DB22-T2140-2014-大豆抗菌核病鑒定技術(shù)規(guī)程-吉林省

ICS65.020DB22B16吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)DB22/T2140—2014大豆抗菌核病鑒定技術(shù)規(guī)程Ruleforevaluationinsoybeanresistancetosclerotiniastemrot吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB22/T2140—2014前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由吉林省農(nóng)業(yè)委員會提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:王義生、張偉、徐文靜、李啟云、張金花、楊向東。IDB22/T2140—2014大豆抗菌核病鑒定技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了室內(nèi)離體葉柄接種法對大豆菌核病抗性鑒定的試驗(yàn)條件、病原物接種體的制備、試驗(yàn)設(shè)計(jì)、鑒定方法、調(diào)查及抗性評價(jià)等技術(shù)方法和評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于栽培大豆對菌核病的抗性鑒定。2術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。2.1大豆菌核病sclerotiniastemrotofsoybean由核盤菌[Sclerotiniasclerotiorum（Lib．）deBary]侵染大豆引起的真菌性病害。2.2PDA培養(yǎng)基potatodextroseagarmedium按一定比例人工配置的馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂培養(yǎng)基，可以使病原體在其上生長的基質(zhì)，簡稱PDA培養(yǎng)基。evaluationofresistance1DB22/T2140—2014d)滅菌的不銹鋼方盤（30cm×40cm×3cm）4病原物接種體制備4.1病原菌來源大豆核盤菌由吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所大豆病害研究室提供（經(jīng)專家鑒定），具體形態(tài)癥狀見附錄A。4.2病原菌的繁殖選用PDA培養(yǎng)基擴(kuò)大繁殖。將核盤菌菌絲于PDA平板上培養(yǎng)，25℃條件下培養(yǎng)4d，待菌絲長滿平皿后備用。4.3病原菌的保存收集PDA培養(yǎng)基上的菌核于滅菌的試管中封嚴(yán)，置于4℃冰箱保存。5試驗(yàn)設(shè)計(jì)5.1選擇前茬不是大豆的田地作為鑒定圃，將參鑒品種隨機(jī)排列，每個品種種植行長5m，1行區(qū)，10cm等距點(diǎn)播。每15份～20份材料設(shè)已知抗、感病性穩(wěn)定的對照品種1組。5.2抗性鑒定采用的對照材料為：吉育35（高抗）；吉農(nóng)21（抗）；吉育24（中抗）；吉育89（感）；吉育47（高感）。6鑒定方法4片復(fù)葉后，從頂部采集完全展開的第二個復(fù)葉的葉柄，采集時(shí)，盡量保護(hù)葉柄不受意外機(jī)械傷害，做好標(biāo)記，每個品種（包括對照品種）至少采集10個葉柄,采回后立即進(jìn)行菌核病菌碟接種。將長滿培養(yǎng)基的病原菌（培養(yǎng)4d左右的大豆菌核病病原菌PDA培養(yǎng)基取出），用打孔器在菌絲外圍5㎜處，用打孔器制成直徑在5㎜菌碟，備用。將消毒后的紗布2層鋪于消毒后的方盤中，用無菌水將紗布剛好浸沒，將采集的大豆葉柄先用無菌水沖洗2次～3次，2端用無菌脫脂棉包扎，整齊擺放于紗布上，葉柄間的距離在1cm以上，葉柄凹陷處朝上，用鑷子夾取備用的菌碟將菌絲面接種到大豆葉柄中間凹陷處，每個方盤應(yīng)擺放每個標(biāo)準(zhǔn)對照品種葉柄至少3個，方盤擺滿后，用保濕膜蓋上方盤，置于溫度24℃～25℃，濕度90%的可控溫濕度培養(yǎng)箱中。2DB22/T2140—2014在葉柄菌碟接菌后，24h、48h、72h、96h、120h、144h定期用游標(biāo)卡尺測量病斑長度。7.2數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析根據(jù)調(diào)查數(shù)據(jù)，先對每個試驗(yàn)品種調(diào)查點(diǎn)調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，去除離均差最大的數(shù)值，并計(jì)算每個調(diào)查點(diǎn)的平均數(shù)據(jù)，以病斑長度為因變量，接菌時(shí)間為自變量按式（1）建立線性回歸方程。y=b0+b1x.......................................(1)式中：y——因變量病斑長度；x——自變量接菌時(shí)間；b0——常數(shù)；b1——回歸系數(shù)。并以此回歸方程計(jì)算在接菌后90h時(shí)病斑長度L90h，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)對照品種的病斑長度，對試驗(yàn)品種按下邊不等式劃分6個等級。見表1表1大豆抗菌核病級別劃分發(fā)病級別劃分標(biāo)準(zhǔn)L90h=0鑒定結(jié)果免疫高抗抗013579L90h＜[L(HR)90+L(R)90]/2[L(HR)90+L(R)90]/2≤L90h＜[L(R)90+L(MR)90[L(R)90+L(MR)90]/2≤L90h＜[L(MR)90+L(S)90]/2[L(MR)90+L(S)90]/2≤L90h＜[L(S)90+L(HS)90[L(S)90+L(HS)90]/2≤L90h注1：L(HR)90：已知對照品種高抗品種（吉育35）葉柄在接種菌碟后，通過回歸方程計(jì)算90h時(shí)的病斑長度mm；注2：L(R)90：已知對照品種抗病品種（吉農(nóng)21）葉柄在接種菌碟后，通過回歸方程計(jì)算90h時(shí)的病斑長度mm；注3：L(MR)90：已知對照品種中抗品種（吉育24）葉柄在接種菌碟后，通過回歸方程計(jì)算90h時(shí)的病斑長度mm；注4：L(S)90：已知對照品種感病品種（吉育89）葉柄在接種菌碟后，通過回歸方程計(jì)算90h時(shí)的病斑長度mm；注5：L(HS)90：已知對照品種高感品種（吉育47）葉柄在接種菌碟后，通過回歸方程計(jì)算90h時(shí)的病斑長度mm；注6：L90h：試驗(yàn)樣品葉柄在接種菌碟后，通過回歸方程計(jì)算90h時(shí)的病斑長度mm。設(shè)置的已知對照品種抗、感病表現(xiàn)正常，病斑長度梯次明顯，參鑒品種每組樣本間調(diào)查數(shù)據(jù)的重復(fù)3DB22/T2140—2014根據(jù)統(tǒng)計(jì)后的試驗(yàn)結(jié)果對鑒定材料進(jìn)行分析評價(jià)，抗性等級劃分見表1。寫出正式鑒定報(bào)告，并列出原始數(shù)據(jù)。9原始數(shù)據(jù)記錄原始記錄按表2進(jìn)行。表2年大豆抗菌核病鑒定結(jié)果記載表材料名稱樣本編號葉柄接種菌碟后不同時(shí)間的病斑長度（mm）材料來源24h48h72h96h120h144h鑒定地點(diǎn)：4DB22/T2140—2014AA附錄A（資料性附錄）大豆菌核病A.1病原菌及癥狀A(yù).1.1病原菌大豆菌核病Sclerotiniasclerotiorum（Lib．）deBary稱核盤菌，屬子囊菌門真菌。菌核圓柱狀或鼠糞狀，大小3mm～7mm×1mm～4mm，內(nèi)部白色，外部黑色。子囊盤盤狀，上生柵狀排列的子囊。子囊棒狀，內(nèi)含8個子囊孢子。子囊孢子單胞，無色，橢圓形，大小9μm～14μm×3μm～6μm。側(cè)絲無色，絲狀，夾生在子囊間。菌絲在5℃～30℃均可生長，適溫20℃～25℃。菌核萌發(fā)溫限5℃～25℃，適溫20℃。菌核萌發(fā)不需光照，但形成子囊盤柄需散射光才能膨大形成子囊盤。在馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基上菌叢白色，生長迅速，不久形成黑色鼠糞狀菌核。見圖A.1,圖A.2。圖A.1大豆菌核病病原菌核盤菌5DB22/T2140—2014A.1.2癥狀大豆菌核病主要發(fā)生在地上部，苗期、成株期均可發(fā)病，花期受害重，產(chǎn)生苗枯、葉腐、莖腐、莢腐等癥。苗期染病莖基部褐變，呈水漬狀，濕度大時(shí)長出棉絮狀白色菌絲，后病部干縮呈黃褐色枯死，表皮撕裂狀。葉片染病始于植株下部，初葉面生暗綠色水浸狀斑，后擴(kuò)展為圓形至不規(guī)則形，病斑中心灰褐色，四周暗褐色，外有黃色暈圈；濕度大時(shí)易生白色菌絲，葉片腐爛脫落。莖稈染病多從主莖中下部分枝處開始，病部水浸狀，后褪為淺