《植物組織培養(yǎng)》課件 模塊二-1 母液的配制

任務(wù)一母液的配制任務(wù)二培養(yǎng)基的制備模塊二培養(yǎng)基的配制項目二

培養(yǎng)基的配制任務(wù)一母液的配制知識目標(biāo)一般掌握培養(yǎng)基的種類、特點。掌握基本培養(yǎng)基的配方。一般掌握培養(yǎng)基的組成成分和適宜的劑量。123技能目標(biāo)掌握基本培養(yǎng)基的配制的配方。掌握培養(yǎng)基母液的配制方法和步驟。12任務(wù)講解第一節(jié)培養(yǎng)基的種類第二節(jié)培養(yǎng)基的和成分第三節(jié)培養(yǎng)基的配制流程第一節(jié)培養(yǎng)基的種類

培養(yǎng)基是植物組織培養(yǎng)的重要基質(zhì)。在離體培養(yǎng)條件下，不同種植物的組織對營養(yǎng)有不同的要求，甚至同一種植物不同部位的組織對營養(yǎng)的要求也不相同，只有滿足了它們各自的特殊要求，它們才能很好地生長。

因此，沒有一種培養(yǎng)基能夠適合一切類型的植物組織或器官，在建立一項新的培養(yǎng)系統(tǒng)時，首先必須找到一合適的培養(yǎng)基，培養(yǎng)才有可能成功。第一節(jié)培養(yǎng)基的種類

培養(yǎng)基有幾十種，根據(jù)不同植物和部位選用不同的培養(yǎng)基。歷史沿革：

（1）培養(yǎng)基的產(chǎn)生最早是Knop(1681)，以后根據(jù)不同目的進(jìn)行改良產(chǎn)生了多種培養(yǎng)基。（2）White培養(yǎng)基在40年代用得較多，現(xiàn)在還常用。（3）而到60和70年代則大多采用MS等高濃度培養(yǎng)基，可以保證培養(yǎng)材料對營養(yǎng)的需要，并能生長快、分化快，且由于濃度高，在配制、消毒過程中某些成分有些出入，也不致影響培養(yǎng)基的離子平衡。一、培養(yǎng)基的種類第一節(jié)培養(yǎng)基的種類

培養(yǎng)基的名稱，多數(shù)以發(fā)明人的名字來命名，如White培養(yǎng)基，Murashige和Skoog培養(yǎng)基(簡稱MS培養(yǎng)基)。目前國際上流行的培養(yǎng)基有幾十種，常用的培養(yǎng)基及特點如下：

(1)MS培養(yǎng)基它是1962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細(xì)胞而設(shè)計的。特點是無機鹽和離子濃度較高，為較穩(wěn)定的平衡溶液。第一節(jié)培養(yǎng)基的種類(2)B5培養(yǎng)基是1968年由Galmborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計的。其主要特點是含有較低的銨，這可能對不少培養(yǎng)物的生長有抑制作用。從實踐得知有些植物在B5培養(yǎng)基上生長更適宜，如雙子葉植物特別是木本植物。

(3)White培養(yǎng)基是1943年由White為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計的。1963年又作了改良，稱作White改良培養(yǎng)基。其特點是無機機鹽數(shù)量較低，適于生根培養(yǎng)。第一節(jié)培養(yǎng)基的種類

（4）N6培養(yǎng)基是1974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)而設(shè)計的。其特點是成分較簡單，KNO3和（NH4）2SO4含量高。在國內(nèi)已廣泛應(yīng)用于小麥、水稻及其他植物的花藥培養(yǎng)和其他組織培養(yǎng)。第二節(jié)培養(yǎng)基的成分

水

無機鹽：大量元素

微量元素

有機化合物：碳源

維生素

氨基酸

植物激素

天然提取物

瓊脂

其它：PH值、活性炭、抗生素、抗酚類物質(zhì)污染的添加劑、生長抑制劑、染色劑……視頻2-1培養(yǎng)基成分1.水

1.水水是植物原生質(zhì)體的組成成分，也是一切代謝過程的介質(zhì)和溶媒。它是生命活動過程中不可缺少的物質(zhì)。配制培養(yǎng)基母液時要用蒸餾水，以保持母液及培養(yǎng)基成分的精確性，防止貯藏過程發(fā)霉變質(zhì)，大規(guī)模生產(chǎn)時可用自來水。但在少量研究上盡量用蒸餾水，以防成分的變化引起不良效果。2.無機元素

元素名稱添加形式

NKNO3,NH4NO3

大量PKH2PO4NaH2PO4

元素KKClKNO3(≥0.5mmol/L)CaCaCl2·2H2OMgMg2SO4·7H2OSMg2SO4·

7H2OFeFeNa2-EDTA

微量BH3BO3

元素MnMnSO4(≤0.5mmol/L)CuCuSO4MoNa2MoO4·2H2OClCaCl2·2H2O2.無機元素2.無機元素

總之，植物必需營養(yǎng)元素可組成結(jié)構(gòu)物質(zhì)，也可是具有生理活性的物質(zhì)，如酶、輔酶以及作為酶的活化劑，參與活躍的新陳代謝。此外，在維持離子濃度平衡、膠體穩(wěn)定、電荷平衡等電化學(xué)方面起著重要作用。當(dāng)某些營養(yǎng)元素供應(yīng)不足時，愈傷組織表現(xiàn)出一定的缺素癥狀。2.無機元素3.有機化合物有機物維生素肌醇氨基酸天然復(fù)合物椰乳香蕉泥水解酪蛋白碳水化合物馬鈴薯其它3.有機化合物a.碳水化合物

選用種類：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等。蔗糖濃度：2－3%，胚培養(yǎng)為4－15%

高壓滅菌部分糖會分解。大生產(chǎn)時可用白砂糖。a.碳水化合物b.維生素種類：

VB1、VB6、VB3、Vc濃度：0.1－1.0mg/L

作用：

VB1[鹽酸硫胺素]促愈傷組織產(chǎn)生，提高活力。

VB6[鹽酸吡哆醇]促根生長。

VB3[煙酸]與代謝和胚發(fā)育有關(guān)。

Vc[抗壞血酸]防組織褐變。b.維生素c.肌醇

促進(jìn)愈傷組織生長、胚狀體和芽的形成。對組織細(xì)胞繁殖、分化的促進(jìn)作用。濃度100mg/L。促進(jìn)糖類的相互轉(zhuǎn)化，提高活性物質(zhì)的活性。c.肌醇d.氨基酸

常用：甘氨酸水解酪蛋白[CH]

水解乳蛋白[LH]等。

作用：是蛋白質(zhì)的組分；

促進(jìn)器官增殖；

可作有機氮源。d.氨基酸e.天然復(fù)合物椰乳：促愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)，用量10－20%;香蕉泥：對PH值緩沖大，用量150－200ml/L;馬鈴薯：對PH值緩沖大，用量150－200g/L;水解酪蛋白：濃度100－200mg/L.其他：酵母提取液[YE]、蘋果汁、番茄汁等。e.天然復(fù)合物4.植物激素（1）生長素類

A.種類

IAA

NAA

IBA

2,4－DB.作用誘導(dǎo)愈傷組織和根分化，促進(jìn)細(xì)胞分裂和伸長。

C.濃度

0.05～5mg/mL（2）赤霉素（GA）

注：不耐熱

A.種類：GA3B.作用：促莖伸長，促胚發(fā)育成植株；打破休眠；一般在器官形成后加入。4.植物激素4.植物激素（3）細(xì)胞分裂素（CTK）

A.種類：6－BA

KT

ZTB.作用：誘導(dǎo)不定芽分化和莖、苗增殖。

C.濃度：0.05－10mg/mL4.植物激素5.培養(yǎng)體支持材料1.瓊脂

A.用量6－10g/LB.新買應(yīng)試凝固力

C.使用優(yōu)缺點2.其它玻璃纖維濾紙橋海綿蛭石等5.培養(yǎng)體支持材料6.輔助性物質(zhì)A.常用種類：青霉素、鏈霉素、慶大霉素等B.用量：5～20%C.注意：抗生素對組織生長有抑制作用，使用要慎重（1）抗生素6.輔助性物質(zhì)6.輔助性物質(zhì)常用抗氧化劑及使用：半胱氨酸VC（50～200mg/L液洗滌外植體傷口表面）。（2）抗氧化物6.輔助性物質(zhì)6.輔助性物質(zhì)6.輔助性物質(zhì)（3）活性炭A.作用：具吸附作用；莖尖初代培養(yǎng)可防褐化；促進(jìn)新梢增殖（濃度0.1～0.2%）；促進(jìn)生根；防止組培苗玻璃化（濃度0.3%）。利于胚胎培養(yǎng)。B.常用濃度：0.5～10g/L

C.注意：活性炭具副作用。第三節(jié)母液的配制(一)母液配制流程圖

稱量

母液分裝確定培養(yǎng)基溶解

定容

貼標(biāo)簽保存于冰箱MS培養(yǎng)基母液的配制1MS培養(yǎng)基母液配制的配方母液種類成分標(biāo)準(zhǔn)量（mg）擴大倍數(shù)稱取量（mg）母液體積（ML）用量/L大量元素NH4NO316505082.5100020KNO3190090MgSO4·7H2O37018.5KH2PO41708.5鈣鹽CaCI2·2H2O4405022100020鐵鹽FeSO4?7H2O27.81002.78100010MS培養(yǎng)基母液的配制2MS培養(yǎng)基母液配制的配方母液種類成分標(biāo)準(zhǔn)量（mg）擴大倍數(shù)稱取量（mg）母液體積（ML）用量/L微量元素MnSO4·4H2O22.31002.23100010ZnSO4·7H2O8.60.86CoCl2·6H2O0.0250.0025CuSO45H2O0.0250.0025Na2MOO4·2H2O0.250.025H3BO36.20.62KI0.830.083MS培養(yǎng)基母液的配制3MS培養(yǎng)基母液配制的配方母液種類成分標(biāo)準(zhǔn)量（mg）擴大倍數(shù)稱取量（mg）母液體積（mL）用量/L有機物煙酸（VB3）0.52000.110005鹽酸吡哆醇（VB6）0.50.1鹽酸硫胺素（vB1）0.10.02甘氨酸2.00.4肌醇100藥品稱量視頻天平預(yù)置全顯示清零稱藥視頻2-2藥品稱量Fe鹽母液的配制

Fe鹽母液的配制硫酸亞鐵和EDTA-Na分別溶解后，冷卻后將Fe鹽倒入EDTA-Na中[反之易沉淀]，然后定容。激素母液的配制激素母液濃度：

0.5-1mg/ml，1次配成100ml激素溶解：

IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容

NAA先溶于熱水或95%酒精再加水；

2,4-D先溶于1mol/LNaOH或酒精再加水；

KT、BA先溶于1mol/LHC