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家兔實(shí)驗(yàn)性彌散性血管內(nèi)凝血,Experiment of disseminated intravascular coagulation (DIC) in rabbit,目的,應(yīng)用靜脈注射兔腦浸液方法,復(fù)制家兔實(shí)驗(yàn)性DIC。通過實(shí)驗(yàn)和幾項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)的測(cè)定及結(jié)果分析,了解實(shí)驗(yàn)室診斷DIC的常用方法,聯(lián)系理論知識(shí)加深理深DIC的病因及發(fā)病機(jī)理。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,稱重、固定(清醒狀態(tài))、局部浸潤(rùn)麻醉 手術(shù):頸動(dòng)脈插管,采集正常血標(biāo)本 造模:i.v.2兔腦浸液,60mg/kg(慢,2ml/min,注意兔子掙扎) 采集DIC血標(biāo)本,離心分離血漿備用 測(cè)定樣本:KPTT,PT,Fg,3P 結(jié)果匯總,測(cè)定指標(biāo)和方法,白陶土部分凝血活酶時(shí)間(Kaolin partial thromboplastin time , KPTT)玻片法(挑絲法) 凝血酶原時(shí)間(prothrombin time, PT)玻片法(挑絲法) 纖維蛋白原(fibrinogen, Fg)含量,飽和鹽水法 血漿魚精蛋白副凝固試驗(yàn)(Plasma Protamine Paracoagulation test,3P),清潔平皿和試劑37預(yù)熱,滴加20ul血漿和20ul KPTT試劑,用清潔針頭混勻預(yù)熱3min,滴加20ul 0.025mol/L氯化鈣溶液,立即啟動(dòng)秒表,同時(shí)用清潔針頭不斷混勻和挑撥,一旦挑出絲狀物立即停止秒表記錄時(shí)間(正常值3545s),KPTT測(cè)定方法,清潔平皿和試劑37預(yù)熱,滴加20ul血漿預(yù)熱1min,滴加40ul PT試劑,立即啟動(dòng)秒表, 同時(shí)用清潔針頭不斷混勻和挑撥,一旦挑出絲狀物立即停止秒表記錄時(shí)間(正常值1113s),PT測(cè)定方法,纖維蛋白含量測(cè)定方法,37孵浴3min,520nm波長(zhǎng)比色,讀取OD值,纖維蛋白含量測(cè)定方法,各加生理鹽水4.5ml 各加飽和鹽水4.5ml (調(diào)零管) (測(cè)定管),正常血漿各0.5ml DIC血漿各0.5ml,3P試驗(yàn),輕輕搖勻,37水浴孵浴15min,黑色背景觀察沉淀物,結(jié)果,注意事項(xiàng),1.采血時(shí)不得將動(dòng)脈夾移開,以免放血后不能及時(shí)夾閉動(dòng)脈造成放血過量和失血。 2.采集抗凝血需掌握好血液:抗凝劑之比例(1:9)并充分混勻(顛倒混勻)。 3.注射兔腦浸液前,要做好第二次采血的一切準(zhǔn)備工作,并向?qū)Ч軆?nèi)注入生理鹽水(因原來插管內(nèi)可能已有血栓阻塞)。 4.注射兔腦浸液是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵步驟,要緩慢推注(2ml/min),密切注意家兔反應(yīng),如有明顯的呼吸急促和躁動(dòng)不安,應(yīng)立即放血。,注意事項(xiàng),5.離心分離血漿前,必須先平衡離心管。分離出血漿吸入清潔試管備用。 6.測(cè)KPTT、PT的平皿必須清潔、干燥、無油脂。KPTT試劑使用前須搖勻。 7.測(cè)Fg時(shí),血漿一旦與飽和鹽水接觸。要立即進(jìn)行充分混勻,以防產(chǎn)生局部沉淀,同樣,比濁前亦要再次混勻。 8.測(cè)3P時(shí),要先加血漿,再加魚精蛋白,以免魚精蛋白接觸管底不潔物造成假陽性。,討論,兔腦浸液引起DIC的原因和機(jī)制? KPTT、PT、Fg和3P各指標(biāo)的臨床意義是什么?分別反應(yīng)什么變化? KPTT、PT、Fg和3P的測(cè)定原理及發(fā)生變化的原因和機(jī)制?,DIC動(dòng)物模型的復(fù)制方法,凝血酶 蛇毒 兔腦浸液 內(nèi)毒素 羊水,實(shí)驗(yàn)室診斷DIC的方法,篩選指標(biāo): 血小板計(jì)數(shù)(platelet,PLT) 凝血酶原時(shí)間(prothrombin time,PT) 纖維蛋白原含量(fibrinogen,F(xiàn)g) 纖溶指標(biāo):FDP測(cè)定、3P試驗(yàn)、優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間、D-二聚體,等,實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)(以下三項(xiàng)以上異常),PT延長(zhǎng)或縮短3s以上,KPTT延長(zhǎng)或縮短10s以上; 血漿血小板活化產(chǎn)物含量增加:-TG、PF4、TXB2、P-選擇素;
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