中藥常規(guī)檢驗(yàn).ppt

中藥的檢驗(yàn) 化驗(yàn)室 2018年6月 中藥材及其炮制品的常用檢查 一般檢查限量檢查 雜質(zhì)水分總灰分酸不溶灰分 浸出物二氧化硫含量測(cè)定黃曲霉素 雜質(zhì)的來源 一是由中藥材原料中帶入 二是在生產(chǎn)制備過程中引入 三是貯存過程中受外界條件的影響 制劑的理化性質(zhì)改變而產(chǎn)生 雜質(zhì) 藥材中混存的雜質(zhì)系指下列各類物質(zhì) 一 來源與規(guī)定相同 但其性狀或部位與規(guī)定不符 二 來源與規(guī)定不同的物質(zhì) 三 無機(jī)雜質(zhì) 如砂石 泥塊 塵土等 雜質(zhì)檢查法 通則2301 檢查方法1 取規(guī)定量的供試品 攤開 用肉眼或放大鏡 5 10倍 觀察 將雜質(zhì)揀出 如其中有可以篩分的雜質(zhì) 則通過適當(dāng)?shù)暮Y 將雜質(zhì)分出 2 將各類雜質(zhì)分別稱重 計(jì)算其在供試品中的含量 注意 1 藥材中混存的雜質(zhì)如與正品相似 難以從外觀鑒別時(shí) 可稱取適量 進(jìn)行顯微 化學(xué)或物理鑒別試驗(yàn) 證明其為雜質(zhì)后 計(jì)入雜質(zhì)重量中 2 個(gè)體大的藥材 必要時(shí)可破開 檢查有無蟲蛀 霉?fàn)€或變質(zhì)情況 3 雜質(zhì)檢查所用的供試品量 除另有規(guī)定外 按藥材取樣法稱取 雜質(zhì)檢查法 通則2301 水分測(cè)定法 通則0832 第一法 費(fèi)休氏法 適用于多種有機(jī)和無機(jī)物中含水的測(cè)定 第二法 烘干法 適用于不含或少含揮發(fā)性成分的藥品 第三法 減壓干燥法 適用于含有揮發(fā)性成分的貴重藥品 第四法 甲苯法 適用于含揮發(fā)性成分的藥品 第五法 氣相色譜法 適用于中藥制劑中微量水分的測(cè)定 甲苯法測(cè)定水分 A為500mL的短頸圓底燒瓶 B為水分測(cè)定管 C為直形冷凝管 外管長(zhǎng)40cm 使用前 全部?jī)x器應(yīng)清潔 并置烘箱中烘干 甲苯法測(cè)定水分 取供試品適量 約相當(dāng)于含水量1 4ml 精密稱定 置A瓶中 加甲苯約200ml 必要時(shí)加入干燥 潔凈的沸石或玻璃珠數(shù)粒 將儀器各部分連接 自冷凝管頂端加入甲苯 至充滿B管的狹細(xì)部分 將A瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱 待甲苯開始沸騰時(shí) 調(diào)節(jié)溫度 使每秒鐘餾出2滴 待水分完全餾出 即測(cè)定管刻度部分的水量不再增加時(shí) 將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗 再用飽蘸甲苯的長(zhǎng)刷或其他適宜的方法 將管壁上附著的甲苯推下 繼續(xù)蒸餾5分鐘 放冷至室溫 拆卸裝置 如有水黏附在B管的管壁上 可用蘸甲苯的銅絲推下 放置 使水分與甲苯完全分離 可加亞甲藍(lán)粉末少量 使水染成藍(lán)色 以便分離觀察 檢讀水量 并計(jì)算供試品中的含水量 灰分測(cè)定法 通則02302 總灰分 中藥經(jīng)粉碎后加熱 高溫?zé)胱浦粱一?稱定重量計(jì)算結(jié)果 酸不溶性灰分 中藥經(jīng)高溫?zé)胱频玫降目偦曳旨酉←}酸處理 得到不溶于稀鹽酸的灰分 稱為酸不溶性灰分 總灰分測(cè)定法 稱取供試品2 3g 如需測(cè)定酸不溶性灰分 可取供試品3 5g 置熾灼至恒重的坩堝中 稱定重量 準(zhǔn)確至0 01g 緩緩熾熱 注意避免燃燒 至完全炭化時(shí) 逐漸升高溫度至500 600 使完全炭化并至恒重 根據(jù)殘?jiān)亓?計(jì)算供試品中總灰分的含量 酸不溶性灰分測(cè)定法 供試品先按總灰分測(cè)定的方法測(cè)定其總灰分 然后取所得的灰分 在坩堝中注意加入稀鹽酸約10ml 用表面皿覆蓋坩堝 置水浴上加熱10分鐘 表面皿用熱水5ml沖洗 洗液并入坩堝中 用無灰濾紙濾過 坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上 并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止 濾渣連同濾紙移至同一坩堝中 干燥 熾灼至恒重 根據(jù)殘?jiān)亓?計(jì)算供試品中含酸不溶性灰分的含量 灰分測(cè)定的注意事項(xiàng) 1 測(cè)定前先將供試品稱取適量粉碎 使其能通過2號(hào)篩 將粉末混合均勻后再取樣 2 如供試品不易灰化 可將坩堝放冷 加熱水或10 硝酸銨溶液2ml 使殘?jiān)鼭駶?rùn) 然后置水浴上蒸干 得到的殘?jiān)侔瓷厦嫠f的方法熾灼至坩堝內(nèi)容物完全灰化 浸出物測(cè)定法 通則2201 浸出物分為水溶性 醇溶性 揮發(fā)性醚三種方法 同時(shí)水溶性和醇溶性又分為冷浸法和熱浸法兩種 其方法相同 不同的是使用的溶劑 水溶性使用的是水 醇溶性除另有規(guī)定外 以各品種項(xiàng)下規(guī)定濃度的乙醇代替水溶劑 1 冷浸法樣品加水100ml 靜置24小時(shí)后 取續(xù)濾液20ml 水浴蒸干 干燥3小時(shí) 放冷 稱定重量 2 熱浸法樣品加溶劑50ml 稱定重量 靜置1小時(shí)后 連接冷凝管 加熱回流1小時(shí) 放冷 補(bǔ)足重量 取續(xù)濾液25ml 水浴蒸干 干燥3小時(shí) 放冷 稱定重量 二氧化硫殘留量測(cè)定法 通則2331 為什么要測(cè)定 方法硫磺具有漂白 增艷 防蟲等作用 某些中藥材在加工過程中有用硫磺熏蒸的習(xí)慣 殘留的S02可能影響人體健康 從2005版藥典開始規(guī)定 中藥材不再允許使用硫磺熏蒸 并要求對(duì)其進(jìn)行檢測(cè) 二氧化硫殘留量測(cè)定法 2015 A為1000ml兩頸圓底燒瓶 B為豎式回流冷凝管 C為 帶刻度 分液漏斗 D為連接氮?dú)饬魅肟?E為二氧化硫氣體導(dǎo)出口 另準(zhǔn)備電熱套及高濃度氮 取藥材或飲片細(xì)粉約10g 精密稱定 置兩頸圓底燒瓶中 加水300 400ml 連接回流冷凝管以及刻度分液漏斗 并給水 在冷凝管的上端E口處連接導(dǎo)氣管 將導(dǎo)氣管插入100ml錐形瓶底部 錐形瓶?jī)?nèi)加3 過氧化氫溶液50ml作為吸收液 使用前 加3滴甲基紅乙醇溶液指示劑 并用0 01mol L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色 開通氮?dú)?打開分液漏斗活塞 加入6mol L鹽酸溶液10ml 立即加熱兩頸圓底燒瓶?jī)?nèi)的溶液至沸 并保持微沸 1 5小時(shí)后 停止加熱 放冷后 用氫氧化鈉滴定液滴定 至黃色持續(xù)20秒鐘不褪 并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正 A為供試品消耗氫氧化鈉滴定液的體積 ml B為空白消耗氫氧化鈉滴定液的體積 ml C為氫氧化鈉滴定液濃度 mol L 0 032為每1ml氫氧化鈉滴定液 1mol L 相當(dāng)?shù)亩趸虻馁|(zhì)量 g W為供試品的重量 g 供試品中二氧化硫殘留量 mg g 6 含量 高效液相 測(cè)定法 通則0512 為什么要測(cè)定 方法簡(jiǎn)述注意事項(xiàng) 中藥組成復(fù)雜 產(chǎn)生療效的不是某單一成分 檢測(cè)任何一種活性成分均不能反映中藥的整體療效 但是借鑒化藥質(zhì)量控制模式 測(cè)定某一味藥味的有效成分 活性成分 指標(biāo)性成分的含量的方法 對(duì)于控制中藥質(zhì)量起著不可替代的重要作用 通過測(cè)定中藥中有效成分 毒性成分或某些指標(biāo)性成分的含量來衡量其生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性和中藥材的質(zhì)量?jī)?yōu)劣 以保證中藥的質(zhì)量 達(dá)到臨床用藥安全 有效的目的 檢查含量的必要性 本法是將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑 緩沖劑等作為流動(dòng)相 用泵將流動(dòng)相壓入裝有填充劑的色譜柱 注入供試品 經(jīng)流動(dòng)相帶入柱內(nèi) 用記錄儀記錄色譜圖 從而達(dá)到定性及定量的目的 本法應(yīng)用范圍比氣相色譜廣 只要樣品能制成溶液 就可進(jìn)行分析 尤其是中藥的含量測(cè)定 更為適用 高效液相測(cè)定法的原理 1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)根據(jù) 中國藥典 項(xiàng)下對(duì)各品種的規(guī)定 選擇色譜柱 流動(dòng)相 檢測(cè)波長(zhǎng) 并核對(duì)檢測(cè)后的理論板數(shù) 2 對(duì)照品溶液的制備根據(jù) 中國藥典 項(xiàng)下對(duì)各品種的規(guī)定 按其要求完成對(duì)照品的稱重 配制 3 供試品溶液的制備根據(jù) 中國藥典 項(xiàng)下對(duì)各品種的規(guī)定 按其要求完成樣品的粉碎 稱重 提取 制備 4測(cè)定法分別將對(duì)照品與供試品溶液按 中國藥典 要求注入色譜儀 通過所得數(shù)據(jù)用外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算 得出結(jié)果并打印保存圖譜 高效液相測(cè)定法方法簡(jiǎn)介 高效液相測(cè)定法注意事項(xiàng) 1 貯液器 盡可能使用HPLC的溶劑和試劑 含有緩沖鹽和非HPLC的流動(dòng)相一定要通過0 5um的過濾器 改變流動(dòng)相時(shí)應(yīng)防止交叉污染 陳舊的流動(dòng)相和用久了的試劑瓶應(yīng)定期廢棄 防止生長(zhǎng)微生物和組分改變 貯器內(nèi)壁定期清洗 里面的附件要經(jīng)常更換 2 泵 密封墊圈是最易磨損的部件 密封墊圈的損壞可引起系統(tǒng)的許多故障 最好3個(gè)月?lián)Q一次墊圈 要注意防止因泵堵塞造成的壓力過高而損壞柱塞桿或燒壞電機(jī) 延長(zhǎng)墊圈壽命的措施 1 每次把泵的緩沖液洗干凈 防止鹽沉積 泵要浸在無緩沖液的溶液或有機(jī)溶劑中 2 用HPLC級(jí)試劑 3 進(jìn)樣器 停機(jī)后要用溶劑沖洗干凈進(jìn)樣器內(nèi)的殘留的樣品和緩沖鹽 防止無機(jī)鹽沉積和樣品微粒造成閥轉(zhuǎn)子面磨損或阻塞 嚴(yán)禁用尖針頭進(jìn)樣 4 柱 防止柱性能下降的措施 1 溶劑的化學(xué)腐蝕性不能太強(qiáng) 2 避免微粒在柱頭沉降 3 泵上要裝壓力限制器 防止壓力過高沖擊過大 4 流動(dòng)相ph 7時(shí)用大粒度同種填料作預(yù)柱 5 柱頭加燒結(jié)不銹鋼濾片 需要時(shí)加保護(hù)柱 采用正確的制備樣品方法和經(jīng)常清洗柱也能延長(zhǎng)壽命 柱在不用時(shí)要保存好 要洗去緩沖液防止生長(zhǎng)微生物 應(yīng)加入大于10 的有機(jī)溶劑 將柱兩端用蓋擰緊 保持柱填料濕潤(rùn)不造成裂縫 5 檢測(cè)器 保持清潔 用后連同柱一起沖洗 提倡不定期用強(qiáng)溶劑反向沖洗檢測(cè)池 拆開柱 用脫氣流動(dòng)相 以防空氣泡卡在池內(nèi) 不用時(shí)不開燈 高效液相注意事項(xiàng) 由色譜柱引起的故障及解決辦法 黃曲霉毒素測(cè)定法 通則2351 為什么要測(cè)定 方法注意事項(xiàng) 檢查黃曲霉素的必要性 中藥材采集后干燥或貯存不當(dāng) 或在制備和加工過程中處理不善 可能污染在自然界普遍存在的黃曲霉而產(chǎn)生黃曲霉毒素 黃曲霉毒素具有極強(qiáng)的毒性和致癌性 故需對(duì)中藥材及中藥制劑中黃曲霉毒素含量進(jìn)行控制 黃曲霉的基本結(jié)構(gòu) 黃曲霉毒素是一類結(jié)構(gòu)相似的化合物 其基本結(jié)構(gòu)都有二呋喃和香豆素 黃曲霉毒素在紫外線照射下 都能了出熒光 根據(jù)熒光顏色 Rf值及結(jié)構(gòu)等不同 分別命名為B1 B2 G1 G2 M1 M2 P1 Q等 B1 B2 G1 黃曲霉毒素測(cè)定法 2015 本法系用高效液相色譜法 通則0512 測(cè)定藥材 飲片及制劑中的黃曲霉毒素 以黃曲霉毒素B1 B2 G1 G2總量計(jì) 除另有規(guī)定外 按下列方法測(cè)定 規(guī)定 B1 5 g kg G2 G1 B2 B1的總量 10 g kg 黃曲霉毒素測(cè)定法 2015 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑 以甲醇 乙腈 水 40 18 42 為流動(dòng)相 流速每分鐘0 8ml 采用柱后衍生法檢測(cè) 衍生溶液為0 05 的碘溶液 取碘0 5g 加入甲醇100ml使溶解 用水稀釋至1000ml制成 衍生化泵流速每分鐘0 3ml 衍生化溫度70 以熒光檢測(cè)器檢測(cè) 激發(fā)波長(zhǎng) ex 360nm 或365nm 發(fā)射波長(zhǎng) em 450nm 兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1 5 黃曲霉毒素測(cè)定法 2015 混合對(duì)照品溶液的制備精密量取黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)品 黃曲霉毒素B1 B2 G1 G2標(biāo)示濃度分別為1 0 g ml 0 3 g ml 1 0 g ml 0 3 g ml 0 5ml 置10ml量瓶中 用甲醇稀釋至刻度 作為儲(chǔ)備液 精密量取儲(chǔ)備液1ml 置25ml量瓶中 用甲醇稀釋至刻度 即得 黃曲霉毒素測(cè)定法 2015 供試品溶液的制備取供試品粉末約15g 過二號(hào)篩 精密稱定 加入氯化鈉3g 置于均質(zhì)瓶中 精密加入70 甲醇溶液75ml 高速攪拌2分鐘 攪拌速度大于11000轉(zhuǎn) 分鐘 離心5分鐘 離心速度2500轉(zhuǎn) 分鐘 精密量取上清液15ml 置50ml量瓶中 用水稀釋至刻度 搖勻 用微孔濾膜 0 45 m 濾過 量取續(xù)濾液20 0ml 通過免疫親合柱 AflaT est P 流速每分鐘3ml 用水20ml洗脫 洗脫液棄去 使空氣進(jìn)入柱子 將水?dāng)D出柱子 再用適量甲醇洗脫 收集洗脫液 置2ml量瓶中 并用甲醇稀釋至刻度 搖勻 即得 黃曲霉毒素測(cè)定法 2015 測(cè)定法分別精密吸取上述混合對(duì)照品溶液5 l 10 l 15 l 20 l 25 l