《土壤和沉積物 3種氯霉素類抗生素的測(cè)定 液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜法》（征求意見(jiàn)稿）

1土壤和沉積物3種氯霉素類抗生素的測(cè)定液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法警告：實(shí)驗(yàn)中使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和有機(jī)溶劑均為有毒化合物，試劑配制和樣品前處理過(guò)程應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行；操作時(shí)應(yīng)按要求佩戴防護(hù)器具，避免吸入呼吸道或接觸皮膚和衣物。1適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)定土壤和沉積物中3種氯霉素類抗生素的高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于土壤和沉積物中氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素的測(cè)定。取樣量為1g，試樣定容體積1mL，進(jìn)樣量2μl時(shí)，3種氯霉素類抗生素方法檢出限為0.4μg/kg~0.6μg/kg，測(cè)定下限為1.6μg/kg~2.4μg/kg，詳見(jiàn)附錄A。2規(guī)范性引用文件本標(biāo)準(zhǔn)引用了下列文件或其中的條款。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。其他文件被新文件廢止、修改、修訂的，新文件適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB17378.3海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范第3部分：樣品采集、貯存與運(yùn)輸GB17378.5海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范第5部分：沉積物分析HJ/T91地表水和污水監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范HJ494水質(zhì)采樣技術(shù)指導(dǎo)HJ/T166土壤環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范HJ442.4近岸海域環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范第四部分近岸海域沉積物監(jiān)測(cè)HJ613土壤干物質(zhì)和水分的測(cè)定重量法HJ783土壤和沉積物有機(jī)物的提取加壓流體萃取法3方法原理土壤和沉積物中的氯霉素類抗生素經(jīng)甲醇-檸檬酸鹽緩沖溶液提取，固相萃取柱凈化、濃縮定容，用液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜測(cè)定。根據(jù)保留時(shí)間、特征離子豐度比定性，內(nèi)標(biāo)法定量。4干擾和消除當(dāng)樣品中存在基質(zhì)效應(yīng)干擾時(shí)，可通過(guò)凈化樣品、優(yōu)化色譜條件、減少取樣量或進(jìn)樣體積等方法2降低或消除干擾。5試劑和材料除非另有說(shuō)明，分析時(shí)均使用符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的分析純?cè)噭?，?shí)驗(yàn)用水為不含目標(biāo)化合物的蒸餾水或通過(guò)純水設(shè)備制備。5.1甲醇（CH3OH）：色譜純。5.2乙酸銨（NH4CH3COOH）：優(yōu)級(jí)純。5.3檸檬酸一水合物（C6H8O7·H2O）。5.4檸檬酸鈉二水合物（C6H5Na3O7·2H2O)。5.5檸檬酸溶液：0.1mol/L。稱量21.01g的檸檬酸一水合物（5.3），用水稀釋至1L。5.6檸檬酸鈉溶液：0.1mol/L。稱量29.41g的檸檬酸鈉二水合物（5.4），用水定容至1L。5.7檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液量取80mL的0.1mol/L檸檬酸溶液（5.5）和120mL的0.1mol/L檸檬酸鈉溶液（5.6），混合，即可得pH=5.0的檸檬酸-檸檬酸鈉的緩沖溶液。5.8甲醇-檸檬酸鹽緩沖溶液。量取100mL甲醇（5.1）和100mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液（5.7）混勻。5.9乙酸銨溶液。稱取0.385g乙酸銨（5.2），溶于1L水中，混勻。5.10氯霉素類抗生素標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=100.0mg/L?？芍苯淤?gòu)買市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，3種氯霉素類抗生素，溶劑為甲醇，貯存液參照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)保存。5.11氯霉素類抗生素標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=1.00mg/L。移取適量抗生素標(biāo)準(zhǔn)貯備液（5.10用甲醇配制成各目標(biāo)化合物質(zhì)量濃度均為1.00mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液，于-18℃以下冷凍、密封、避光保存，保存期為90d。5.12替代物標(biāo)準(zhǔn)貯備液：ρ=100.0mg/L。替代物為甲砜霉素-d3，亦可選用其他性質(zhì)相近的同位素物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)?？芍苯淤?gòu)買市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，溶劑為甲醇，貯備液參照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)保存。5.13替代物標(biāo)準(zhǔn)使用液：ρ=1.00mg/L。移取適量替代物標(biāo)準(zhǔn)貯備液（5.12用甲醇配制成各目標(biāo)化合物質(zhì)量濃度均為1.00mg/L的替代物使用液I，于-18℃以下冷凍、密封、避光，保存期為90d。5.14內(nèi)標(biāo)貯備液：ρ=100mg/L。內(nèi)標(biāo)物為氯霉素-d5，亦可選用其他性質(zhì)相近的同位素物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)?？芍苯淤?gòu)買市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，溶劑為甲醇，貯備液參照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)保存。5.15內(nèi)標(biāo)使用液：ρ=1.00mg/L。移取適量?jī)?nèi)標(biāo)貯備液（5.14），用甲醇稀釋，于-18℃以下冷凍、密封、避光，保存期為90d。35.16硅藻土：粒徑250μm~850μm。（20目~60目）馬弗爐中450℃灼燒4h，稍冷卻后置于潔凈干燥器中備用。5.17石英砂：粒徑150μm～250μm（100目～60目）馬弗爐中450℃灼燒4h，稍冷卻后置于潔凈干燥器中備用。5.18固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物，規(guī)格為500mg/6mL，或其他等效固相萃取柱。5.19針頭式過(guò)濾器：孔徑為0.22μm，聚四氟乙烯、聚醚砜或其他等效材質(zhì)濾膜。5.20氮?dú)猓杭兌取?9.99%。5.21氬氣：純度≥99.999%。6儀器和設(shè)備6.1采樣瓶：棕色，具有聚四氟乙烯襯墊磨口玻璃瓶。6.2液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI），具備流動(dòng)相梯度洗脫和質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)功能。6.3色譜柱：填料粒徑為1.7μm，柱長(zhǎng)為100mm，內(nèi)徑為2.1mm的C18液相色譜柱，或其他等效色譜柱6.4萃取池：34mL或其他規(guī)格。6.5冷凍干燥儀。6.6提取裝置：加壓流體萃取儀等性能相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。6.7濃縮裝置：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、氮吹儀或其他同等性能的設(shè)備。6.8固相萃取裝置：自動(dòng)或手動(dòng)，流速可調(diào)節(jié)。6.9進(jìn)樣瓶：棕色玻璃瓶，2mL。6.10樣品篩：不銹鋼材質(zhì)，孔徑為250μm（60目）。6.11一般實(shí)驗(yàn)室常用儀器和設(shè)備。7樣品7.1樣品采集和保存分別按照HJ/T166、HJ/T91、HJ442.4、GB17378.3的相關(guān)要求采集和保存土壤和沉積物樣品。樣品應(yīng)置于潔凈的采樣瓶（6.1）中，4℃以下避光、冷藏保存，7d內(nèi)完成提取。7.2樣品的制備除去樣品中的異物（枝棒、葉片、石子等），自然陰干或冷凍干燥后，研磨、均質(zhì)、過(guò)樣品篩（6.10）。7.3水分的測(cè)定土壤樣品干物質(zhì)含量測(cè)定按照HJ613執(zhí)行，沉積物樣品含水率測(cè)定按照GB17378.5執(zhí)行。47.4試樣制備7.4.1提取稱取1g試樣（可根據(jù)試樣中待測(cè)化合物濃度適當(dāng)增加或減少取樣量加入10μl替代物（5.13）混勻后，置于萃取池（6.4）中，將萃取池（6.4）置于提取裝置（6.6）中，以甲醇-檸檬酸鹽緩沖溶液（5.8）為提取溶劑，按以下參考條件進(jìn)行提?。禾崛囟葹?0℃,提取壓力為10.34KPa，靜態(tài)提取時(shí)間為15min，淋洗體積為60%池體積，氮?dú)猓?.20）吹掃時(shí)間為120s，循環(huán)次數(shù)為2次，收集提取液，并用實(shí)驗(yàn)室水稀釋至500mL，待凈化。7.4.2凈化將固相萃取柱（5.18）固定在固相萃取裝置（6.8）上，依次用10mL甲醇（5.1）、10mL水活化固相萃取柱（5.18）。將提取液（7.4.1）以8ml/min～10ml/min的流速通過(guò)固相萃取柱后，用10mL水淋洗固相萃取柱（5.18），然后用真空泵抽氣干燥小柱或用氮?dú)猓?.20）吹干小柱。再用10mL甲醇（5.1）以1ml/min～3ml/min的流速洗脫固相萃取柱，收集洗脫液。7.4.3濃縮定容用濃縮裝置（6.7）將洗脫液（7.4.2）濃縮至近干，用甲醇（5.1）定容至1.0mL，加入10.0μl內(nèi)標(biāo)使用液（5.15），混勻后經(jīng)針頭式過(guò)濾器（5.19）過(guò)濾至進(jìn)樣瓶（6.9）中，密封、避光，-18℃以下冷凍保存，15d內(nèi)完成分析。7.5空白試樣制備用石英砂（5.17）代替樣品，按照與試樣制備（7.4）相同步驟制備空白試樣。8分析步驟8.1儀器參考條件8.1.1液相色譜參考條件進(jìn)樣體積：2μl；柱溫：40oC。表1梯度洗脫程序058.1.2質(zhì)譜參考條件離子源溫度：400℃；霧化氣壓力：50psi；輔助加熱氣壓力：50psi；氣簾氣壓力：35psi；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件參見(jiàn)表2。表2質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)條件12345-8.1.3質(zhì)譜儀調(diào)諧按照儀器使用說(shuō)明書(shū)調(diào)諧儀器并確認(rèn)儀器性能，儀器性能正常后測(cè)定樣品。8.2校準(zhǔn)8.2.1標(biāo)準(zhǔn)系列的配制分別移取適量的氯霉素類抗生素標(biāo)準(zhǔn)使用液（5.11）、替代物使用液（5.13），于進(jìn)樣瓶（6.9）中，用甲醇（5.1）配制不少于5個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，目標(biāo)化合物和替代物的質(zhì)量濃度分別為1.0μg/L、2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、和100μg/L（此為參考濃度）。1mL標(biāo)準(zhǔn)系列中加入10μL內(nèi)標(biāo)使用液（5.15），混勻，待測(cè)。8.2.2標(biāo)準(zhǔn)系列的測(cè)定照儀器參考條件（8.1），由低濃度到高濃度依次對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行測(cè)定。記錄各目標(biāo)化合物、提取內(nèi)標(biāo)、進(jìn)樣內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間和定量離子峰面積。各總離子色譜圖見(jiàn)圖1。6/4\/51——甲砜霉素；2——甲砜霉素-d3(替代物3——氟苯尼考；4——氯霉素；5——氯霉素-d5(內(nèi)標(biāo)）。圖1各目標(biāo)化合物、替代物及內(nèi)標(biāo)物的總離子流圖8.2.3用最小二乘法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中目標(biāo)化合物物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以其對(duì)應(yīng)峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值和內(nèi)標(biāo)物濃度的乘積為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。8.2.4平均相對(duì)響應(yīng)因子計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i的相對(duì)響應(yīng)因子（RRFij按照公式（1）計(jì)算。（1）式中：RRFij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i的相對(duì)響應(yīng)因子；Aij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i定量離子的峰面積；Ais,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i相對(duì)應(yīng)的內(nèi)標(biāo)物定量離子的峰面積；pis,ij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度，μg/L；pij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度，μg/L。標(biāo)準(zhǔn)系列中目標(biāo)化合物i的平均相對(duì)響應(yīng)因子（RRFi按照公式（2）計(jì)算。（2）式中：RRFi——標(biāo)準(zhǔn)系列中目標(biāo)化合物i的平均相對(duì)響應(yīng)因子；RRFij——標(biāo)準(zhǔn)系列中第j點(diǎn)目標(biāo)化合物i的相對(duì)響應(yīng)因子；n——標(biāo)準(zhǔn)系列點(diǎn)數(shù)。78.3試樣測(cè)定按照與標(biāo)準(zhǔn)系列的配制與測(cè)定（8.2.1）相同的儀器條件進(jìn)行試樣（7.4）測(cè)定。8.4空白試驗(yàn)按照與試樣測(cè)定（8.3）相同的儀器條件進(jìn)行空白試樣（7.5）的測(cè)定。9結(jié)果計(jì)算與表示9結(jié)果計(jì)算與表示9.1定性分析根據(jù)保留時(shí)間與離子對(duì)豐度比例定性分析。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，試樣中目標(biāo)化合物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中該目標(biāo)化合物的保留時(shí)間比較，相差±0.2min以內(nèi)；樣品中各目標(biāo)化合物定性離子的相對(duì)豐度（Ksam,i）與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的定性離子相對(duì)豐度（Kstd,i）進(jìn)行比較，所得偏差在表3規(guī)定的最大允許偏差范圍內(nèi)，則可判定樣品中存在該目標(biāo)化合物。Kstd,i和Kstd,i分別按照公式（3）和公式（4）計(jì)算。（3）式中：Ksam,i——試樣中目標(biāo)化合物i定性離子的相對(duì)豐度，%；Asam2,i——試樣中目標(biāo)化合物i定性離子的響應(yīng)值；Asam1,i——試樣中目標(biāo)化合物i定量離子的響應(yīng)值。（4）式中：Kstd,i——標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物i定性離子的相對(duì)豐度，%；Astd2,i——標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物i定性離子的響應(yīng)值；Astd1,i——標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物i定量離子的響應(yīng)值。表3相對(duì)離子豐度的最大允許偏差Kstd（%）Ksam最大允許偏差（%）Kstd,i＞5020＜Kstd,i≤5010＜Kstd,i≤20Kstd,i≤1089.2定量分析9.2.1平均相對(duì)響應(yīng)因子法土壤樣品中目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度按照公式（5）計(jì)算：式中：wi——樣品中目標(biāo)化合物i的含量，μg/kg；Ac,i——樣品中目標(biāo)化合物i定量離子的峰面積；ρis——內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度，μg/L；Vc——試樣定容的體積，ml；m——試樣稱樣量，g；wdm——試樣干物質(zhì)含量，%；A ——內(nèi)標(biāo)物定量離子的峰面積；ARRFi——目標(biāo)化合物i的平均相對(duì)響應(yīng)因子；D——稀釋倍數(shù)。沉積物樣品中目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度按照公式（6）計(jì)算：式中：wi——樣品中目標(biāo)化合物i的含量，μg/kg；Ac,i——樣品中目標(biāo)化合物i定量離子的峰面積；ρis——內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度，μg/L；Vc——試樣定容的體積，ml；m——試樣稱樣量，g；wH2O——試樣含水率，%；A ——內(nèi)標(biāo)物定量離子的峰面積；ARRFi——目標(biāo)化合物i的平均相對(duì)響應(yīng)因子；D——稀釋倍數(shù)。9.2.2最小二乘法土壤樣品中目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度按照公式（7）計(jì)算：（7）式中：wi——樣品中目標(biāo)化合物i的含量，μg/kg；ρc，i——試樣中目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度，μg/L；Vc——試樣定容的體積，ml；m——試樣稱樣量，g；wdm——試樣干物質(zhì)含量，%；D——稀釋倍數(shù)。沉積物樣品中的目標(biāo)化合物含量i的質(zhì)量濃度按照公式（8）進(jìn)行計(jì)算：式中：wi——樣品中目標(biāo)化合物i的含量，μg/kg；ρc，i——試樣中目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度，μg/L；Vc——試樣定容的體積，ml；m——試樣稱樣量，g；wH2O——試樣含水率，%；D——稀釋倍數(shù)。9.3結(jié)果表示測(cè)定結(jié)果小數(shù)點(diǎn)后位數(shù)的保留與方法檢出限一致，最多保留3位有效數(shù)字。10準(zhǔn)確度10.1精密度6家實(shí)驗(yàn)室，分別對(duì)2μg/kg、10μg/kg和90μg/kg的空白加標(biāo)樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為6.3%~15%、3.2%~11%和1.3%~11%；實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為14%~33%、6.7%~17%和6.3%~10%；重復(fù)性限分別為：0.27μg/kg~0.34μg/kg、1.2μg/kg~1.6μg/kg6家實(shí)驗(yàn)室，分別對(duì)2μg/kg、10μg/kg和90μg/kg的土壤樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.8%~20%、3.1%~19%和2.5%~9.9%；實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為13%~21%、8.6%~17%和6.4%~13%；重復(fù)性限分別為：0.26μg/kg~0.35μg/kg、1.7μg/kg~2.4μg/kg和9.8μg/kg~13μg/kg；再現(xiàn)性限分別為：0.49μg/kg~0.85μg/kg、2.4μg/kg~3.8μg/kg和16μg/kg~26μg/kg。~2.2μg/kg6家實(shí)驗(yàn)室，分別對(duì)2μg/kg、10μg/kg和90μg/kg的沉積物加標(biāo)樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.0%~19%、2.3%~15%和2.0%~13%；實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為14%~28%、10%~23%和7.0%~12%；重復(fù)性限分別為：0.29μg/kg~0.37μg/kg、1.7~2.2μg/kg9和8.9μg/kg~9.93μg/kg；再現(xiàn)性限分別為：0.50μg/kg~0.98μg/kg、3.0μg/kg~5.1μg/kg和14μg/kg~21μg/kg。精密度結(jié)果統(tǒng)計(jì)參見(jiàn)附錄C中表C.1。10.2正確度6家實(shí)驗(yàn)室，分別對(duì)2μg/kg、10μg/kg和90μg/kg的空白加標(biāo)樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定，加標(biāo)回收率分別為41.6%~98.6%、45.9%~108%和54.5%~87.4%；加標(biāo)回收率最終值分別為54.3%±15%~60.8%±40%、66.6%±22%~83.3%±24%和66.1%±13%~77.6%±16%。6家實(shí)驗(yàn)室，分別對(duì)2μg/kg、10μg/kg和90μg/kg的土壤樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定，加標(biāo)回收率分別為43.3%~97.7%、42.1%~92.4%和54.1%~89.1%；加標(biāo)回收率最終值分別為55.4%±14%~69.1%±30%、63.1%±22%~76.1%±18%和65.8%±17%~79.4%±18%。6家實(shí)驗(yàn)室，分別對(duì)2μg/kg、10μg/kg和90μg/kg的沉積物加標(biāo)樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定，加標(biāo)回收率分別為41.9%~95.3%、4252.0%±14%~60.9%±34%、74.1%±34%~90.7%±28%和58.6%±14%~67.0%±15%。正確度統(tǒng)計(jì)結(jié)果參見(jiàn)附錄C中表C.2。11質(zhì)量保證和質(zhì)量控制11.1空白試驗(yàn)每20個(gè)樣品或每批次(≤20個(gè)樣品/批）應(yīng)至少分析1個(gè)空白樣品，測(cè)定結(jié)果應(yīng)低于方法檢出限。11.2校準(zhǔn)采用平