTAGCACTGTCCCCCAAGTCACCCTCCTGTTGC21.558FCA920CTAGTTGAAGGGGCCAGCACTCTGTCCAGCCCATAGGTGTD11.559FCA221TGGCCCATTAAGCAAGAAGGTTGGCTATGCCAGCAGTTGAAD31.557FCA1014CTGGCAAGAAGTCCACTGGGCATGGCTCCTGAGGTCATGTE31.558FCA1015CTCCAGTGCCCATACGTTGTTGGCCACAAAGATGGTTGTTCE31.557FCA1016GTCACTAAGTGGTGACAGAGCAAACGTTTGAAAGGTGTGCCTF11.556FCA1030CGCCCGCAAAAAGACTCAAGGGACGCCCACTAGCCAAATAF11.558FCA1315CCTGCATCAGTTGATTCCTTGTGGACCATCAGAATGCAGCTCF21.55814DB11/T1804—2025表A.5 驗(yàn)微星點(diǎn)的增件染體布（）位點(diǎn)引物序列(5′～3′)染色體Mg2+濃度（mM）退火溫度(℃)FCA823AGGGTGTGCTAGAACTAGCTGGCATTTAGAGGTTCAGGACTGGGB11.558FCA770TCAAGAGTCTTTGCTCAAGGGTTTACTTAGGACTGACAGGGCAA11.556FCA559GCCAAAATGTTCAAGAGTGGTTTTGGCTTGATGAGCATCAB11.555FCA976TCCATTTACCTGGGAAATTCCACCCTCATGTCTTGGCAATCD41.555FCA1240TCCTGATGTGGCAGTTAAACCGCATGCCTTGAACCTTTCATD21.558FCA176GGAAACTTGGAAAGCAAAACCTCCACAGTTGGAGTTCTTAAGGA11.558FCA045TGAAGAAAAGAATCAGGCTGTGGTATGAGCATCTCTGTGTTCGTGD41.558FCA723TGAAGGCTAAGGCACGATAGACGGAAAGATACAGGAAGGGTAA11.558FCA085GGTCCTCACGTTTTCCTATGTCTGTATGAGATGCGGTE21.558FCA084TAGGTGAATGTTGGGATTTATGGAACTGAAGACCAAATTGATGAGA11.555FCA210TGAGCCACCTAGGCACTCTTAGAAGCATCCAGTGACAATGGB41.559FCA453AATTCTGAGAACAAGCTGAGGGATCCTCTATGGCAGGACTTTGA11.560FCA672AAGTTGCTTGCACACACTGCTCCAAGAGCCTTTTCAGTTAGGF21.560FCA1056GGTGTGAGGGCCTATTCTGAGGATGTCTCCCTTGACTGGTB41.558FCA1239AAAAGCCCTGACACCCAAGCTTGACCTTAATTGCTCATTGGD21.558FCA700CCCTTAAAATCGCAGCTCTGAATCCAAGGAAAACAGGCCTB11.558FCA742TCAATGTCTTGACAACGCATAAAGGATTGCATGACCAGGAACD41.556FCA678TCCCTCAGCAATCTCCAGAAGAGGGAGCTAGCTGAAATTGTTA11.556FCA096CACGCCAAACTCTATGCTGACAATGTGCCGTCCAAGAACE21.55815DB11/T1804—2025表A.5 驗(yàn)微星點(diǎn)的增件染體布（）位點(diǎn)引物序列(5′～3′)染色體Mg2+濃度（mM）退火溫度(℃)FCA075ATGCTAATCAGTGGCATTTGGGAACAAAAATTCCAGACGTGCE21.558FCA149CCTATCAAAGTTCTCACCAAATCAGTCTCACCATGTGTGGGATGB11.558FCA220CGATGGAAATTGTATCCATGGGAATGAAGGCAGTCACAAACTGF21.558FCA229CAAACTGACAAGCTTAGAGGGCGCAGAAGTCCAATCTCAAAGTCA11.55829A.6表A.6 實(shí)驗(yàn)微星點(diǎn)引序列退溫、位因數(shù)等基分范圍位點(diǎn)引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍MCW0029GTGGACACCCATTTGTACCCTATGCATGCAATTCAGGACCGTGCA63.88139～188ADL0293GTAATCTAGAAACCCCATCTACATACCGCAGTCTTTGTTC53.96106～120ADL0317AGTTGGTTTCAGCCATCCATCCCAGAGCACACTGTCACTG58.58177～219GCT0016TCCAAGGTTCTCCAGTTCGGCATAAGGATAGCAACAG52.26111～148ADL0304GGGGAGGAACTCTGGAAATGCCTCATGCTTCGTGCTTTTT53.97138～161LEI0074GACCTGGTCCTGACATGGGTGGTTTGCTGATTAGCCATCGCG58.56221～243ADL328CACCCATAGCTGTGACTTTGAAAACCGGAATGTGTAACTG53.95107～120GGANTEClGCGGGGCCGTTATCAGAGCAAGTGCAGGGCGCTCCTGGT65.07139～194LEI0094*CAGGATGGCTGTTATGCTTCCACACAGTGCAGAGTGGTGCGA56.07176～211MCW0330TGGACCTCATCAGTCTGACAGAATGTTCTCATAGAGTTCCTGC58.56217～287LEI0141CGCATTTGATGCATAACACATGAAGGCAAACTCAGCTGGAACG52.25221～245MCW0087ATTTCTGCAGCCAACTTGGAGCTCAGGCAGTTCTCAAGAACA58.59268～28916DB11/T1804—2025表A.6 驗(yàn)微星點(diǎn)的物列退溫、等基數(shù)等基分布圍續(xù)）位點(diǎn)引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍MCW0347GCTTCCAGATGAGCTCCATGGCACAGCGCTGCAGCAACTG52.03121～149ADL176TTGTGGATTCTGGTGGTAGCTTCTCCCGTAACACTCGTCA58.59183～200ADL0201GCTGAGGATTCAGATAAGACAATGGCYGACGTTTCACAGC58.57111～151GGNCAMZOGTCACTAGGTTAGCAGCATGGCTGGATACAGACCTCGATT56.01234GGAVIRAGAGATGGTGCACGCAACCTCGAGCACTTTCTGGCAGAGA60.7386～89MCW0063GGCTCCAAAAGCTTGTTCTTAGCTGAAAACCAGTAAAGCTTCTTAC53.98116～149ADL185CATGGCAGCTGACTCCAGATAGCGTTACCTGTTCGTTTGC58.59116～142GGMYCCGAGGCGCTCTGCGAGTTTATGGGGACCTCTGGCTCTGAC62.45139～151LEI0094GATCTCACCAGTATGAGCTGCTCTCACACTGTAACACAGTGC53.96250～283GGVITCAGCCATCATTCAGGGCATCTGATGTCCTGAGTGATGCTCA58.5286～90ADL0292CCAAATCAGGCAAAACTTCTAAATGGCCTAAGGATGAGGA58.56110～136GGVITIIG*GGCAGGTTTCTAATGCCTGACCCATCGTTTCAACTGTATG56.02186～189ADL166TGCCAGCCCGTAATCATAGGAAGCACCACGACCCAATCTA58.56131～154MCW0014AAAATATTGGCTCTAGGAACTGTCACCGGAAATGAAGGTAAGACTAGC58.59172～195GGCYMA*AGCGAGGCGCTCTGCGAGTTGGGCACCTCTGGCTCTGACC64.65140～153MCW0402ACTGTGCCTAGGACTAGCTGCCTAAGTCTGGGCTCTTCTG56.015141～229STMSGGHU2-1ACTTAATATGTGTGAGGTGGCGTTCTCACAATTGCATTAGC53.92235～23829A.717DB11/T1804—2025表A.7 實(shí)驗(yàn)微星點(diǎn)引序列退溫、位因數(shù)等基分范圍位點(diǎn)引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍APL2GATTCAACCTTAGCTATCAGTCTCCCGCTCTTGGCAAATGTCC58.54115～125APL579ATTAGAGCAGGAGTTAGGAGACGCAAGAAGTGGCTTTTTTC557118～227APH09GGATGTTGCCCCACATATTTTTGCCTTGTTTATGAGCCATTA58893～188APH11GGACCTCAGGAAAATCAGTGTAGCAGGCAGAGCAGGAAATA58.52183～185APH18TTCTGGCCTGATAGGTATGAGGAATTGGGTGGTTCATACTGT583179～324AY258ATGTCTGAGTCCTCGGAGCACAATAGATTCCAGATGCTGAA58.1990～161AY264GCAGACTTTTACTTATGACTCCTTAGCCCAGTGAAGCATG58.111112～328AY314CTCATTCCAATTCCTCTGTACAGCATTATTATTTCAGAAGG50.33135～250CAUD001ACAGCTTCAGCAGACTTAGAGCAGAAAGTGTATTAAGGAAG55.52234～390CAUD002CTTCGGTGCCTGTCTTAGCAGCTGCCTGGAGAAGGTCT60.84175～231CAUD004TCCACTTGGTAGACCTTGAGTGGGATTCAGTGAGAAGCCT60.83162～290CAUD005CTGGGTTTGGTGGAGCATAATACTGGCTGCTTCATTGCTG60.83180～300CAUD006ATGGTTCTCTGTAGGCAATCTTCTGCTTGGGCTCTTGGA63.58183～248CAUD007ACTTCTCTTGTAGGCATGTCACACCTGTTGCTCCTGCTGT60.86100～208CAUD010GGATGTGTTTTTCATTATTGATAGAGGCATAAATACTCAGTG50.39180～300CAUD011TGCTATCCACCCAATAAGTGCAAAGTTAGCTGGTATCTGC50.36137～222CAUD012ATTGCCTTTCAGTGGAGTTTCCGGCTCTAAACACATGAATG63.59182～286CAUD014CACAACTGACGGCACAAAGTCTGAGTTTTTCCCGCCTCTA58.13136～200CAUD026ACGTCACATCACCCCACAGCTTTGCCTCTGGTGAGGTTC60.89134～19618DB11/T1804—2025表A.7 驗(yàn)微星點(diǎn)的物列退溫、等基數(shù)等基分布圍續(xù)）位點(diǎn)引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍CAUD027AGAAGGCAGGCAAATCAGAGTCCACTCATAAAAACACCCACA665100～180CAUD028TACACCCAAGTTTATTCTGAGACTCTCCAGGGCACTAGG55.58153～220CAUD031AGCATCTGGACTTTTTCTGGACACCCCAGGCTCTGAGATAA51.410140～187CAUD032GAAACCAACTGAAAACGGGCCCTCCTGCGTCCCAATAAG58.1996～206CAUD034TACTGCATATCACTAGAGGATAGGCATACTCGGGTTTAG55.59160～296CAUD035GTGCCTAACCCTGATGGATGCTTATCAGATGGGGCTCGGA63.57174～282CMO211GGATGTTGCCCCACATATTTTTGCCTTGTTTATGAGCCATT557112～205CMO212CTCCACTAGAACACAGACATTCATCTTTGGCATTTTGAAG583186～27214A.8表A.8 實(shí)驗(yàn)微星點(diǎn)引序列退溫、位因數(shù)等基分范圍位點(diǎn)引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍Ans02TTCTGTGCAGGGGCGAGTTAGGGAACCGATCACGACATG587202～230Ans07GACTGAGGAACTACAATTGACTACAAAGACTACTACTGCCAAG586236～246Ans02TTCTGTGCAGGGGCGAGTTAGGGAACCGATCACGACATG587202～230Ans07GACTGAGGAACTACAATTGACTACAAAGACTACTACTGCCAAG586236～246Ans17ACAAATAACTGGTTCTAAGCACAGAGGACTTCTATTCATAAATA544111～123Ans18GTGTTCTCTGTTTATGATATTACAACAGAATTTGCTTGAAACTGC583229～237CKW47AACTTCTGCACCTAAAAACTGTCATGCTGAGGTAACAGGAATTAAAA626211～221APH13CAACGAGTGACAATGATAAAACAATGATCTCACTCCCAATAG554163～17819DB11/T1804—2025表A.8 驗(yàn)微星點(diǎn)的物列退溫、等基數(shù)等基分布圍續(xù)）位點(diǎn)引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍APH20ACCAGCCTAGCAAGCACTGTGAGGCTTTAGGAGAGATTGAAAAA6013135～155Bcaμ5AGTGTTTCTTTCATCTCCACAAGCAGACCACAATCGGACCACATATTC624197～201Bcaμ8CCCAAGACTCACAAAACCAGAAATATGAAAGAAGAGTTAAACGTGTGCAA587155～164TTUCG1CCCTGCTGGTATACCTGAGTGTCTACACAACAGC583113～115G-Ans25CACTTATTAATGGCACTTGAAAGTTCTCTTGTCACAACTGGA624224～270G-Hhiμ1b?ATCAAAGGCACAATGTGAAATAGTAAGGGGGCTTCCACC606163～221G-Bcaμ7TAGTTTCTATTTGCACCCAATGGAGTAGTTTCTATTTGCACCCAATGGAG606164～174G-CAUD006ATGGTTCTCTGTAGGCAATCTTCTGCTTGGGCTCTTGG5613152～21016A.9表A.9 實(shí)驗(yàn)微星點(diǎn)引序列退溫、位因數(shù)等基分范圍位點(diǎn)名稱引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍UU-Cli02TGGGCAAGGTACACTTTTAGGTCTTTATGCTCCCCCTTGAGAT614158～170UU-Cli06TTTGAAAAACATGGATTGTGCAATTTGCAGAGGGTGAGTGG564140～145PG5GTTCTTGGTGTTGCATGGATGCAGTTACGAAATGATTGCCAGAAG592262～266C26L9(1265223)CAAAGCTGCTGACGTGAATCAAAGAGACGCTCCATGCAAAAG594467～472UU-Cli14CAGAACGTTTTGTTCTGTTTGGTCTTGCTGCAGTCTTCATCC585265～292C12L1(532572)GTTGTTTGGCTGAGTGGACGTCAACCAGGGGAATTGGCAG623126～136C12L4(906353)GCTGCTGTCTTCTTCATTGGGTTAAAACCTCCCGTCTCCCTG605210～250CliμD11CCAATCCCAAAGAGGATTATACTGTCCTATGGCTGAAGTG58478～9820DB11/T1804—2025表A.9 驗(yàn)微星點(diǎn)的物列退溫、等基數(shù)等基分布圍續(xù)）位點(diǎn)名稱引物序列（5′～3′）退火溫度（℃）最大等位基因數(shù)等位基因分布范圍C26L10(1404758)GCTGTCAGGTATCAGCCACAATCAGACCCACGAAAGCTGTAA597211～226C26L4(568923)CAACCCCATGTGGGTGAGACCACCACCACGTGGGACATC636357～432PG4CCCATCTCCTGCCTGATGCCACAGCAGGATGCTGCCTGC644136～170UU-Cli12CGCCAGACTGTATTGTGAGCAGCATGGCTGTTCTTTGAGG619231～265CliμT47ATGTGTGTTTGTGCATGAAGATGAAAGCCTGTTAGTGGAA565183～214CliμD32GAGCCATTTCAGTGAGTGACAGTTTGCAGGAGCGTGTAGAGAAGT606136～158UU-Cli07GCTGCCTGTTACTACCTGAGCCTGGCCATGAAATGAACTCC614277～310C26L1（20390）AGGAGCCTACACTGGGTTTTCTGTAGCTCTGCAATCAGCCT604250～2685A.10表A.10 常用驗(yàn)馬微星子標(biāo)的傳引物名稱位點(diǎn)引物序列（5’～3）品系片段長(zhǎng)度（bp）ABTULFWIK本地短尾Z24LG15CACCTTCACGGTGAGTAGCAGTGGAATGGTGTGACTAATGTCA150150150Z928LG18CAGTCCAGGCTGAACATTCAACACCTTCGGCAGTTTTCAC134，94134，126Z1059LG7AACAGGTGACAGAGCACACGGGGAGAGGGCAGGACAATAT150/122150/122Z1265LG6ATATGTGCTGCTCATGATGAGTAACAGACGAAGGGTGAAGGA90~110bp90~110bpZ1637LG8GGCTTTTGGATGAAGGTTGAGCGGAATCACAATGGCAGCAGA143，105133，103Z3725LG3ACTAAATCGCACTTCAGCAGCGGGTGTCCTCACATCAGCTGCA262，256，248248Z3782LG19AATTCTGGGGGGTAATTCTGGCAAGGGGGCTAAACCTTCAACTG200，901701209021DB11/T1804—2025表A.10 常實(shí)斑微衛(wèi)分標(biāo)的傳征（引物名稱位點(diǎn)引物序列（5’～3）品系片段長(zhǎng)度（bp）ABTULFWIK本地短尾Z4299LG5AGGAATGCGCTATGGGACGACACATCTGCCACTGAACCGG370，260，230260，2302860300，260，190Z5223LG15AACAGAGCCGATCTGCCACCAGCACAGCGGAGGAAATAAAGC1781178，150Z9384LG19CCGACTGGAGAAGACCTGAGAGCATAATCAGACAACCGGG134，177，190，134，177，190134，1790134，1790134，177，190，134，177，19010PCRA.11表A.11 實(shí)驗(yàn)鼩衛(wèi)位的稱、物列PCR反的退溫、離濃度位點(diǎn)引物序列(5′～3′)等位基因分布范圍（bp）等位基因數(shù)退火溫度(℃)濃度（mM）TBC16135-1677511.5TBC19AGGGAACCAAATGAACAAGTCACCGAAGTCACAACC196-2086581.5TBC23GCTTTGTCACTTTCCTTCCCTATGCGCTCGTGGCTATTTT166-26216552.0TBC25GTGCTCTTCTCAGCGTTT386-4268592.0TBC26CACCAGCAAGGTAACTCC206-2366551.5TBC27GTTAAGGCACTGGACATTGTGAACCCACAAATAATCTA220-2463571.5TB6AGACAGAATGCAAGAAATCAC418-4324561.5TG4TGAAAACTGGCAATTCATATGCCAATCCTTTTTCGTTAGTTTTGTG134-1524571.5JS22CAATGTCCTGGTGGTTATGGGAAGTGGTCACTCTGCAATCC149-1687581.5JS188ACACACACAAAACTCATTTTATCCTCTACACGAATGTGCCAACC182-1905581.5PCRPCR22DB11/T1804—2025PCR總反應(yīng)體積為15μL,其中含10×PCRbuffer:1.5μL，上下游引物(100pmol/μL)各1μL，4×dNTP100μmol/L:1μL,Taq酶1U:1μL,50ng～100ngDNA:1μL(ddH2O):8.5μL。PCR95℃預(yù)變性，4min；94，30s（PCR，30s；35；727min4PCRPCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳以及凝膠成像系統(tǒng)拍照。STR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)確保擴(kuò)增出目的片斷后，選擇分別以FAM、HEX、TAMRA標(biāo)記的三個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增產(chǎn)物，以1：3：5體積比混合，取1μL上樣進(jìn)行STR掃描。STR掃描結(jié)果可出現(xiàn)兩種波形：一種為純合基因型，只有一個(gè)主波；另一種為雜合基因型，有兩個(gè)主波。由群體遺傳分析軟件讀出每個(gè)樣本在每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的擴(kuò)增片斷大小。每個(gè)位點(diǎn)的等位基因根據(jù)擴(kuò)增片斷從小到大順序排列記錄為a,b,c,d等。將所有樣本的每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的基因型以ab,bb等形式運(yùn)用軟件的數(shù)據(jù)文件，計(jì)算樣品在各微衛(wèi)星位點(diǎn)上的基因頻率、平均觀察等位基因數(shù)、平均有效等位基因數(shù)（Ne）、香隆指數(shù)、平均雜合度（H）等。（chi-squaretest）實(shí)驗(yàn)雪貂采用群體平均雜合度進(jìn)行評(píng)價(jià)，當(dāng)群體平均雜合度在0.5～0.7時(shí)，該群體判為合格，否則判為不合格。封閉群（0.5～0.7合格。近交系23DB11/T1804—2025所有樣品檢測(cè)位點(diǎn)的等位基因都符合品系的特征,按照表A.12～A.14的規(guī)定執(zhí)行，沒(méi)有新的等位基因出現(xiàn)為合格實(shí)驗(yàn)小型豬近交系,否則判為不合格。表A.12 近交五山型近系培過(guò)中傳量制的衛(wèi)座及勢(shì)位基因位點(diǎn)等位基因及頻率頻率合計(jì)CGA片段189199203293頻率0.0230.8720.0230.0811.000SW769片段105129頻率0.0930.9070.97SW857片段150158頻率0.1630.8371S0355片段0.750.138頻率1061140.888SW72片段106114頻率0.5880.2380.825S0090片段241247頻率0.7560.0120.756S0218片段173179181頻率0.0120.5470.4190.547SW24片段104頻率0.6310.631表A.13 近交廣巴小豬培育程遺質(zhì)控的微星位優(yōu)等基因位點(diǎn)等位基因及頻率頻率合計(jì)CGA片段271277297頻率0.490.2810.2291SW769片段123127頻率0.1940.8061SW857片段146154頻率0.1460.5730.719S0005片段216226頻率0.2230.660.883SW240片段9498104頻率0.5310.3330.1150.979S0355片段258260262頻率0.0830.4270.4270.854SW72片段110120頻率0.6980.0830.781S0090片段241243247249頻率0.0320.1170.4890.1170.60624DB11/T1804—2025表A.13 近系西小型和育程遺質(zhì)量制微星位優(yōu)勢(shì)位因續(xù)）位點(diǎn)等位基因及頻率頻率合計(jì)S0218片段167173179187頻率0.1150.740.1250.0210.854SW24片段102104頻率0.750.0210.75表A.14 近交貴小豬育程中傳量制微星座及勢(shì)位位點(diǎn)等位基因及頻率頻率合計(jì)CGA片段271283285305頻率0.0110.1360.3640.2950.795SW769片段105121129133139145頻率0.2910.2670.0930.1510.0810.1160.907SW857片段156160166頻率0.1670.4520.2020.821S0005片段202204214頻率0.5580.2440.1860.988SW240片段96102頻率0.2270.1820.409S0355片段252254272274頻率0.1830.0980.110.3410.732SW72片段102112118頻率0.170.6250.0450.841S0090片段247249253頻率0.0450.580.3750.955S0218片段181187195197頻率0.1510.1860.0230.50.709SW24片段100104108112頻率0.1140.1140.2160.1360.466實(shí)驗(yàn)魚近交系實(shí)驗(yàn)魚（斑馬魚和劍尾魚）檢測(cè)結(jié)果判定按照表A.15的規(guī)定執(zhí)行。表A.15 近交實(shí)魚測(cè)果檢測(cè)結(jié)果判 斷處 理與標(biāo)準(zhǔn)參考位點(diǎn)完全一致未發(fā)現(xiàn)遺傳變異，遺傳質(zhì)量合格有一個(gè)位點(diǎn)的分子與標(biāo)準(zhǔn)參考位點(diǎn)不一致可疑增加檢測(cè)位點(diǎn)數(shù)目和增加檢測(cè)方法后名為同源突變系兩個(gè)或兩個(gè)以上位點(diǎn)的標(biāo)記基因與標(biāo)準(zhǔn)參考位點(diǎn)不一致不合格淘汰，重新引種25DB11/T1804—2025根據(jù)判定結(jié)果對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體出具遺傳質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告。26DB11/T1804—2025附 錄 B（規(guī)范性）實(shí)驗(yàn)斑馬魚SNP遺傳標(biāo)記的檢測(cè)方法DNA基因組DNA提取方法按照NY/T1673的規(guī)定執(zhí)行。PCR按照附錄A中A.3.1的方法進(jìn)行。SNP取10μLPCR產(chǎn)物用25μL的水稀釋，并用槍頭吹打混勻。然后取1μL為模板，用表B.1中的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物測(cè)序，最后使用PolyPhred程序軟件分析SNP標(biāo)記的測(cè)定結(jié)果。SNP選擇位于近交系斑馬魚25對(duì)染色體、劍尾魚24對(duì)染色體上的10個(gè)以上位點(diǎn)，作為遺傳檢測(cè)的SNP標(biāo)記。SNP分子標(biāo)記的名稱及常用近交系斑馬魚的SNP分子標(biāo)記的特征符合表B.1的要求。表B.1常用實(shí)驗(yàn)斑馬魚品系SNP分子標(biāo)記位點(diǎn)染色體：位點(diǎn)SNPIDABTU引物（5′～3′）dbSNPID01:018595529DS043503-5TCGGCGATTCCTACAATTCTTCGAAAGTCCTGTGTTGAAGGTGss4983890601:049159399DS036502-3GCGGCACATCGTCATATAATGCACAATACTGGAATGACACTGGss4983864002:025012321DS042554AGGAAGTCCATGTTGGCATCTACAGTGTTGAGAAACGGTCAGGss4982492802:027720831DS040180-3TGAACACTGGCACGTACACAAGGGGAATCGTGAACTCGTAACss4983878803:048073042DS032197-8ATTCATTGTAATAGCAGTAATGACGTGCAATGTTTGTTTCAGACCss4983845403:048073049DS032197-7GATCATTGTAATAGCAGTAATGACGTGCAATGTTTGTTTCAGACCss4983845327DB11/T1804—2025表B.1常用實(shí)驗(yàn)斑馬魚品系SNP分子標(biāo)記位點(diǎn)（續(xù)）染色體：位點(diǎn)SNPIDABTU引物（5′～3′）dbSNPID04:003254191DS036864-20TGCTGCTGTTACTGGGTCAGTGACTGCATGATAATGCCAAACss4983868304:003254203DS036864-19GACTGCTGTTACTGGGTCAGTGACTGCATGATAATGCCAAACss4983868205:015736030DS002778-2TCAAACGTGGCAGAAATGAAACCCCATTTGTAGAAGAATCCAGss4983773805:025044903DS009184-1TCTTGCATTAGAGCCTTATCCTGTGTTCTTATGCTCTGTGACTGss4983783906:001111132DS014169-1TGGAGCAGCGATACTCACACAGTTCACTAGGTAAGACTCTTGAAGCss4983792906:024875905DS032220-5CTTCTCTTTAATGTTGGACTGCTGCCTTTAATCCATAGCCTTAGCss4983847007:018909158DS033959CTGACACATACCTGGCACTCGTCTCCTGAGAAGGATTCCACss4981668407:019711091DS023709CTCAGTTGAGAAGGGAGAAACGGCTGTTGGGTTGACTTGCss4980684708:010818674DS023589-1GAAGGAAAGACACCATCACTGAGCTTTAGGCGCAATAACAAGGss4983812608:026974745DS030842-1ATTATCTCGGTTAACGGGAGTGGCAGGGATATTTGACTTGAATGss4983838909:050927124DS048415-2GATTCCCAAATACTGAATCTGCGGATCTGTTCATCGAGGTTCss4983896410:012029287DS027483-3TGCATTTAATAAAGGAATCACTACTCTTAGTCAGTTTACTAACCTTGCTTTss4983827710:012029405DS027483-4TCCATTTAATAAAGGAATCACTACTCTTAGTCAGTTTACTAACCTTGCTTTss4983827811:019554122DS025015-3AGAAAGAGCGTCAAGATGTGTGGCCTAACAGTACCATTCTTGGss4983817311:026314774DS033040CTATCTCGACAACTCTGCTTCCAGTCCAGCAGAAATTGCACss4981581020:031443053DS053166-2GATTAGGACACTCCACCATGAGTGCATGAAGACAGAGCAGAGss4983906721:013840265DS028819-10GAGTCCTTCCTGAAGCACTGAGTGTGAAAGGTTTTACTGTATTTCss4983832921:017891301DS023849-2CATCTGACACAGGAAATAGTATGGCGAATCATATGGGAGTCGTTss4983813822:002853759DS036535-2GTAACTATGAGGCAGTCCGTTCAACTGATCCGTGAGTTGTCCss4983864728DB11/T1804—2025表B.1常用實(shí)驗(yàn)斑馬魚品系SNP分子標(biāo)記位點(diǎn)（續(xù)）染色體：位點(diǎn)SNPIDABTU引物（5′～3′）dbSNPID22:022530591DS020970-1ATAAGCTGCTCATGTCACTCGGGGACAGGGTACAGGTAAGGss4983804423:009386243DS022349-1TCGATGAGGACATGAGCTTGGTGACCAAACACCCTTAAATGss4983809923:009386361DS022349-7ATGATGAGGACATGAGCTTGGTGACCAAACACCCTTAAATGss4983810524:017922488DS055282-4AGGAGACGGGCACTGAACACGGATGTTTGTCACCCAAAGss4983913124:017922536DS055282-5AGGAGACGGGCACTGAACACGGATGTTTGTCACCCAAAGss4983913225:033544463DS024735-2AGTCTTGACATCGGTGGTGAGTTGTATTGGTGCTGTGACCss49838169按照表A.15的規(guī)定執(zhí)行。根據(jù)判定結(jié)果對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體出具遺傳質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告。29DB11/T1804—2025附 錄 C（規(guī)范性）MHC單倍型實(shí)驗(yàn)雞和實(shí)驗(yàn)鴨直接測(cè)序檢測(cè)方法DNA基因組DNA提取方法按照NY/T1673的規(guī)定執(zhí)行。PCRC.1C.2表C.1PCR擴(kuò)增片段引物引物序列擴(kuò)增片段退火溫度(℃)片段（1）1F5′-CCGTGGGATCCTCAGACC-3′384bp56.41R5′-CGGCACTGCGCCATGGAG-3′片段（2）2F5′-CTGTGTTTCAGGGTCTCACAC-3′442bp56.42R5′-GCAGGACAAGGTCAGGATC-3′表C.2PCR擴(kuò)增片段引物引物序列擴(kuò)增片段退火溫度(℃)片段1F5′-ATGGAGTTGCTGCCCACCTTGCGCCTG-3′984bp601R5′-TGAAACCCATCAGGCACCATCCCAGGT-3′PCRPCRPCR總反應(yīng)體積為15μL10×PCRbuffer:1.5μL，上下游引物(100pmol/μL)各1μL,4×dNTP100μmol/L:1μL,Taq酶1U:1μL,50ng～100ng基因組DNA:1μL8.5μL。PCR：954min；94，30sPCR74PCRPCR反應(yīng)結(jié)束后，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，檢測(cè)合格的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì)分析，計(jì)算一致率。MHC30DB11/T1804—2025所有樣本序列與參考標(biāo)準(zhǔn)序列比對(duì)，一致率達(dá)100%，判為合格。MHCB2片段（1）CGTGGGATCCTCAGACCCACACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGTCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCTCTACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTACGTGGACGGGGAACTCTTCACGCACTACAACAGCACCGCTCGGAGGGCTGTGCCCCGCACCGAGTGGATAGCGGCCAACACGGACCAGCAGTACTGGGACAGAGAGACGCAGATCGCACAGGGCAATGAGCAGATTGACCGCGAGAACCTGGACATACGGCAGCAGCGCCACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGTGGGTGTGGGATGGACTCCATGGCGCAGTGCCG片段（2）AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGCAGGGT--------GGGGGGGGGGCCGCAGTGTGGGGCTGGACGTGGGCCGGGGGCTCAGTGTGGGGAGCTCAGCCCGGCCCTCATTGCCACCCGCCT-GCAGAGCGGCCTGAGGTGCGAGTGTGGGGGAAGGAGGCCGACGGGATCCTGACCTTGTCCTGCB5片段（1）CCGTGGGATCCTCAGACCCCCACCCGCGGCTCACGGCCCCGCTGCGCTCCGCCCCCGCAGAGCTCCATACCCTGCGGTACATCCATACGGCGATGACGGATCCCGGCCCCGGGCAGCCGTGGTACGTGGACGTGGGGTATGTGGACGGGGAACTCTTCGTGCACTACAACAGCACCGCGCGGAGGTACGTGCCCCGCACCGAGTGGATGGCGGCCAAGGCGGACCAGCAGTACTGGGATGAACAGACGCAGATCGCACAGGGCAATGAGCGGAGTGTGAAAGTGAGCCTGGACACACTGCAGGAACGATACAACCAGACCGGCGGTGAGCACGGCCGGGGCCGCGGCTCCGTGGGTGTGGGATGGGCTCCATGGCGCAGTGCCG片段（2）CTGTGTTTCAGGGTCTCACACGGCGCAGTGGATGTACGGCTGTGACATCCTCGAGGACGGCACCATCCGGGGGTATCATCAGGAGGCCTACGATGGGAGAGACTTCATTG