環(huán)氧乙烷滅菌培訓電子張建國編制.ppt

環(huán)氧乙烷滅菌知識培訓,主講：張建國,員工培訓教材,什么是滅菌？,什么是滅菌 什么是消毒 影響滅菌的因素,滅菌的方式 EO滅菌的流程 有關EO的監(jiān)測,GB18279-2000框架與內容 EO滅菌通則 滅菌確認 過程和監(jiān)測 產品放行,EO滅菌確認策劃 確認報告 復審報告,課程內容,如何進行滅菌？,滅菌確認和控制 的依據是什么？,如何編寫EO 滅菌確認方案 及確認報告？,第一部分,環(huán)氧乙烷滅菌有關基本概念,第一章 滅菌與消毒的基本知識,一、滅菌與消毒概念 二、微生物 三、細菌 四、簡介芽胞 五、產品初始污染菌要求 六、指示物,一、 滅菌與消毒概念（1）,1、滅菌（sterilization）： 滅菌是使產品無任何微生物過程。滅菌目地是殺死污染的微生物從而使非無菌產品轉成無菌產品。,一、 滅菌與消毒概念（2）,2、消毒（disinfection ）： 消毒是指用物理或化學方法殺滅或清除傳播媒介上有病原微生物，使其達到無害化。試驗菌殺滅率99.9%以上，或對自然界殺滅率90%以上可判為符合消毒使用要求。,一、 滅菌與消毒概念（3）,3、存活概率 ： 存活概率取決于 ：（1）微生物的數(shù)量和種類；（2）還取決于滅菌前和滅菌過程中微生物所處的環(huán)境 。 因此，被滅菌前產品的總體中任何單個產品的無菌程度只能用總體存在非無菌產品的概率來表示。,一、 滅菌與消毒概念（4）,4、滅菌特殊過程 某些不能由隨后產品檢驗和試驗來充分證實，其結果的生產過程稱之為“特殊過程”。 滅菌就是一個特殊過程；因為其過程的功效不能通過對產品的檢驗來證實，因此，滅菌過程需在用前確認，過程的性能需進行常規(guī)監(jiān)測。,二、 微生物（1）,微生物概念： 微生物是存在于自然界中的一群形體微小、構造簡單、肉眼直接看不見，必須借助光學顯微鏡或電子顯微鏡放大幾百倍、幾千倍，甚至幾萬倍才能觀察到的低等生物。一般由單細胞構成，也有簡單的多細胞，但具有一定的形態(tài)結構、生理功能，并能在適宜的環(huán)境中快速的生長和繁殖。,二、 微生物（2）,微生物分類： 1、非細胞型微生物 例如：病毒 2、原核細胞型微生物 例如：細菌 3、真核細胞型微生物 例如：真菌,三、 細菌（1）,1、細菌的形態(tài)： 細菌的外形有球形、桿形、螺形三種基本形態(tài)。分別稱為球菌、桿菌、和螺旋菌。,三、 細菌（2）,2、細菌的基本結構 ：,四、 簡介芽胞（1）,某些細菌在一定環(huán)境條件下，能在菌體內形成一個園形或卵園形的小體，稱為芽孢（spore）。 由于在菌體內部形成，一般叫做內芽孢。它能保存細菌的全部生命活性。芽孢形成以后，菌體即成為空殼。以后在適當?shù)臈l件下，芽孢有可發(fā)芽而形成新的菌體。,四、 簡介芽胞（2）,細菌芽孢對熱、干燥、化學消毒劑、輻射等均有強大的抵抗力，其耐殺滅性要比增殖狀態(tài)高許多倍。芽孢在自然界中可存活長達數(shù)十年之久。有的芽孢能耐煮沸幾小時，有的芽孢在5%炭酸中數(shù)日不死。 由于芽孢致密耐熱，因此當進行滅菌時常以殺芽孢作為評價滅菌效果的依據。,四、 簡介芽胞（3）,芽胞的形態(tài),五、產品初始污染菌要求,產品初始污染菌通常用于描述材料或產品中的活微生物群體。 1、產品初始污染菌數(shù)：滅菌產品管道類內腔10cfu/件數(shù)，外部100cfu/件數(shù)，非管道類100cfu/件數(shù)；敷料數(shù)100cfu/gm； 2、生產、裝配、包裝車間空氣細菌數(shù)要求:滅菌與消毒產品分別500cfu/m3和2000cfu/m3，物體表面細菌總數(shù)分別10和20cfu/c（GB15980-1995）,六、指示物,1、“指示物”指包括指示片、條、帶、器等各種形式的指示器件 。 2、環(huán)氧乙烷（滅菌）指示物 3、生物指示物（我公司是以枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC 9372）做為指示菌片） 4、擬定在日常臨測中使用的接種載體和生物指示物，試驗微生物的額定總數(shù)必須不少于1 106。,第二節(jié) 介紹環(huán)氧乙烷,一、理化性質 二、滅菌機理 三、環(huán)氧乙烷貯存室要求,第二節(jié) 介紹環(huán)氧乙烷,二、理化性質（1） 環(huán)氧乙烷（Ethylene Oxide簡稱EO）又名氧化乙烷或氧丙烷。EO的分子式為C2H4O，分子量44.05 。 EO的沸點為10.8 EO液體無色透明，具有芳香的醚味 EO是易燃、易爆的有毒氣體，與空氣混合后形成的爆炸極限為3% -100%。 EO的蒸汽壓比較大，因此對滅菌物品的穿透力很強 。 EO化學性質活潑 ，溫度高于40 開始引起聚合反應。故EO鋼瓶應在陰涼干燥通風的地方保存并規(guī)定其有效期。,第二節(jié) 介紹環(huán)氧乙烷,二、理化性質（2） 環(huán)氧乙烷還可以與惰性氣體（如：二氧化碳C02，氮氣N2）相混合成混合氣體，常用的比例環(huán)氧乙烷占10%、20%、30%。 混合氣體安全性好，滅菌時穿透性更好，有益于滅菌效果。 環(huán)氧乙烷對人的毒害作用主要表現(xiàn)在直接接觸和吸入。吸入環(huán)氧乙烷氣體能刺激呼吸道，量多時可發(fā)生急性中毒 。 環(huán)氧乙烷氣體或液體對皮膚也有毒害作用，若不慎將環(huán)氧乙烷濺到皮膚上或眼內，應立即用水沖洗。,第二節(jié) 介紹環(huán)氧乙烷,一、滅菌機理（1） EO可以殺滅各種微生物，包括細菌繁殖體、芽孢、病毒和真菌孢子，是一種廣譜滅菌劑。 滅菌機理主要是由于EO能與微生物的蛋白質上的DNA和RNA發(fā)生非持異性烷基化作用。 EO能與蛋白質上的游離羥基（-C00H）氨基（-NH2）、硫氫基（-SH）和羧基（-0H）發(fā)生烷化作用，取代不穩(wěn)定的氫原子而形成帶有羧乙根（CH2CH20H）的化合物。蛋白質上的基團被烷基化，使蛋白質失去了在基本代謝中需要的反應基，阻礙了細菌蛋白質正常的化學反應和新陳代謝，從而導致微生物死亡。,第二節(jié) 介紹環(huán)氧乙烷,一、滅菌機理（2） EO能抑制一些微生物酶的活性，包括磷酸致活酶、肽酶、膽堿化酶和膽堿脂酶。 EO 也可和DNA ，和RNA發(fā)生烷基化作用，而導致微生物的滅活 。 注： EO 氣體滅菌時對濕度有要求，相當于濕度底于30%以下時，不可能達到滅菌，即使延長滅菌時間也無效。,第二節(jié) 介紹環(huán)氧乙烷,三、環(huán)氧乙烷貯存室的要求： 安放EO或其它的混合滅菌氣體鋼瓶（罐或筒）的貯存室必須是安全和通風的。 環(huán)氧乙烷貯存室內的環(huán)境條件極易受到溫度變化影響。故貯存室應有溫度控制的設備和措施。,第三節(jié) 影響環(huán)氧乙烷滅菌的因素,一、預真空 二、溫度 三、微生物的含水量和滅菌環(huán)境的相對濕度 四、濃度 五、被滅菌物品有機物、微生物量對滅菌作用的影響 六、材料、包裝及裝載 七、菌齡的影響 八、環(huán)氧乙烷殘留量,第二部分,滅菌方法及流程,第一章 滅菌的方法,一、蒸汽 二、干熱 三、環(huán)氧乙烷（EO） 四、射線輻照 五、蒸汽福爾馬林,第二章 環(huán)氧乙烷滅菌的流程,預處理,抽真空,加入EO氣體,滅 菌 循 環(huán),處理,滅菌,通風,加溫,加濕,保持,放入空氣,抽真空,第三章 有關EO的檢測,一、可用飽和硫代硫酸鈉溶液加入10%酚紅溶液，用稀鹽酸將PH值調至微酸性，此時溶液呈無色透明。 二、用濾紙條浸以試液貼于可疑漏氣部位，如濾紙變?yōu)榉奂t色則表明已有EO滲出。,第三部分,GB18279-2000標準介紹,第一章 標準的框架和內容簡介,第一節(jié) 標準的框架 第二節(jié) 標準通則 第三節(jié) EO滅菌確認 第四節(jié) 過程控制和監(jiān)測 第五節(jié) 產品放行,第一節(jié) 標準的框架,一、正文 1、范圍 2、引用標準 3、定義 4、通則 5、確認 6、過程控制與監(jiān)測 7、產品放行 二、附錄,(強制性要求),(非強制性要求),指南,指南,指南,指南,第二節(jié) 標準通則,需要滅菌的醫(yī)療器械應在保證生物負載低的條件下進行生產。采用GB/T19001ISO9001或GB/T19002ISO9002質量管理體系可以滿足該要求，并建立書面程序和說明。,第二節(jié) 標準通則,一、人員 應由有資格的人員負責設備維護，EO滅菌的確認和常規(guī)控及產品放行工作。負責下列工作的人員應接受和具有必要的資歷： 微生物學試驗； 設備安裝、維護； 物理性能鑒定； 日常滅菌操作 校準 滅菌過程設定 設備技術規(guī)格,第二節(jié) 標準通則,二、滅菌過程設定 制定滅菌工藝時，所有影響滅菌過程有效性的因素都要考慮，這些因素應包括： 產品設計 ； 包裝 ； 被滅菌物品擺放方式 ； 預處理要求 ； 處理要求； 滅菌柜中的殘留空氣含量； 滅菌劑加入 滅菌作用條件（溫度、相對濕度、EO濃度、時間） 排出條件 通風要求,第二節(jié) 標準通則,三、產品的適用性 產品需經EO滅菌的，在其設計時需考慮的方面： 不應改變產品結構； 對材料性能的影響及可能帶來的生物學危害； EO殘留水平將會影響產品對滅菌的適用性； 產品還有可能與EO或稀釋氣體起反應； 產品設計應保證其有效性和安全性不受滅菌影響 ； 產品需再次滅菌時，其物理、化學性能不受影響； 高的濕度和壓力的變化可能影響包裝密封性能； 根據產品的設計確定滅菌劑最難達到的部位,第二節(jié) 標準通則,四、滅菌過程 滅菌過程應包括預處理和（或）處理、滅菌周期和通風。滅菌過程中須考慮的物理性能因素有： 達到真空的程度和速度； 柜的泄漏率（負壓和正壓下進行） ； 處理過程中蒸汽注入時產生的壓力升高的程度 ； 加入滅菌劑時壓力升高的程度和達到規(guī)定壓力的速度，以及用于檢測EO濃度的參數(shù)的相互關系 ； 排除滅菌劑所要達到的真空程度和速度 ； 加入空氣時壓力升高的程度和達到的速度 ； 上面 的重復次數(shù)以及重復中的任何變化,第二節(jié) 標準通則,五、設備 標準中規(guī)定： 應以文件寫明EO滅菌所用設備（包括預處理區(qū)）的規(guī)范； 滅菌劑使用前或使用中的貯存條件，應能保證滅菌劑的質量和成分持續(xù)符合規(guī)范 ；,第二節(jié) 標準通則,六、校準 標準中規(guī)定： 應為滅菌過程確認和日?？刂扑玫乃锌刂啤⒅甘竞陀涗浭称方⒁粋€有效的校準系統(tǒng)，并形成文件，加以保存。 該系統(tǒng)應符合GB/T19001的4.11或GB/T19001的4.12的要求；,第二節(jié) 標準通則,七、維護 標準中規(guī)定： 應按照書面程序去計劃和進行防護。應規(guī)定每次計劃的維護程序和維護頻次，并形成文件。 應對設備進行全面的維護并加以記錄，否則不能用于醫(yī)療器械滅菌 ； 應按GB/T19001或GB/T19002的的規(guī)定，保存維護記錄； 應由指定人員定期 評審維護計劃、維護程序和維護記錄。,第三節(jié) EO滅菌確認,確認程序必須形成文件并按GB/T19001的4.11或GB/T19002的規(guī)定保存確認記錄。 確認包括試運行和性能鑒定的全過程。其關系圖示如下：,確認,第三節(jié) EO滅菌確認,依據的標準： 1、中國標準 2、歐洲標準 3、國標標準 4、產品標準,第三節(jié) EO滅菌確認,1、中國標準 GB18297-2000 醫(yī)療器械、環(huán)氧乙烷滅菌確認和常規(guī)控制 GB16886.7-2001 醫(yī)療器械生物學評價EO滅菌殘留量 GB18282-2000 醫(yī)療保建產品滅菌、化學指示物 GB1828.1-2000 環(huán)氧乙烷滅菌用生物指示物 GB15980-1995一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標準 GB/T19633-2005最終滅菌醫(yī)療器械的包裝,第三節(jié) EO滅菌確認,2、歐洲標準 EN550:1994 醫(yī)療器械環(huán)氧乙烷滅菌的驗證和常規(guī)控制 EN1422:1997醫(yī)療器械用環(huán)氧乙烷滅菌柜規(guī)范 EN868-1 需滅菌醫(yī)療器械的包裝材料和體系 第一部分 一般要求和測試方法,第三節(jié) EO滅菌確認,3、國標標準 ISO11135:1994 醫(yī)療器械環(huán)氧乙烷滅菌的驗證和常規(guī)控制 ISO10993.7:1995 醫(yī)療器械生物學評價 第七部分 環(huán)氧乙烷滅菌殘留量 ISO11607:2003最終滅菌醫(yī)療器械的包裝 4、產品標準,第三節(jié) EO滅菌確認,標準中要求： 1、必須證明預處理（若采用）、滅菌和通風設備符合設備規(guī)范要求。 2、必須從校準所有用于控制、指示和記錄滅菌過程的儀器開始。 試運行目的： 是用于證明設備符合規(guī)范。,一、 試運行（滅菌設備）,滅菌設備的以下幾個方面應附合規(guī)范要求： 1、資質文件證據； 2、計量器具校驗 ； 3、滅菌設備的安裝 ； 4、輔助設備； 5、電器控制系統(tǒng) ； 6、報警系統(tǒng) ； 7、計算機系統(tǒng) 。,一、 試運行（空載試驗）,滅菌設備的試運行包括以下幾個方面： 1、預處理； 2、處理 ； 3、滅菌 ； 4、通風； 5、重新試運行 ； 6、初始微生物監(jiān)測,二、 性能鑒定,性能鑒定的目的是：用于證明按規(guī)定程序使用經試運行的設備時能生產出合格的產品 滅菌設備的物理性能鑒定包括以下四個方面： 1、預處理； 2、處理 ； 3、滅菌 ； 4、通風。,二、 性能鑒定,滅菌柜的性能鑒定主要包括以下幾方面： 1、真空速率確認； 2、泄漏速率確認 ； 3、滅菌柜加濕確認 ； 4、滅菌柜柜壁、空間溫度均勻性； 5、滅菌柜載荷狀態(tài)下溫度均勻性確認； 6、微生物性能鑒定； 7、滅菌柜通風確認,二、 性能鑒定,微生物性能鑒定的通用方法： 1、方法A：存活曲線法； 2、方法B：部分陰性法 ； 3、方法C：半周期法 本方法是在除時間外所有其他過程參數(shù)不變情況下,確定無存活菌的EO最短作用時間應再重復兩次實驗來證實該最短滅菌時間，兩次滅菌重復試驗均應表明生物指示物上無菌生長。規(guī)定的作用時間應至少為最短滅菌時間的2倍。還要進行能讓存活菌復蘇的短周期運轉，以證明復蘇技術可靠性。,二、 性能鑒定,生物指示的放置 1、生物指示物應放于產品中最難滅菌的位置。如果產品設計不能將生物指示物放于其最難滅菌的地方，則應采用能提供已知數(shù)量活芽孢懸液給產品染菌。芽孢懸液應符合GB18281ISO11138-1標準 2、生物指示物或染菌產品應均勻地分布于被滅菌物品中，但放置點應包括滅菌條件下最難滅菌的地方 。,二、 性能鑒定,根據已鑒定的實踐經驗通常進行微生物鑒定試驗時，宜采用以下生物指示物數(shù)量： 1、滅菌柜室可用體積小于等于5m3時至少20個； 2、滅菌器柜室可用體積5m3至10m3時，每增加1 m3應增加2個生物指示物； 3、滅菌器柜室可用體積大于10m3每增加2m3應增加2個生物指示物。,三、 確認證明,標準規(guī)定： 1、應以文件形式出具確認報告，該報告應由負責編制、審核和批準人員簽名并保存。 2、確認報告應包括或參考具體確認過的產品和EO滅菌過程規(guī)范文件。確認報告還應包括下列各過程的相關參數(shù)和公差： 預處理； 處理 ； 滅菌 ； 通風。,四、 重新確認,標準規(guī)定： 1、確認和隨后的重新確認數(shù)據，應至少每年復審一次。還應測定重新確認的程度（范圍），并形成文件。確認和重新確認的評審，應形成文件，并保留重新確認記錄。 2、所有重新確認的報告，應形成文件。該報告應由負責制定、審核和批準該原先確認報告的工作人員簽名。,第四節(jié) 過程控制和監(jiān)測,應記錄保留每一滅菌周期數(shù)據，以證明已達到滅菌過程規(guī)范。 應保留GB/T19001或GB/T19001規(guī)定的所有記錄。 用于監(jiān)測滅菌過程的EO滅菌指示物、復蘇培養(yǎng)基條件應符合GB18281ISO11138-1標準。 應盡量在滅菌周期完成后立即將生物指示物從被滅菌物品中取出并進行培養(yǎng)。 產品是否經過滅菌處理，應有明確標識,第四節(jié) 過程控制和監(jiān)測,常規(guī)檢測的生物指示物分布于滅菌物品中的數(shù)量應足夠多。根據通常做常規(guī)檢測的實踐經驗，采用以下生物指示物數(shù)量較為適宜： 1、滅菌柜室可用體積小于等于5m3時，至少10個； 2、滅菌器柜室可用體積5m3至10m3時，每增加1 m3應增加1個生物指示物； 3、滅菌器柜室可用體積大于10m3每增加2m3應增加1個生物指示物。,第五節(jié) 產品放行,一、傳統(tǒng)的產品放行： 1、應以文件寫明某一具體被滅菌周期要達到的標準，這些標準應包括： a）符合物理循環(huán)規(guī)范； b）任何經處理的EO滅菌指示物培養(yǎng)后均不應發(fā)現(xiàn)有試驗菌生長。 2、如果有下列情況發(fā)生，則任為產品不合格，應按相關的不合格品控制程序和糾正措施程序處理。 a）物理循環(huán)變量超出文件規(guī)定的公差；或 b）經滅菌后的生物指示物，其任何試樣中顯示有試驗菌生長。,第五節(jié) 產品放行,一、參數(shù)放行： 1、參數(shù)放行是根據產品滅菌物理參數(shù)的測量和評價，而不是根據樣品試驗結果或微生物指示物判斷滅菌的可靠性。 2、與參數(shù)放行一起使用的滅菌過程的微生物學鑒定，應提供微生物滅活的動力學數(shù)據。正確應用方法A或B能提供這些數(shù)據，但方法C（半周期法）不能提供足夠的滅活動力學信息，故不能用于參數(shù)放行。,第四部分,滅菌確認策劃方案與確認報告的編寫,第一章 EO滅菌確認策劃方案,一、環(huán)氧乙烷滅菌確認的目的： 按照規(guī)定的程序評價滅菌周期所采用的工藝技術參數(shù)是否達到滅菌要求的方法。 二、確認人員組成： 二、策劃依據： 1、依據的標準 2、滅菌產品：a）詳細說明；b）產品適應性。 3、滅菌柜說明（技術參數(shù)和校準確認） 4、使用EO濃度 5、生物指示物時間 6、確認時間,第一章 EO滅菌確認策劃方案,三、確認步驟和目的：（全部記錄保存） 1、試運行（預處理、處理、滅菌、通風） 目的：通過試運行證明設備符合規(guī)范要求。 確定設施能力、監(jiān)測位置、相互關系和監(jiān)測方式 2、物理性能鑒定 目的：確定滅菌過程參數(shù)（預處理、處理、滅菌、通風）。 目前企業(yè)已經采用EO滅菌，滅菌過程中建立了參數(shù)，可以以原來滅菌條件為基礎。結合GB18279標準進行確認，對滅菌參數(shù)作適當調整。,第一章 EO滅菌確認策劃方案,物理性能鑒定： （1）目前產品包裝驗證 （2）滅菌參數(shù)的確認： 繪制裝載圖、滅菌柜溫度分布圖 溫度：設定溫度范圍5 （3）增濕時間：設定濕度范圍15% （4）真空、EO加入壓力升高至設定壓力值（濃度及時間）、滅菌時間。 （5）、確定出最難達到的部位,第一章 EO滅菌確認策劃方案,3、微生物性能鑒定 目的：確定滅菌時間 應利用試運行和物理性能鑒定獲得的結果：溫度的冷點，產品內最不容易滅菌的地方，滅菌柜最難滅菌的地方。特別重視關鍵的特性。,第一章 EO滅菌確認策劃方案,滅菌確認參數(shù)：考慮 （1）產品還是模擬替代品，必須證明模擬替代品與產品等效。 （2）擺放方式與常規(guī)滅菌擺放方式相同。 （3）包裝與常規(guī)滅菌相同 （4）生物指示物放置（可與溫度監(jiān)測位置相同）及數(shù)量應說明，應放置產品中最難滅菌的地方。,第一章 EO滅菌確認策劃方案,（5）溫度傳感器放置點數(shù)，濕度傳感器設置位置。 （6）溫度傳感器放置產品小包裝內。 綜上確定： 滅菌溫度設定最高X，最低X，EO濃度mg/L 滅菌濕度最高X%，最低X%，滅菌壓力確定值。 測定滅菌作用時間可用： A、存活曲線法 B、部分陰性法 C、半周期法，找出存活菌的最短時間（半周期） 重復至少2次，1次短周期，1次全周期,第一章 EO滅菌確認策劃方案,4、通風 通風換氣次數(shù) 環(huán)氧乙烷殘留量的測定 四、確認的時間計劃安排 按照“5W1H”按確認方案的項目具體安排由什么人來做？什么時候做？ 五、策劃方案制定人、審核人、批準人簽名。,第二章 滅菌確認報告,如果所有滅菌確認試驗均按試驗計劃完成，能達到預期效果，對數(shù)字記錄進行分析、處理，形成確認報告。初步滅菌參數(shù)被確認為日常滅菌條件，否則重新運行整個過程的確認。,第二