家兔實(shí)驗(yàn)彌散血管內(nèi)凝血.ppt

家兔實(shí)驗(yàn)性彌散性血管內(nèi)凝血,Experiment of disseminated intravascular coagulation (DIC) in rabbit,目的,應(yīng)用靜脈注射兔腦浸液方法，復(fù)制家兔實(shí)驗(yàn)性DIC。通過實(shí)驗(yàn)和幾項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)的測(cè)定及結(jié)果分析，了解實(shí)驗(yàn)室診斷DIC的常用方法，聯(lián)系理論知識(shí)加深理深DIC的病因及發(fā)病機(jī)理。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,稱重、固定（清醒狀態(tài)）、局部浸潤(rùn)麻醉 手術(shù)：頸動(dòng)脈插管，采集正常血標(biāo)本 造模：i.v.2兔腦浸液，60mg/kg（慢,2ml/min，注意兔子掙扎) 采集DIC血標(biāo)本，離心分離血漿備用 測(cè)定樣本：KPTT,PT,Fg,3P 結(jié)果匯總,測(cè)定指標(biāo)和方法,白陶土部分凝血活酶時(shí)間（Kaolin partial thromboplastin time , KPTT）玻片法（挑絲法） 凝血酶原時(shí)間(prothrombin time, PT)玻片法（挑絲法） 纖維蛋白原（fibrinogen, Fg）含量，飽和鹽水法 血漿魚精蛋白副凝固試驗(yàn)（Plasma Protamine Paracoagulation test，3P）,清潔平皿和試劑37預(yù)熱,滴加20ul血漿和20ul KPTT試劑,用清潔針頭混勻預(yù)熱3min,滴加20ul 0.025mol/L氯化鈣溶液,立即啟動(dòng)秒表，同時(shí)用清潔針頭不斷混勻和挑撥,一旦挑出絲狀物立即停止秒表記錄時(shí)間（正常值3545s）,KPTT測(cè)定方法,清潔平皿和試劑37預(yù)熱,滴加20ul血漿預(yù)熱1min,滴加40ul PT試劑，立即啟動(dòng)秒表， 同時(shí)用清潔針頭不斷混勻和挑撥,一旦挑出絲狀物立即停止秒表記錄時(shí)間（正常值1113s）,PT測(cè)定方法,纖維蛋白含量測(cè)定方法,37孵浴3min，520nm波長(zhǎng)比色，讀取OD值,纖維蛋白含量測(cè)定方法,各加生理鹽水4.5ml 各加飽和鹽水4.5ml （調(diào)零管） （測(cè)定管）,正常血漿各0.5ml DIC血漿各0.5ml,3P試驗(yàn),輕輕搖勻，37水浴孵浴15min，黑色背景觀察沉淀物,結(jié)果,注意事項(xiàng),1.采血時(shí)不得將動(dòng)脈夾移開，以免放血后不能及時(shí)夾閉動(dòng)脈造成放血過量和失血。 2.采集抗凝血需掌握好血液:抗凝劑之比例(1:9)并充分混勻（顛倒混勻）。 3.注射兔腦浸液前，要做好第二次采血的一切準(zhǔn)備工作，并向?qū)Ч軆?nèi)注入生理鹽水（因原來插管內(nèi)可能已有血栓阻塞）。 4.注射兔腦浸液是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵步驟，要緩慢推注(2ml/min)，密切注意家兔反應(yīng)，如有明顯的呼吸急促和躁動(dòng)不安，應(yīng)立即放血。,注意事項(xiàng),5.離心分離血漿前，必須先平衡離心管。分離出血漿吸入清潔試管備用。 6.測(cè)KPTT、PT的平皿必須清潔、干燥、無油脂。KPTT試劑使用前須搖勻。 7.測(cè)Fg時(shí)，血漿一旦與飽和鹽水接觸。要立即進(jìn)行充分混勻，以防產(chǎn)生局部沉淀，同樣，比濁前亦要再次混勻。 8.測(cè)3P時(shí)，要先加血漿，再加魚精蛋白，以免魚精蛋白接觸管底不潔物造成假陽性。,討論,兔腦浸液引起DIC的原因和機(jī)制？ KPTT、PT、Fg和3P各指標(biāo)的臨床意義是什么？分別反應(yīng)什么變化? KPTT、PT、Fg和3P的測(cè)定原理及發(fā)生變化的原因和機(jī)制?,DIC動(dòng)物模型的復(fù)制方法,凝血酶 蛇毒 兔腦浸液 內(nèi)毒素 羊水,實(shí)驗(yàn)室診斷DIC的方法,篩選指標(biāo)： 血小板計(jì)數(shù)（platelet，PLT） 凝血酶原時(shí)間(prothrombin time，PT) 纖維蛋白原含量（fibrinogen，F(xiàn)g） 纖溶指標(biāo)：FDP測(cè)定、3P試驗(yàn)、優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間、D-二聚體，等,實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)(以下三項(xiàng)以上異常),PT延長(zhǎng)或縮短3s以上，KPTT延長(zhǎng)或縮短10s以上； 血漿血小板活化產(chǎn)物含量增加：-TG、PF4、TXB2、P-選擇素；