新冠病毒pcr考試試題及答案

新冠病毒pcr考試試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.新冠病毒PCR檢測(cè)中，逆轉(zhuǎn)錄步驟的主要作用是：A.將DNA轉(zhuǎn)為RNAB.將RNA轉(zhuǎn)為cDNAC.擴(kuò)增DNA片段D.標(biāo)記熒光基團(tuán)答案：B2.熒光定量PCR中，Ct值的定義是：A.擴(kuò)增產(chǎn)物達(dá)到平臺(tái)期的循環(huán)數(shù)B.擴(kuò)增產(chǎn)物熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定閾值的循環(huán)數(shù)C.擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束時(shí)的總循環(huán)數(shù)D.熒光信號(hào)首次檢測(cè)到的循環(huán)數(shù)答案：B3.新冠病毒PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室分區(qū)中，禁止帶入擴(kuò)增產(chǎn)物的區(qū)域是：A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.樣本處理區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：A4.采集新冠病毒檢測(cè)樣本時(shí)，咽拭子應(yīng)擦拭的部位是：A.扁桃體及咽后壁B.舌尖C.上顎D.牙齦答案：A5.下列哪種情況會(huì)導(dǎo)致PCR檢測(cè)出現(xiàn)假陰性？A.樣本中病毒載量過(guò)低B.擴(kuò)增產(chǎn)物污染C.引物與靶序列非特異性結(jié)合D.熒光探針降解答案：A6.新冠病毒PCR檢測(cè)中，內(nèi)參基因（如RPP30）的主要作用是：A.增加擴(kuò)增效率B.監(jiān)測(cè)樣本采集和提取過(guò)程是否有效C.提高檢測(cè)靈敏度D.區(qū)分不同病毒亞型答案：B7.用于新冠病毒RNA提取的離心管，最關(guān)鍵的質(zhì)量要求是：A.透明B.無(wú)RNA酶C.耐高溫D.可重復(fù)使用答案：B8.熒光定量PCR反應(yīng)體系中，Taq酶的主要功能是：A.結(jié)合引物B.水解探針釋放熒光C.催化dNTP聚合D.穩(wěn)定反應(yīng)體系pH答案：C9.新冠病毒PCR檢測(cè)樣本若需48小時(shí)后檢測(cè)，應(yīng)保存于：A.4℃B.20℃C.80℃D.室溫答案：C10.擴(kuò)增曲線出現(xiàn)“拖尾”現(xiàn)象，最可能的原因是：A.引物二聚體B.模板濃度過(guò)高C.探針濃度過(guò)低D.反應(yīng)體系Mg2+濃度不足答案：A11.新冠病毒ORF1ab基因和N基因同時(shí)陽(yáng)性時(shí)，結(jié)果應(yīng)判為：A.陽(yáng)性B.陰性C.不確定D.需重測(cè)答案：A12.實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行PCR檢測(cè)時(shí)，空氣消毒最常用的方法是：A.75%乙醇噴灑B.紫外線照射（波長(zhǎng)254nm）C.含氯消毒劑擦拭D.臭氧熏蒸答案：B13.下列哪項(xiàng)不屬于PCR實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)的基本要求？A.穿防護(hù)服B.戴N95口罩C.實(shí)驗(yàn)后立即處理廢棄物D.在普通實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行樣本處理答案：D14.提取新冠病毒RNA時(shí)，加入β巰基乙醇的主要目的是：A.裂解細(xì)胞B.抑制RNA酶活性C.沉淀RNAD.提高離心效率答案：B15.若某樣本Ct值為38，且內(nèi)參基因Ct值正常，應(yīng)如何處理？A.直接判為陽(yáng)性B.判為陰性C.重復(fù)檢測(cè)，若仍為38則判陽(yáng)性D.報(bào)告“檢測(cè)結(jié)果不確定”答案：C二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共30分，多選、少選、錯(cuò)選均不得分）1.新冠病毒PCR檢測(cè)的樣本類型包括：A.鼻咽拭子B.痰液C.血液D.糞便答案：ABCD2.影響PCR擴(kuò)增效率的因素有：A.引物設(shè)計(jì)特異性B.dNTP濃度C.退火溫度D.模板純度答案：ABCD3.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制應(yīng)包括：A.陰性質(zhì)控品檢測(cè)B.陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)C.人員培訓(xùn)記錄D.儀器校準(zhǔn)記錄答案：ABCD4.假陽(yáng)性結(jié)果可能的原因有：A.擴(kuò)增產(chǎn)物交叉污染B.樣本間交叉污染C.引物二聚體D.內(nèi)參基因缺失答案：ABC5.熒光定量PCR與普通PCR的區(qū)別包括：A.可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程B.需熒光標(biāo)記物C.可定量檢測(cè)模板D.無(wú)需電泳檢測(cè)答案：ABCD6.樣本采集時(shí)需注意的事項(xiàng)有：A.嚴(yán)格無(wú)菌操作B.避免樣本被唾液污染C.標(biāo)注樣本信息（姓名、時(shí)間等）D.采集后立即放入病毒保存液答案：ABCD7.RNA提取失敗的表現(xiàn)可能有：A.內(nèi)參基因Ct值＞35B.擴(kuò)增曲線無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期C.樣本OD260/OD280比值＜1.8D.產(chǎn)物電泳無(wú)條帶答案：ABCD8.實(shí)驗(yàn)室分區(qū)管理的目的是：A.避免交叉污染B.提高檢測(cè)效率C.規(guī)范操作流程D.符合生物安全要求答案：ABCD9.結(jié)果報(bào)告應(yīng)包含的信息有：A.檢測(cè)方法（PCR）B.檢測(cè)基因（ORF1ab、N）C.Ct值D.檢測(cè)機(jī)構(gòu)名稱及時(shí)間答案：ABCD10.生物安全柜使用時(shí)需注意：A.操作前開(kāi)機(jī)運(yùn)行15分鐘B.物品擺放避免遮擋出風(fēng)口C.操作后用75%乙醇消毒臺(tái)面D.手臂頻繁進(jìn)出柜內(nèi)答案：ABC三、判斷題（每題1分，共10分，正確打“√”，錯(cuò)誤打“×”）1.PCR技術(shù)只能檢測(cè)DNA，不能檢測(cè)RNA。（×）2.Ct值越小，樣本中初始病毒載量越高。（√）3.樣本反復(fù)凍融不會(huì)影響RNA質(zhì)量。（×）4.內(nèi)參基因陰性時(shí)，檢測(cè)結(jié)果仍可報(bào)告為陰性。（×）5.熒光染料法（如SYBRGreen）的特異性高于探針?lè)?。（×?.擴(kuò)增區(qū)可以進(jìn)行樣本核酸提取操作。（×）7.RNA提取時(shí)，離心速度過(guò)低可能導(dǎo)致核酸丟失。（√）8.假陽(yáng)性僅由擴(kuò)增產(chǎn)物污染引起。（×）9.結(jié)果報(bào)告需經(jīng)雙人審核后簽發(fā)。（√）10.PCR實(shí)驗(yàn)室需配備獨(dú)立的空調(diào)系統(tǒng)。（√）四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共30分）1.簡(jiǎn)述新冠病毒PCR檢測(cè)的基本流程。答案：樣本采集→樣本運(yùn)輸→樣本處理（滅活、核酸提?。孓D(zhuǎn)錄（RNA→cDNA）→配制PCR反應(yīng)體系→擴(kuò)增（熒光定量PCR儀運(yùn)行）→結(jié)果分析（讀取Ct值，判讀陰陽(yáng)性）→報(bào)告審核與簽發(fā)。2.為什么PCR實(shí)驗(yàn)室需嚴(yán)格分區(qū)？常見(jiàn)分區(qū)有哪些？答案：分區(qū)是為避免交叉污染（如試劑區(qū)被樣本或擴(kuò)增產(chǎn)物污染）。常見(jiàn)分區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)（配制反應(yīng)體系）、樣本處理區(qū)（核酸提?。U(kuò)增區(qū)（PCR擴(kuò)增）、產(chǎn)物分析區(qū)（結(jié)果判讀）。3.簡(jiǎn)述Ct值的臨床意義及判讀標(biāo)準(zhǔn)（以新冠檢測(cè)為例）。答案：Ct值是擴(kuò)增產(chǎn)物熒光信號(hào)達(dá)到閾值的循環(huán)數(shù)，與初始病毒載量負(fù)相關(guān)。判讀標(biāo)準(zhǔn)：Ct≤37（雙靶標(biāo)陽(yáng)性）為陽(yáng)性；Ct≥40為陰性；37＜Ct＜40需重復(fù)檢測(cè)，若仍在此范圍可判陽(yáng)性（需結(jié)合臨床）。4.列舉3種PCR檢測(cè)中常見(jiàn)的污染類型及預(yù)防措施。答案：（1）擴(kuò)增產(chǎn)物污染：分區(qū)操作，使用一次性器材，設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照在最后處理；（2）樣本間交叉污染：嚴(yán)格無(wú)菌操作，每樣本更換槍頭；（3）試劑污染：使用專用試劑，避免反復(fù)凍融。5.簡(jiǎn)述RNA提取的關(guān)鍵步驟及注意事項(xiàng)。答案：關(guān)鍵步驟：樣本裂解（破壞病毒結(jié)構(gòu)釋放RNA）、去除蛋白（如離心或磁珠吸附）、RNA洗滌（去除雜質(zhì)）、RNA洗脫（溶于無(wú)RNA酶水）。注意事項(xiàng)：全程無(wú)RNA酶（使用DEPC水、專用器材），避免RNA降解（冰上操作，縮短提取時(shí)間）。6.內(nèi)參基因在新冠病毒PCR檢測(cè)中的作用是什么？若內(nèi)參基因陰性說(shuō)明什么？答案：作用：監(jiān)測(cè)樣本采集、運(yùn)輸、提取過(guò)程是否有效（如樣本是否被稀釋、提取是否失?。?nèi)參陰性提示樣本可能采集不合格（如拭子未接觸到感染部位）、提取過(guò)程失敗（RNA丟失或降解），需重新采樣檢測(cè)。五、案例分析題（每題10分，共20分）1.某實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)一批樣本時(shí)，發(fā)現(xiàn)多份樣本內(nèi)參基因Ct值均＞35（正常范圍為2530），但新冠病毒靶基因均為陰性。分析可能原因及處理措施。答案：可能原因：（1）樣本采集量不足（如拭子未充分接觸咽后壁）；（2）病毒保存液失效（RNA降解）；（3）核酸提取效率低（試劑過(guò)期、操作失誤）；（4）內(nèi)參引物/探針失效。處理措施：（1）核查樣本采集記錄，確認(rèn)是否規(guī)范；（2）檢查病毒保存液及提取試劑有效期；（3）用陽(yáng)性參考品驗(yàn)證提取試劑有效性；（4）更換內(nèi)參引物/探針并重新檢測(cè)；（5）所有內(nèi)參異常樣本需重新采樣檢測(cè)。2.某樣本檢測(cè)結(jié)果顯示ORF1ab基因Ct=35，N基因Ct=39，內(nèi)參基因Ct=28（正常）。如何判讀結(jié)果？需進(jìn)一步做哪些驗(yàn)證？答案：判讀：ORF1