DB37-T4855-2025海洋污染物毒性分析用 模式魚(yú)種 海水青鳉世代培育技術(shù)規(guī)范

Q/LB.□XXXXX-XXXXDB37/T4855—2025目次TOC\o"1-1"\h\t"標(biāo)準(zhǔn)文件_一級(jí)條標(biāo)題,2,標(biāo)準(zhǔn)文件_附錄一級(jí)條標(biāo)題,2,"前言 II1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14世代培育氣候室 14.1通用要求 14.2功能區(qū)分區(qū) 25循環(huán)水日常飼養(yǎng)與管理 25.1飼養(yǎng)裝置 25.2環(huán)境條件 35.3飼養(yǎng)管理 36親魚(yú)靜水繁育與管理 46.1繁育裝置 46.2繁育條件 46.3繁育管理 47受精卵孵化與管理 57.1孵化裝置 57.2孵化條件 57.3孵化管理 68質(zhì)量控制 68.1質(zhì)量要求 68.2環(huán)境檢測(cè) 68.3信息記錄 6附錄A（規(guī)范性）海水青鳉世代培育信息記錄表 8前言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由山東省海洋局提出并組織實(shí)施。本文件由山東省海洋標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。海洋污染物毒性分析用模式魚(yú)種海水青鳉世代培育技術(shù)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了用于海洋污染物毒性分析的模式魚(yú)種海水青鳉世代培育中人工氣候室（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“氣候室”）、循環(huán)水日常飼養(yǎng)與管理、親魚(yú)靜水繁育與管理、受精卵孵化與管理、質(zhì)量控制等要求。本文件適用于海洋水體中重金屬、有機(jī)污染物、微塑料等污染物毒性分析用模式魚(yú)種海水青鳉的世代培育，其他模式魚(yú)種世代培育參照使用。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB3097海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB14925實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求GB/T39649實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)魚(yú)質(zhì)量控制NY5073無(wú)公害食品水產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)限量術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

海水青鳉仔稚魚(yú)Oryziasmelastigmalarvae孵化出膜至發(fā)育為幼魚(yú)之前的海水青鳉。一般指出膜后0?d～35?d的海水青鳉。

海水青鳉幼魚(yú)Oryziasmelastigmajuvenile鱗片發(fā)育完全，形態(tài)與成魚(yú)相似但未達(dá)到性成熟的海水青鳉。一般指出膜后35?d～90?d的海水青鳉。

海水青鳉親魚(yú)Oryziasmelastigmabroodstock性成熟、用于繁殖后代的海水青鳉。一般指大于3月齡的海水青鳉。世代培育氣候室通用要求世代培育氣候室應(yīng)具備獨(dú)立運(yùn)行空間，能夠?qū)Ω鱾€(gè)環(huán)境因子，如溫度、濕度和光照等進(jìn)行自動(dòng)控制和調(diào)節(jié)，保證恒溫、恒濕。氣候室電力供應(yīng)、監(jiān)測(cè)警報(bào)、實(shí)時(shí)記錄等運(yùn)行管理應(yīng)符合GB19489規(guī)定。功能區(qū)分區(qū)氣候室分為以下功能區(qū)，各功能區(qū)進(jìn)行物理隔離，并應(yīng)符合以下要求。培育水制備區(qū)：用于過(guò)濾自然海水或配制人工海水，配備抽濾泵等過(guò)濾裝置、鹽度計(jì)等人工海水配備儀器、調(diào)溫裝置、曝氣裝置等，其環(huán)境條件設(shè)置按5.2執(zhí)行。循環(huán)水飼養(yǎng)區(qū)：用于海水青鳉成魚(yú)和不同世代仔稚魚(yú)、幼魚(yú)的飼養(yǎng)，配備物理過(guò)濾、生物過(guò)濾等循環(huán)水處理裝置，其環(huán)境條件設(shè)置按5.2執(zhí)行。靜水繁育區(qū)：用于海水青鳉親魚(yú)的繁育，配備繁育缸、吸卵器等裝置，其環(huán)境條件設(shè)置按6.2執(zhí)行。受精卵孵化區(qū)：用于海水青鳉受精卵孵化，配備充氣泵、孵化桶等裝置，其環(huán)境條件設(shè)置按7.2執(zhí)行。活體餌料孵化區(qū)：用于餌料鹵蟲(chóng)的孵化，配備充氣泵、孵化桶、收集網(wǎng)等裝置，其環(huán)境條件設(shè)置按7.2執(zhí)行。儲(chǔ)物區(qū)：用于人工餌料、魚(yú)撈、吸卵器等物品存放，其環(huán)境條件設(shè)置按5.2執(zhí)行。實(shí)驗(yàn)區(qū)：獨(dú)立于主體培育區(qū)，用于實(shí)驗(yàn)觀(guān)察和處理，根據(jù)功能分為以下分區(qū)。觀(guān)察分區(qū)：主要用于親魚(yú)篩選、魚(yú)卵與糞便分離、受精卵顯微觀(guān)察等，配備顯微鏡、體視解剖鏡、解剖針、胚胎培養(yǎng)皿、相機(jī)等器具，該區(qū)域的魚(yú)體或胚胎可再次返回繁育區(qū)、孵化區(qū)等功能區(qū)。短時(shí)間觀(guān)察環(huán)境條件設(shè)置按5.2執(zhí)行，長(zhǎng)時(shí)間觀(guān)察環(huán)境條件設(shè)置應(yīng)符合觀(guān)察對(duì)象管理要求。處理分區(qū)：主要用于親魚(yú)、仔稚魚(yú)、魚(yú)卵的急性或慢性毒理試驗(yàn)，配備顯微鏡、體視解剖鏡等觀(guān)察分析儀器和容量瓶、移液槍、振蕩器等器具，該區(qū)域經(jīng)處理的魚(yú)體或胚胎應(yīng)留置實(shí)驗(yàn)區(qū)，不應(yīng)返回繁育區(qū)、孵化區(qū)等功能區(qū)，以防交叉污染。其運(yùn)行管理應(yīng)根據(jù)毒理試驗(yàn)對(duì)象適時(shí)調(diào)整。循環(huán)水日常飼養(yǎng)與管理飼養(yǎng)裝置飼養(yǎng)架應(yīng)選用不銹鋼等耐腐蝕、耐高溫材料，每層飼養(yǎng)架高度不應(yīng)低于60?cm，配備3只～5只LED燈管和1只紫外燈管，其中LED燈管功率范圍為5?W～20?W，紫外燈管功率范圍為5W～11W，于飼養(yǎng)架頂層安裝LED燈管，進(jìn)水口處安裝紫外燈管。飼養(yǎng)缸應(yīng)選用玻璃等無(wú)毒、無(wú)害、耐腐蝕、耐高溫、易清洗材質(zhì)，透明度高，易觀(guān)察，飼養(yǎng)缸體積宜大于15?L，尺寸可根據(jù)飼養(yǎng)架實(shí)際高度和寬度調(diào)整，使用前采用3％～5％的高錳酸鉀溶液消毒，滿(mǎn)水浸泡7?d以上。循環(huán)凈化裝置循環(huán)凈化裝置應(yīng)包括以下設(shè)備。進(jìn)水管，配過(guò)濾網(wǎng)。過(guò)濾系統(tǒng)，包括：一級(jí)過(guò)濾層，為白棉過(guò)濾層；二級(jí)過(guò)濾層，為石英培菌球過(guò)濾層；三級(jí)過(guò)濾層，為生化棉過(guò)濾層。排水管，應(yīng)設(shè)置散水孔。循環(huán)泵。環(huán)境條件溫度室溫為24?℃～30?℃，24?h溫差不應(yīng)超過(guò)3?℃。水溫為25?℃～28?℃，24?h溫差不應(yīng)超過(guò)2?℃。濕度空氣濕度為40％～60％。光強(qiáng)采取光暗比為14?h:10?h方式培育，早6點(diǎn)至晚8點(diǎn)為照明期，光強(qiáng)為60?μmol?m-2s-1～120?μmol?m-2s-1。水質(zhì)海水青鳉循環(huán)水飼養(yǎng)應(yīng)采用自然海水或人工海水。自然海水應(yīng)取自無(wú)污染海域，使用前經(jīng)沉淀砂濾，鹽度為31±3，海水水質(zhì)應(yīng)符合GB3097一類(lèi)水質(zhì)要求；人工海水應(yīng)按照配方配制，所用試劑及濃度應(yīng)符合表1要求，應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，使用前曝氣并靜置，pH值為8.0～8.5，鹽度為31±3。培養(yǎng)液所用試劑及濃度試劑名稱(chēng)配制濃度g/L氯化鈉（NaCl）24.00硫酸鎂（MgSO4）6.30氯化鎂（MgCl2）4.66硫酸鈉（Na2SO4）4.00氯化鈣（CaCl2）1.30氯化鉀（KCl）0.67碳酸氫鈉（NaHCO3）0.20飼養(yǎng)管理飼養(yǎng)密度循環(huán)水系統(tǒng)飼養(yǎng)海水青鳉仔稚魚(yú)，魚(yú)體活動(dòng)水體密度應(yīng)低于10尾/L，最優(yōu)培養(yǎng)密度不宜超過(guò)5尾/L；海水青鳉幼魚(yú)活動(dòng)水體密度應(yīng)低于5尾/L，最優(yōu)培養(yǎng)密度不宜超過(guò)3尾/L；成魚(yú)活動(dòng)水體密度應(yīng)低于3尾/L，最優(yōu)培養(yǎng)密度不宜超過(guò)1尾/L。餌料投喂投喂量仔稚魚(yú)投喂初孵鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體密度為1×103個(gè)/L～2×103個(gè)/L，幼魚(yú)投喂初孵鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體密度為1×104個(gè)/L～2×104個(gè)/L，成魚(yú)投喂初孵鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體密度為2×105個(gè)/L～4×105個(gè)/L。仔稚魚(yú)投喂應(yīng)配合小球藻藻液，保持活動(dòng)水體中藻密度為1×103?cells/mL～5×103?cells/mL。投喂頻次每日定時(shí)投喂2次初孵鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體，期間搭配1次人工餌料。仔稚魚(yú)人工餌料粒徑0.20?mm～0.35?mm，幼魚(yú)和成魚(yú)人工餌料粒徑0.35?mm～0.80?mm。換水根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行不定期補(bǔ)換水，應(yīng)保持每?jī)芍苎a(bǔ)換水量不低于總水量的30％，期間可添加淡水保持水體鹽度穩(wěn)定。親魚(yú)靜水繁育與管理繁育裝置繁育架同5.1.1。繁育缸繁育缸材質(zhì)和消毒步驟同5.1.2。繁育缸體積宜為10?L，缸體長(zhǎng)寬比不低于2:1，底部應(yīng)配有受精卵收集裝置。繁育條件溫度室溫為24?℃～32?℃，24?h溫差不應(yīng)超過(guò)3?℃。水溫為26?℃～30?℃，24?h溫差不應(yīng)超過(guò)2?℃。濕度同5.2.2。光強(qiáng)同5.2.3。水質(zhì)同5.2.4。繁育管理親魚(yú)篩選親魚(yú)篩選條件包括。月齡：6月齡～8月齡。狀態(tài)：色澤正常、體形完整、攝食良好、活動(dòng)有力、體質(zhì)健壯。雄性親魚(yú)：臀鰭鰭條長(zhǎng)、呈完整鋸齒狀的雄魚(yú)。雌性親魚(yú)：臀鰭呈完整長(zhǎng)條狀、腹部圓潤(rùn)的雌魚(yú)。親魚(yú)密度親魚(yú)活動(dòng)水體密度不應(yīng)超過(guò)1尾/L，雌雄比例為1:1，繁育缸不宜超過(guò)6對(duì)親魚(yú)，親魚(yú)密度與雌雄配比宜為10?L水體中含2雌和2雄親魚(yú)。餌料投喂投喂量親魚(yú)投喂初孵鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體密度為2×105個(gè)/L～4×105個(gè)/L。投喂頻次每日定時(shí)投喂2次初孵鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體，期間搭配2次人工餌料。餌料粒徑為0.35?mm～0.80?mm。換水應(yīng)保持每?jī)扇論Q水量為總水量的20％～30％。受精卵孵化與管理孵化裝置孵化桶材質(zhì)應(yīng)選用透明PVC或玻璃，形狀宜為圓筒狀，底部為圓錐形，無(wú)死角，保證受精卵或鹵蟲(chóng)卵均能充氣上下浮動(dòng)。孵化配件配有氧氣泵、止逆閥、氣量調(diào)節(jié)閥、充氣軟管等孵化配件，其中氧氣泵功率宜為1.5?W。孵化條件溫度同6.2.1。濕度同5.2.2。光強(qiáng)采取光暗比為14?h:10?h方式培育，早6點(diǎn)至晚8點(diǎn)為照明期，光強(qiáng)為80?μmol?m-2s-1～120?μmol?m-2s-1。溶解氧水體溶解氧應(yīng)大于8.0?mg/L。水質(zhì)同5.2.4。孵化管理孵化前處理受精卵采集后應(yīng)采用潔凈海水反復(fù)沖洗，去除水體中的親魚(yú)糞便等雜質(zhì)。投放入孵化桶前應(yīng)在體視解剖鏡下觀(guān)察胚胎受精情況，采用解剖針剝除壞死的受精卵。孵化密度保持受精卵孵化水體密度不超過(guò)500枚/L，最優(yōu)孵化密度為200枚/L～300枚/L。保持活體餌料鹵蟲(chóng)卵孵化密度為10?g/L。換水受精卵孵化應(yīng)保持每?jī)扇論Q水量為總水量的20％～30％。保持每日收集活體餌料鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體后，全部換水。孵化后管理仔稚魚(yú)孵化出膜后，應(yīng)在72?h內(nèi)采用塑料滴管或小燒杯將其移至循環(huán)水飼養(yǎng)缸，飼養(yǎng)密度同5.3.1，餌料投喂同5.3.2。質(zhì)量控制質(zhì)量要求用于海水青鳉世代培育魚(yú)種的來(lái)源應(yīng)當(dāng)清晰，保證為世代培育遺傳背景明確的海水青鳉。魚(yú)卵、仔稚魚(yú)、幼魚(yú)與親魚(yú)質(zhì)量應(yīng)符合GB/T39649和NY5073要求，具體包括以下要求。魚(yú)卵質(zhì)量要求：外形完整，無(wú)損傷，胚胎發(fā)育特征符合正常發(fā)育時(shí)期形態(tài)學(xué)觀(guān)察。用于開(kāi)展海洋污染物毒性分析用的魚(yú)卵，應(yīng)為同一發(fā)育時(shí)期的受精卵，發(fā)育時(shí)長(zhǎng)相差不宜超過(guò)6?h。仔稚魚(yú)質(zhì)量要求：尾部破殼孵出，魚(yú)體旋轉(zhuǎn)式快速游動(dòng)至水面，間歇性運(yùn)動(dòng)。1日齡魚(yú)體可上下頜不停閉合，鰾充氣。4日齡魚(yú)體游動(dòng)迅速，能夠停留在不同水層覓食。用于開(kāi)展海洋污染物毒性分析用的仔稚魚(yú)，應(yīng)為同一月齡，發(fā)育時(shí)長(zhǎng)相差不宜超過(guò)5?d。幼魚(yú)質(zhì)量要求：脊柱、頜骨等器官發(fā)育正常，各鰭條發(fā)育完善，雌雄分化特征明顯，呼吸、游泳、捕食等行為正常。用于開(kāi)展海洋污染物毒性分析用的幼魚(yú)，應(yīng)為同一月齡，發(fā)育時(shí)長(zhǎng)相差不宜超過(guò)10?d。親魚(yú)質(zhì)量要求：應(yīng)符合6.3.1。用于開(kāi)展海洋污染物毒性分析用的雌性與雄性親魚(yú)月齡應(yīng)相近，發(fā)育時(shí)長(zhǎng)相差不宜超過(guò)20?d。雌雄親魚(yú)應(yīng)具較高適配性，若出現(xiàn)明顯爭(zhēng)斗行為，應(yīng)立即調(diào)換配對(duì)。環(huán)境檢測(cè)世代培育過(guò)程應(yīng)對(duì)氣候室環(huán)境與水環(huán)境進(jìn)行定期檢測(cè)。氣候室環(huán)境按照GB14925的規(guī)定進(jìn)行檢測(cè)，水質(zhì)按照GB3097中的方法進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)頻率為每6個(gè)月1次，遇到停電、加熱元件損壞等特殊情況，應(yīng)加測(cè)1次，環(huán)境不應(yīng)發(fā)生劇烈變化。信息記錄世代培育過(guò)程應(yīng)按照附錄A的樣式，對(duì)環(huán)境參數(shù)、餌料投喂、親魚(yú)信息、繁育情況、孵化信息等數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄，應(yīng)符合下列要求：海水青鳉循環(huán)水日常飼養(yǎng)與管理信息記錄表按表A.1執(zhí)行。當(dāng)環(huán)境參數(shù)異常時(shí)，應(yīng)立即按照5.2的規(guī)定作相應(yīng)調(diào)整；海水青鳉親魚(yú)繁育與管理信息記錄表按表A.2執(zhí)行。親魚(yú)死亡率超過(guò)10％，或每尾雌魚(yú)日產(chǎn)卵量低于10枚，或魚(yú)卵受精率低于70％，則判定為繁育異常，應(yīng)立即調(diào)整投喂量、檢查溫度和光照等環(huán)境條件，按照6.2和6.3的規(guī)定作相應(yīng)調(diào)整；海水青鳉受精卵孵化與管理信息記錄表按表A.3執(zhí)行。受精卵受精后16?d孵化率低于50％，則判定為孵化異常，表明在溫度控制、病原微生物控制等方面存在問(wèn)題，應(yīng)立即檢查溫度或更換水體，按照7.2和7.3的規(guī)定作相應(yīng)調(diào)整。

（規(guī)范性）

海水青鳉世代培育信息記錄表海水青鳉循環(huán)水日常飼養(yǎng)與管理信息填寫(xiě)表A.1。循環(huán)水日常飼養(yǎng)與管理信息表日期環(huán)境參數(shù)投喂換水量記錄人水溫室溫濕度光強(qiáng)鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體人工餌料海水青鳉親魚(yú)繁育與管理信息填寫(xiě)表A.2。親魚(yú)繁育與管理信息表世代號(hào)或繁育缸編號(hào)親魚(yú)信息雌魚(yú)月齡：數(shù)量：體長(zhǎng)：雄魚(yú)月齡：數(shù)量：