中藥辛夷有效成分的提取工藝研究

聊城大學(xué)本科畢業(yè)論文本科畢業(yè)論文題 目 辛夷中有效成分的提取工藝研究 專 業(yè) 化學(xué) 作者姓名 姬慧敏 學(xué) 號(hào) 2011202353 單 位 化學(xué)化工學(xué)院11級(jí)2班 指導(dǎo)教師 柳仁民 2015年 5 月 教務(wù)處編原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究取得的成果。除文中已經(jīng)引用的內(nèi)容外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得聊城大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均在文中以明確的方式表明。本人承擔(dān)本聲明的相應(yīng)責(zé)任。學(xué)位論文作者簽名： 日期： 指 導(dǎo) 教 師 簽 名: 日期： 目 錄前 言11. 中藥有效成分提取方法11.1 溶劑提取法2 1.1.1 溶劑提取法的原理2 1.1.2 提取方法2 1.1.3 溶劑的選擇21.2 酶法提取21.3 破碎提取法21.4 微波提取法 31.5 超聲波提取法31.6 水蒸氣蒸餾法41.7 超臨界流體萃取法42. 高效液相色譜法簡介42.1 高效液相色譜法的簡介4 2.1.1 高效液相色譜的特點(diǎn)4 2.1.2液相色譜與氣相色譜的區(qū)別5 2.1.3 液相色譜的分離原理和分類42.2 高效液相色譜法的應(yīng)用53. 辛夷性狀及藥理作用研究63.1 辛夷性狀63.2 主要成分63.3 藥理作用84. 實(shí)驗(yàn)部分94.1 實(shí)驗(yàn)儀器9 4.2 試劑與材料102 4.3 色譜條件104.4 提取過程10 4.4.1 不同提取方法的比較10 4.4.2 不同提取溶劑的比較10 4.4.3 不同甲醇濃度的比較10 4.4.4 不同料液比的比較11 4.4.5 不同提取時(shí)間的比較115.結(jié)果與討論125.1 HPLC分離條件的優(yōu)化125.1.1不同提取方法的比較125.1.2 不同提取溶劑提取效率的比較135.1.3 不同濃度甲醇提取效率的比較145.1.4不同料液比提取效率的比較145.1.5不同提取時(shí)間提取效率的比較15結(jié)論16參考文獻(xiàn)172摘 要為了將中藥辛夷中的有效成分提取出來，分別采用冷浸、超聲與加熱回流三種提取方法，使用甲醇、乙醇、乙酸乙酯作提取溶劑，對中藥辛夷中活性成分進(jìn)行提取，并通過對高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）分離條件的優(yōu)化，建立了分離分析辛夷中活性成分的最佳方法，用HPLC對提取液進(jìn)行了分析，比較了不同提取方法，不同提取溶劑提取率的高低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：提取方法、提取溶劑的種類、溶劑的濃度、以及料液比和提取時(shí)間均明顯地影響提取效率。其中用純甲醇為提取劑，料液比為1:15,采用加熱回流的方法在75 條件下提取1.0 h時(shí)的提取效率最佳。 關(guān)鍵詞：高效液相色譜；辛夷；冷浸；超聲；回流 Abstract To traditional Chinese medicine effective components of magnolia flower extract, cold soak, ultrasonic and heating reflux were used respectively to three extraction methods, the use of methanol, ethanol, ethyl acetate as extraction solvents, extraction of active ingredients in Chinese medicine magnolia flower, and through to the High Performance Liquid Chromatography (HPLC), High Performance Liquid Chromatography, HPLC) optimized separation conditions, established the separation analysis method of the active ingredient in magnolia flower, use HPLC to extract was analyzed, and compared the different extraction methods, different extraction solvents extraction yield of high and low. Experimental results show that the extracting method, extraction solvent kinds, concentration of solvent and material liquid ratio and extracting time were significantly affect the extraction efficiency. Pure methanol as the extraction agent, and solid-liquid ratio is 1:15, adopting the method of heating reflux extracted under the condition of 75 and 1.0 h the extraction efficiency of the best.Key Words: HPLC; Magnolia flower; marinating; ultrasonic; reflux.中藥辛夷中有效成分的提取工藝研究前 言中藥辛夷為木蘭科植物望春花(Magnolia biondii Pamp)、玉蘭(Magnolia denudataDesr)或武當(dāng)玉蘭(Magnolia sprengeri Pamp)的干燥花蕾，是中國藥典收載品種1。具有祛風(fēng)通竅的作用，是治療頭痛、鼻淵、鼻塞不透氣、牙齒疼痛等癥的常用中藥。用于治療鼻病的成藥有20多個(gè)品種，都是以辛夷作為首選藥源。近年來，藥理研究證實(shí)辛夷具有降壓、抑菌、抗炎、抗過敏作用2,3，其中的主要成分望春花素具有較強(qiáng)的抗過敏、抗炎癥作用4?，F(xiàn)有研究表明，辛夷化學(xué)成分復(fù)雜，望春玉蘭(Magnolia biondii Pamp.)的二氯甲烷提取物中分離到6個(gè)主要化學(xué)成分，為辛夷脂素，松脂素二甲醚，木蘭脂素，里立脂素B-二甲醚，其中木蘭脂素含量最高5。從線萼辛夷(M.fargesii cheng)的氯仿提取物中分離出8個(gè)化合物6。從望島玉蘭花蕾的乙醇提取物中分麗得到3種晶體7。近年來，由于HPLC引用了高壓泵和高靈敏度的檢測器，使其具有很多優(yōu)越性，主要表現(xiàn)為分離效能高、選擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快、分析對象范圍廣。HPLC廣泛用于天然產(chǎn)物、生命活性物質(zhì)、生物大分子、高聚物、高分子化合物以及無機(jī)物的分離測定。因此，利用HPLC對辛夷中主要化合物的提取方法進(jìn)行研究具有非常重要的意義。本課題對中藥辛夷中有效成分用不同溶劑和不同提取方法等進(jìn)行研究，建立辛夷中有效成分的高效液相色譜的分析方法。通過HPLC分析，結(jié)果表明：提取方法、提取溶劑的種類、溶劑的濃度、以及料液比和提取時(shí)間均明顯地影響提取效率。其中用純甲醇為提取劑，料液比為1:15，采用加熱回流的方法在75 條件下提取1.0 h時(shí)的提取效率最佳。1.中藥有效成分提取方法我國的天然藥物資源豐富，但中藥成分一般較復(fù)雜，有效成分含量差別大， 雜質(zhì)比重大，而且藥物中往往多種有效成分共存，為尋找新的藥物，弄清藥物中各種有效成分的藥理作用，必須將有效成分從中草藥中提取出來，才能進(jìn)一步的研究和利用，所以中草藥中有效成分的提取是中藥化學(xué)研究的首要前提。提取，是指用適當(dāng)?shù)姆椒ɑ蜻m當(dāng)?shù)娜軇⒅胁菟幹械幕瘜W(xué)成分從植物組織中抽提出來，由此提取出來的有效成分往往不止一種，為得到其中的某種有效成分，還需進(jìn)一步的分離。中藥有效成分的提取一般采用傳統(tǒng)的溶劑提取法，而為了提高提取率及克服傳統(tǒng)提取方法的缺點(diǎn)，近些年來出現(xiàn)了一些新技術(shù)，如水蒸氣蒸餾法、超聲波提取法、微波提取法、超臨界CO2流體萃取法等。1.1 溶劑提取法1.1.1 溶劑提取法的原理溶劑提取法是根據(jù)中草藥中各種成分在溶劑中的溶解性質(zhì)，選用對活性成分溶解度大，對不需要的溶出成分溶解度小的溶劑，而將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來的方法。當(dāng)溶劑加到中草藥原料（需適當(dāng)粉碎）中時(shí)，溶劑由于擴(kuò)散、滲透作用逐漸通過細(xì)胞壁透入到細(xì)胞內(nèi)，溶解了可溶性物質(zhì)，而造成細(xì)胞內(nèi)外的濃度差，于是細(xì)胞內(nèi)的濃溶液不斷向外擴(kuò)散，溶劑又不斷進(jìn)入藥材組織細(xì)胞中，如此多次往返，直至細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡時(shí)，將此飽和溶液濾出，繼續(xù)多次加入新溶劑，就可以把所需要的成分近于完全溶出或大部溶出。1.1.2 提取方法用溶劑提取中草藥成分，常用滲漉法、浸漬法、煎煮法、回流提取法及連續(xù)提取法等。1.1.3 溶劑的選擇運(yùn)用溶劑提取法的關(guān)鍵，是選擇適當(dāng)?shù)娜軇?。溶劑選擇適當(dāng)，就可以比較順利地將需要的成分提取出來。選擇溶劑要注意以下三點(diǎn)：（1) 溶劑對有效成分溶解度較大，而對雜質(zhì)溶解度小；(2) 溶劑不能與中藥的成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；(3) 溶劑要經(jīng)濟(jì)、易得、使用安全等。1.2 酶法提取酶法提取是通過酶解反應(yīng)強(qiáng)化傳質(zhì)過程，從而提高提取效率。酶解是一種能夠從植物體內(nèi)最大限度提取有效成分的方法之一8。中藥的有效成分經(jīng)常與蛋白質(zhì)、果膠、淀粉、植物纖維等雜質(zhì)混合，這些雜質(zhì)不但影響植物細(xì)胞中活性成分的浸出，而且影響中藥液體制劑的澄清度。選擇恰當(dāng)?shù)拿?，不但可以將這些雜質(zhì)祛除，而且可以通過酶反應(yīng)較溫和地將植物組織分解，加速有效成分的釋放提取，還可以促進(jìn)脂溶性成分轉(zhuǎn)化為易溶于水的成分而有利于提取。 1.3 破碎提取法破碎提取法是使中草藥在破碎提取器中加入適當(dāng)溶劑后破碎，從而可以提取到其中的有效成分的一種方法9。有關(guān)研究表明，此法提取速度快且完全，不需加熱，可以節(jié)省時(shí)間、能源和溶劑，這種方法雖然省時(shí)且不用高溫加熱，但由于其提取率并非最高而使其只局限于實(shí)驗(yàn)研究。1.4 微波提取法微波提取（microwave assisted extraction）是指利用微波能將中藥細(xì)胞內(nèi)的有效成分提取出來的一種新技術(shù)，其原理是微波加熱促使中藥植物細(xì)胞內(nèi)的極性物質(zhì)吸收電磁能，產(chǎn)生的熱量促使細(xì)胞內(nèi)溫度上升，壓力增大，將細(xì)胞膜、細(xì)胞壁沖破，形成孔洞，細(xì)胞外的溶劑通過孔洞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，而有效成分則溶解在溶劑中10。微波提取可對中草藥中的不同成分進(jìn)行選擇性加熱，易于將目標(biāo)成分提取，因而具有選擇性。微波提取設(shè)備簡單，使用范圍廣，可用于對中藥中揮發(fā)油、苷類、生物堿、多糖、黃酮、有機(jī)酸等有效成分的提取，與傳統(tǒng)提取法相比，它提取時(shí)間短、效率高、污染小、重現(xiàn)性好，但微波提取要求中藥含有一定的水分，對含水少的細(xì)胞不易破壁，有效成分難提取。微波對某些化合物有一定的降解作用，微波對人體，尤其是眼睛有一定程度的影響，所以應(yīng)用時(shí)，應(yīng)選擇合理的提取工藝條件，并注意微波的泄露和防護(hù)11。1.5 超聲波提取法超聲波輔助萃取是超聲能量輔助作用下的提取方法，主要是利用超聲波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超聲波的次級(jí)效應(yīng)，如機(jī)械振動(dòng)、乳化、擴(kuò)散、擊碎、化學(xué)效應(yīng)等也能加速欲提取成分的擴(kuò)散釋放并充分與溶劑混合，利于提取，提高中草藥有效成分的產(chǎn)率12。另外超聲波破碎過程是一個(gè)物理過程，浸提過程中無化學(xué)反應(yīng)，被浸提的生物活性物質(zhì)在短時(shí)間內(nèi)保持不變，生物活性不減。 1.6 水蒸氣蒸餾法此法適用于具有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞，與水不發(fā)生反應(yīng)，有難溶或不溶于水的化學(xué)成分的提取，如揮發(fā)油。分為共水蒸餾法、通水蒸氣蒸餾法和水上蒸餾法三種。1.7 超臨界流體萃取法它是利用超臨界狀態(tài)下的流體為萃取劑，從液體或固體中萃取中藥材中的藥效成分并進(jìn)行分離的方法。本方法提取效率高，生產(chǎn)周期短，易發(fā)現(xiàn)天然植物中新的活性成分，極少損失易揮發(fā)組分或破壞生理活性物質(zhì)，無溶劑殘留，產(chǎn)品質(zhì)量高。綜上所述，為縮短提取時(shí)間，提高產(chǎn)率，對于中藥中已知的有效成分的研究，僅需采取最適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行提取；對于中藥中未知的有效成分的研究，可采用對照的方法，采用不同的提取方法，盡可能完全地提取出有效成分。2. 高效液相色譜法簡介2.1 高效液相色譜法的簡介高效液相色譜法(High-Performance Liquid Chromatography，HPLC)是以液體作為流動(dòng)相，并采用顆粒極細(xì)的高效固定相的柱色譜分離技術(shù)13-14。高效液相色譜對樣品的適用性廣，不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，因而彌補(bǔ)了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機(jī)化合物中，可用氣相色譜分析的約占20%，而80%則需用高效液相色譜來分析，高效液相色譜已經(jīng)廣泛應(yīng)用于藥物的含量測定、組成分析、質(zhì)量控制等方面。2.1.1 高效液相色譜的特點(diǎn)(1) 高壓：流動(dòng)相為液體,流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。(2) 高效：分離效能高。可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。(3) 高靈敏度：紫外檢測器可達(dá)0.01 ng，進(jìn)樣量在L數(shù)量級(jí)。(4) 應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。(5) 分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個(gè)樣品在15-30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成，一般小于1 h。2.1.2液相色譜與氣相色譜的區(qū)別 （1）液相色譜可完成難度較高的分離，是因?yàn)椋阂合嗌V固定相類型多，分析時(shí)可選擇的余地大，氣相色譜則不可能；液相色譜室溫下便可操作，低溫利于色譜分離。 （2）液相色譜不受試樣和熱穩(wěn)定性的限制，適合相對分子質(zhì)量大、難氣化、不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)的分離、分析，而氣相色譜僅可以分析在操作溫度下氣化而不分解的物質(zhì)，即氣體和沸點(diǎn)較低的化合物。 （3）液相色譜試樣制備簡單，且回收試樣也容易，可用于大量制備。2.1.3 液相色譜的分離原理和分類根據(jù)被分離混合物中各組分在固定相及流動(dòng)相中的吸附能力、分配系數(shù)、離子交換作用或分子尺寸大小的差異進(jìn)行分離，其實(shí)質(zhì)是試樣分子與流動(dòng)相或洗脫液以及固定相分子間的作用力，作用力的大小決定色譜過程的保留行為11。根據(jù)分離機(jī)制的不同，液相色譜可分為：液固吸附色譜、液液分配色譜、化學(xué)鍵合相色譜、離子交換色譜和分子排阻色譜。2.2 高效液相色譜法的應(yīng)用由于HPLC具備了高靈敏度、高分辨率、速度快、色譜柱可反復(fù)使用、流出組分易收集的特點(diǎn)。使得它在化工、生化、醫(yī)學(xué)藥物臨床、有機(jī)化學(xué)、環(huán)保監(jiān)測等方面都有廣泛的用途15。例如：（1）藥物分析：中藥質(zhì)量控制，化學(xué)藥物質(zhì)量控制，抗生素質(zhì)控分析，生化藥質(zhì)量控制，新型高效手性藥物中手性對映體含量的測定等。 (2）環(huán)境污染物分析：大氣、水、土壤和食品中的多環(huán)芳烴、多環(huán)聯(lián)苯，陰離子表面活性劑，有機(jī)氯農(nóng)藥、有機(jī)磷農(nóng)藥，除草劑，酚類胺類、黃曲霉毒素等污染物的分離與測定。(3) 食品質(zhì)量分析：農(nóng)藥殘留，獸藥殘留；防腐劑、抗氧化劑、人工合成色素等食品添加劑的分離與測定，保健食品中的功效成分檢測，真菌毒素分析等。(4) 前沿生命科學(xué)分析：DNA電泳與色譜分析，生物技術(shù)藥物純化及鑒定，生物標(biāo)志物色譜分析，蛋白質(zhì)組學(xué)研究等。3.辛夷性狀及藥理作用研究辛夷為木蘭科木蘭屬植物紫玉蘭望春花的花蕾，藥典收載有3種，民間替代品達(dá)數(shù)十種之多，性味辛溫，神農(nóng)本草經(jīng)注“辛夷主五臟身體寒熱風(fēng)，頭腦痛”，具有祛風(fēng)、通竅止痛等功效。目前對辛夷開發(fā)和利用僅在于辛夷精油提取和鼻炎用藥，而辛夷精油的提取率低，精油也不能全面地利用，辛夷還有其他的藥理作用也未開發(fā)出來。辛夷不同部位如圖1至圖3所示。 圖1生長中的玉蘭花蕾 圖2茂盛的玉蘭花植株 圖3晾干的辛夷 3.1 辛夷性狀辛夷為木蘭科木蘭屬植物紫玉蘭望春花的花蕾玉蘭或武當(dāng)玉蘭的干燥花蕾。冬末春初花未開放時(shí)采收，除去枝梗，陰干。望春花16：本品呈長卵形，似毛筆頭，長1.22.5 cm，直徑0.81.5 cm?；砍＞叨坦＃L約5 mm,梗上有類白色點(diǎn)狀皮孔。苞片23層，每層2片，兩層苞片間有小鱗芽，苞片外表面密被灰白色或灰綠色茸毛，內(nèi)表面類棕色，無毛。花被片9，類棕色，外輪花被片3，條形，約為內(nèi)兩輪長的1/4，呈萼片狀，內(nèi)兩輪花被片6，每輪3，輪狀排列。雄蕊和雌蕊多數(shù)，螺旋狀排列。體輕，質(zhì)脆。氣芳香，味辛涼而稍苦。玉蘭：長1.53 cm，直徑11.5 cm。基部枝梗較粗壯，皮孔淺棕色。苞片外表面密被灰白色或灰綠色茸毛?；ū黄?，內(nèi)外輪同型。武當(dāng)玉蘭：長24 cm，直徑12 cm。基部枝梗粗壯，皮孔紅棕色。苞片外表面密被淡黃色或淡黃綠色茸毛，有的最外層苞片茸毛已脫落而呈黑褐色?；ū黄?012（15），內(nèi)外輪無顯著差異。3.2 主要成分辛夷有效成分的數(shù)和量由于品種和產(chǎn)地的不同有很大的差別。辛夷的有效成分是辛夷有效利用的重要依據(jù)，也是其藥用價(jià)值的重要來源。因品種和產(chǎn)地的不同，辛夷成分的數(shù)和量有很大差別，同時(shí)由于采取不同的提取和分析手段，辛夷的主要成分也因此呈現(xiàn)出不同的報(bào)導(dǎo)。李衛(wèi)民17等用CO2超臨界萃取技術(shù)提取到69種化合物，鑒別出46個(gè)化合物，用水蒸氣提取出50種化合物，鑒定出38種。張鑫18等用CO2超臨界萃取技術(shù)提取到54種，且全可鑒定出，而中藥大辭典記載了辛夷有78種成分。據(jù)張鑫19等報(bào)道辛夷不同的部位所含有的成分是一樣的。辛夷的主要成分可以分為以下幾大類18,19,21：(1) 烯類：-蒎烯，-蒎烯，香檜烯，水化香檜烯，-欖香烯，雙環(huán)欖香烯，蒈烯，香橙烯，-松油烯，-衣蘭油烯，-衣蘭油烯，-畢澄茄烯，畢澄茄油烯，菖蒲烯，芳- 姜黃烯，-月桂烯，佛術(shù)烯，檸檬烯，-水芹烯，-水芹烯，-旁波烯，-芹子烯，順式和反式丁香烯等。(2) 醇類：-桉葉醇，-松油醇，喇叭醇，芳樟醇，月桂烯醇，葑醇，順式胡椒醇，欖香醇，蒎醇，玫瑰醇，橙花醇，橙花叔醇，金合歡醇，香茅醇。(3) 酯類：乙酸龍腦酯，乙酸金合酯，乙酸二氫松油酯，-乙酸香茅醇酯，丙酸芳樟酯，鄰苯二甲酸二乙酯，左旋的乙酸龍腦酯等。(4) 黃酮甙類：蕓香甙，紫丁香甙及花色甙類化合物。(5) 木脂素類：松脂素二甲醚，里立脂素B二甲醚，木蘭脂素，辛夷脂紗，芝麻脂素。另外含有桉葉油素，葵酸，油酸，樟腦，龍腦，真細(xì)辛酮，反細(xì)辛酮，二十一碳烷，二十三碳烷等類物質(zhì)。在這些物質(zhì)中未見報(bào)導(dǎo)那種物質(zhì)含量是最高的，的提取物中含量最高的是桉葉油素，而李衛(wèi)民17用二氧化碳超臨界萃取技術(shù)含量最高的是1，8-桉油精，用水蒸餾法含量最高的是金合歡醇。高從元20等利用多種核磁共振方法，從河南的望春花辛夷中研究出了一種新的物質(zhì)：4， 5，7-三羥基黃酮醇-7-0(6-對-香豆酰基)-D-葡萄糖甙。這種物質(zhì)屬于黃酮類，它的鑒定為辛夷的抗炎藥理可作出較好解釋。主要成分的結(jié)構(gòu)如圖4、圖5所示20：圖4 望春花素(A) 的分子結(jié)構(gòu)圖5 望春花黃酮醇苷I (B)的分子結(jié)構(gòu)3.3 藥理作用辛夷目前的臨床應(yīng)用主要是治療過敏性鼻炎,急慢性鼻炎和其他的鼻炎癥狀,而這個(gè)藥理作用僅是辛夷較局限的一面辛夷還有其他的藥理作用如:收斂、抑菌、抗病毒、降血壓能保護(hù)粘膜,促進(jìn)分泌物的吸收，改善局部血液循環(huán)等,下面分別敘述: （1) 抗組織胺作用22，辛夷油能直接對抗慢反物質(zhì)(Srs-a)對肺條的收縮,也能拮抗組織胺和乙酰膽堿誘發(fā)的回腸過敏性收縮和過敏性哮喘，作用的物質(zhì)主要是：芳樟醇，檸檬醛丁香油酚，香豆素類，木脂素類和腺苷類，它們抑制釋放組織胺的活性。(2) 抗炎作用23，辛夷油有較強(qiáng)的抗炎效應(yīng)，總結(jié)出辛夷油對炎癥組織的毛細(xì)血管通透性有降低作用，能明顯減輕充血、水腫、壞死和炎細(xì)胞浸潤等炎性反應(yīng)，辛夷的抗炎作用機(jī)理是對白細(xì)胞介素1(IL-1)、腫瘤壞死因子(TNF)和磷脂酶A2(PLA2)這幾種炎癥介質(zhì)有抑制作用。(3) 局部收斂，刺激和麻醉作用24，辛夷能治療鼻炎就是因?yàn)檫@一藥理作用，辛夷治療鼻部炎癥時(shí)能產(chǎn)生收斂作用而保護(hù)粘膜表面，并由于微血管擴(kuò)張，局部血液循環(huán)改善，促進(jìn)分泌物的吸收，以致炎癥減退，鼻暢通，癥狀緩解或消除。(4) 中樞抑制作用25，國外醫(yī)學(xué)介紹辛夷中含有多種中樞抑制成分：O-甲基丁香醚，真細(xì)辛酮和反細(xì)辛酮。對d-烏藥堿中樞抑制作用的機(jī)理闡敘為，其阻斷多巴胺的受體抑制交感神經(jīng)攝取多巴胺。(5) 降壓作用26，辛夷的水或醇的提取物靜注，肌注或腹腔注射，具有一定的降壓作用。辛夷的降壓機(jī)制與中區(qū)神經(jīng)系統(tǒng)無多大的關(guān)系，無抗腎上腺素的作用，也無釋放組織胺的作用，而是和擴(kuò)張血管,阻斷神經(jīng)節(jié)及抑制心臟有關(guān)，抑制心臟的主要成分也是醚溶性的，口服降壓作用不明顯。(6) 對橫紋肌的作用，辛夷的酚性生物堿對腹直肌和坐骨神經(jīng)縫肌，能呈現(xiàn)箭毒作用。(7) 對子宮及腸道平滑肌的影響27，辛夷煎劑和流膏能興奮子宮,在未明顯影響呼吸和血壓及劑量時(shí)，無論靜注和灌胃給藥，都呈現(xiàn)這種作用,其中的成分是溶于水及乙醇的非揮發(fā)性物質(zhì)。木蘭堿可使腸的運(yùn)動(dòng)亢進(jìn),張力上升。新木脂素類化合物有抗鈣離子的作用。(8) 抗病原微生物的作用，15%30%辛夷煎劑對趾間毛癬菌等10種致病性的真菌有抑制作用。高濃度辛夷制劑對白色念珠菌,金黃色葡萄球菌,乙型鏈球菌，白喉?xiàng)U菌。痢疾桿菌，碳疽桿菌，流感病毒也有不同程度抑制。此外辛夷有抗血小板活化因子的活性。由于辛夷的木蘭箭毒堿等毒性成分在腸道內(nèi)吸收緩慢，吸收后也易經(jīng)腎臟排泄,在血中濃度較小28，所以辛夷作藥用的毒性小，是一個(gè)好的藥物來源。辛夷的這8種藥理作用現(xiàn)在沒有完全開發(fā)出來,這主要是辛夷的提取分析鑒定目前還沒有一個(gè)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),提取率較低,成分的鑒別也不同,同時(shí)辛夷的藥理作用也被其它的物質(zhì)主宰,所以這些諸多的因素導(dǎo)致辛夷還不能完全被利用。4.實(shí)驗(yàn)部分4.1 實(shí)驗(yàn)儀器ThermoFisher 高效液相色譜儀HPLC system(美國賽默飛科技有限公司)；Ultimate3000 HPLC泵；Chromeleon 7.1色譜工作站；Redone 7725i定量進(jìn)樣閥；HH-6型數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）；KQ3200型超聲清洗器（濟(jì)寧科源超聲波設(shè)備有限公司）；AR1140型電子天平（ 奧豪斯儀器有限公司）；0.45 m膜；循環(huán)水泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；抽濾瓶；容量瓶。4.2 試劑與材料用于樣品提取的試劑(水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯)為分析純試劑（天津試劑三廠）；用于HPLC檢測的試劑(甲醇)為色譜純試劑；實(shí)驗(yàn)用水為純凈水。辛夷藥材購于聊城市利民大藥店。4.3 色譜條件色譜柱：Spherigel C18柱（250 mm4.6 mm I.D,5 m）；流速：1 ml/min，進(jìn)樣量：10 ul，檢測波長：254 nm，流動(dòng)相：甲醇：水= 55:45 等度洗脫26 min。4.4 提取過程將辛夷粉碎，分別按照以下步驟進(jìn)行提取。4.4.1 不同提取方法的比較(1) 精確稱取辛夷藥材粉末1.0840 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL無水乙醇，冷浸提取0.5 h。(2) 精確稱取辛夷藥材粉末1.0418 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL無水乙醇，在75 下加熱回流0.5 h。 (3) 精確稱取辛夷藥材粉末1.0770 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL無水乙醇， 超聲0.5 h。提取液過濾后，置于25 mL容量瓶中，用乙醇定容，通過0.45 m膜過濾，待測。4.4.2 不同提取溶劑的比較(1) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0044 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL甲醇，在75下加熱回流0.5 h。(2) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0064 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL無水乙醇，在75 下加熱回流0.5 h。(3) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0077 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL乙酸乙酯，在75 下加熱回流0.5 h。無水乙醇、甲醇提取液經(jīng)過濾后，分別置于25 mL容量瓶中，分別用無水醇、甲醇定容；乙酸乙酯提取液需旋干后用甲醇溶解、置于25 mL容量瓶中，加甲醇定容，通過0.45 m膜過濾，待測。4.4.3 不同甲醇濃度的比較(1) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0660 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL 60%甲醇，在75 下加熱回流0.5 h。(2) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0845 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL 80%甲醇在75 下，加熱回流0.5 h。(3) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0044 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL 100%甲醇，在75 下加熱回流0.5 h。 提取液過濾，置于25 ml容量瓶中，用甲醇定容，過0.45 m濾膜，待測。4.4.4 不同料液比的比較(1) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0044 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL甲醇，75 加熱回流0.5 h。(2) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0038 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入15 mL甲醇，75 加熱回流0.5 h。(3) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0054 g，于100 mL圓底燒瓶中，加入20 mL甲醇，75 加熱回流0.5 h。提取液過濾后，置于25 mL容量瓶中，用甲醇定容，通過0.45 m膜過濾，待測。4.4.5 不同提取時(shí)間的比較(1) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0044 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL甲醇，75 加熱回流，回流0.5 h。(2) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0073 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL甲醇，75 加熱回流1.0 h。(3) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0075 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL甲醇，75 加熱回流1.5 h。(4) 精確稱辛夷藥材粉取末1.0078 g，于50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL甲醇，75 加熱回流2.0 h。提取液過濾后，置于25 mL容量瓶中，用甲醇定容，通過0.45 m膜過濾，待測。5.結(jié)果與討論5.1 HPLC分離條件為使目標(biāo)化合物辛夷有效成分獲得較好的分離效果，使用甲醇：水= 55:45 等度洗脫各組分分離情況如圖6所示：圖6辛夷有效成分HPLC圖色譜條件：Spherigel C18柱（250 mm4.6 mm I.D.，5 m），流速：1 ml/min，進(jìn)樣量：10 ul，檢測波長：254 nm，流動(dòng)相：甲醇：水 =55:45 等度洗脫26 min。結(jié)論：由圖6可以看出目標(biāo)產(chǎn)物的分離效果較好，且根據(jù)文獻(xiàn)和峰面積及保留時(shí)間的比較可推測這兩種物質(zhì)為：A望春花黃酮醇苷I 、B望春花素 。 5.1.1 不同提取方法的比較為了考察不同提取方法對于提取效率的影響，使用無水乙醇為提取溶劑，分別采用冷浸提取0.5 h、超聲提取0.5 h、加熱回流（75）提取0.5 h。提取液經(jīng)抽濾真空過濾后，用HPLC分析，結(jié)果如圖7所示：圖7不同提取方法下各有效成分的峰面積比較圖由圖7可以看出：采用相同的提取溶劑，不同的提取方法對提取效率也有顯著的影響，其中的加熱回流提取效率最高，超聲次之，冷浸的提取效率最低。故加熱回流提取方法的效率最高。5.1.2 不同提取溶劑提取效率的比較為了選擇合適的提取溶劑，分別加入甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯為提取溶劑加熱回流提取0.5 h，提取液經(jīng)抽濾瓶真空過濾，0.45m膜過濾后用HPLC分析，結(jié)果如圖8所示：圖8不同提取溶劑下各有效成分的峰面積比較圖由圖8可以看出：在相同提取方法及提取時(shí)間下，提取溶劑的種類對提取效率影響非常顯著，其提取效率由高到低依次為甲醇、乙醇、乙酸乙酯。故用甲醇提取效率最高。 5.1.3 不同濃度甲醇提取效率的比較為了選擇甲醇合適的提取濃度，分別加入60%甲醇、80%甲醇、100%甲醇為提取溶劑加熱回流提取0.5 h，提取液經(jīng)抽濾瓶真空過濾后，用HPLC分析，結(jié)果如圖9所示：圖9不同甲醇濃度下各有效成分的峰面積圖 由圖9可以看出：溶劑濃度對提取成分的提取率有較大影響，純甲醇提取效果是最好的。 5.1.4不同料液比提取效率的比較為了考察料液比對于提取效率的影響，用甲醇作為提取溶劑，分別加入10 ml，15 m，20 ml甲醇加熱回流0.5 h，提取液經(jīng)抽濾瓶真空過濾后，用HPLC分析，結(jié)果如圖10所示：圖10不同料液比下各有效成分的峰面積圖由圖10可以看出：使用甲醇為提取溶劑，不同的料液比對提取效率隨著料液比的增大表現(xiàn)出先增大再減小的趨勢，因此，在料液比為1:15時(shí)的提取效率最高。 5.1.5不同提取時(shí)間提取效率的比較為了考察提取時(shí)間對于提取效率的影響，使用甲醇為提取溶劑，分別將藥品加熱回流0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h，提取液經(jīng)抽濾瓶真空過濾后，用HPLC分析，結(jié)果如圖11所示：圖11不同時(shí)間下各有效成分的峰面積圖由圖11可以看出：在相同提取方法及提取下，提取時(shí)間對提取效率影響顯著，其提取效率隨時(shí)間的增長，表現(xiàn)出先增高再降低的趨勢，故提取時(shí)間為1.0 h時(shí)提取效率最高。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)通過采用冷浸、超聲和加熱回流提取三種方法，考察了不同提取方法對于提取效率的影響，結(jié)果表明加熱回流效率最高；通過采用甲醇、乙醇、乙酸乙酯為提取溶劑，結(jié)果表明甲醇為最佳提取溶劑；通過采用60%、80%、100%濃度甲醇進(jìn)行提取，結(jié)果表明純甲醇效果最好；通過采用提取料液比對于提取效率的影響，結(jié)果表明料液比為1:15時(shí)的效果最好；通過采用0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h的提取時(shí)間得知1.0 h的效果最好。由此建立了辛夷有效成分的最佳提取工藝為：以純甲醇為提取溶劑且1:15的料液比75下加熱回流1.0 h進(jìn)行提取最佳。參考文獻(xiàn)1 中華人民共和國藥典委員會(huì)，中華人民共和國藥典2005年版第l部，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，126-127.2 楊西曉，莊至銓，辛夷化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展，中草藥，1998, 29(7): 490-4923 朱雄偉，楊晉凱，胡道偉，辛夷成分及藥理應(yīng)用研究進(jìn)展，海峽藥學(xué)，2002, 14(5): 5-74 李小莉、張永忠，木蘭脂素抗炎、抗過敏作用的實(shí)驗(yàn)研究，中草藥，2002, 33(11): 1014-10155 馬玉良，韓桂秋，辛夷中木脂素成分的研究J.中國中藥雜志，1995, 20(2): 102-102.6 Chen C C.Planta Med,1988,54(5):438-438.7 陳雅研，高從元，喬梁，等，辛夷水溶